消退素D1抑制内毒素诱导大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2表达的研究

目的 探讨消退素D1对原代肺成纤维细胞(LF)环氧合酶-2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)表达的影响.方法 分离、纯化、鉴定得到LF,用内毒素(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,并利用细胞增殖/毒性检测试剂MTT检测出成纤维细胞急性炎症模型的最适LPS浓度和药物干预时间.分别应用不同浓度(0、10、50及100 nmol/ml)的消退素D1作用于经过LPS诱导的体外培养原代LF.采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液PGE2水平,同时应用Western-blot检测原代LF COX-2蛋白的表达.结果 用1μg/ml LPS干预体外培养的原代LF6h能建立较为合理的急性炎症模型.消退素D1能抑制LPS诱导的原代LF COX-2蛋白的表达及上清液PGE2水平,并呈剂量依赖性.结论 消退素D1能抑制LPS诱导的原代LF COX-2及PGE2的表达.     

芩丹胶囊对血管外膜成纤维细胞的作用机制

目的  探讨芩丹胶囊（QC）含药血清对动脉血管外膜成纤维细胞（AF）的作用机制。方法  采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,MTT法观察大［750mg/（kg·d）］、小［150mg/（kg·d）］剂量的QC含药血清对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的大鼠胸主动脉成纤维细胞的增殖的影响;实时定量PCR及western blot分别检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SM actin）和Smad3的基因及蛋白表达情况。结果  大、小剂量QC含药血清呈剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的AF的增殖（P＜0.05）,且用药组α-SM actin和Smad3基因及蛋白的表达较单纯刺激组显著降低（P＜0.05）。结论  QC含药血清通过干扰TGF-β1/Smad信号转导通路抑制AF增殖和分化,从而改善和逆转动脉血管外膜重构。     

转化生长因子-β1通过产生活性氧诱导骨髓间充质干细胞分化为肌成纤维细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）向肌成纤维细胞分化的机制。方法：采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSCs,将对数生长期的P3~P5代BMSCs作为实验细胞,使用不同浓度的TGF-β1诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,并在此基础上观察加入自由基清除剂N-乙酰 半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对其分化的影响。采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测BMSCs分化指标α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ 型胶原［collagen α1(Ⅰ),Col α1(Ⅰ)］和Ⅲ 型胶原［collagen α1(Ⅲ), Col α1(Ⅲ)］的表达情况。使用2’,7’-dichlorohydrofluorescein diacetate（DCFH-DA）预孵育BMSCs 15 min,然后加入TGF-β1处理不同时间,检测TGF-β1刺激下BMSCs中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,并使用高内涵方法对BMSCs中产生的ROS进行统计分析。结果：TGF-β1可以剂量依赖地诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,上调α-SMA、Col α1(Ⅰ)和Col α1(Ⅲ)的表达。TGF-β1诱导BMSCs分化的作用可以被NAC阻断。TGF-β1在BMSCs中能够引起ROS的产生,且该过程迅速而短暂,当TGF-β1作用30 min时,其在BMSCs中诱发的ROS达到峰值。结论：TGF-β1通过产生ROS介导BMSCs向肌成纤维细胞分化。     

LPS刺激牙龈成纤维细胞PGE_2的产生及COX-2基因表达

目的:本实验观察两种重要的牙周致病菌（牙龈卟啉菌、中间普氏菌）细胞表面脂多糖（LPS）刺激人牙龈成纤维细胞后PGE2水平的变化,及PGE2产生过程中COX-1和COX-2的表达。方法:采用热酚-水法抽提牙龈卟啉菌ATCC33277和中间普氏菌ATCC25611细胞表面脂多糖,刺激体外培养的人牙龈成纤维细胞,通过放射性免疫技术检测上清液中PGE2的含量。同时利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学的方法,进一步观察牙龈成纤维细胞内COX-1、COX-2 mRNA和COX-2蛋白水平的表达。结果:在LPS的作用下,PGE2水平明显升高,含量以剂量依赖和时间依赖的方式递增（＊P<0.01,＊＊P<0.01）。对COX-1和COX-2 mRNA和免疫组化的研究表明,未受刺激的牙龈成纤维细胞COX-2 mRNA和蛋白水平表达阴性,受LPS作用后呈阳性表达。COX-1mRNA在正常和受刺激的牙龈成纤维细胞中均呈阳性表达,且表达不受LPS作用的影响。结论:牙龈卟啉菌和中间普氏菌LPS能够刺激牙龈成纤维细胞分泌PGE2,PGE2水平主要受COX-2 mRNA转录水平的影响,与COX-1的表达无明确相关性。     

脂氧素A4通过ERK1/2通路调控气道上皮细胞上皮间质转化

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对气道上皮细胞上皮间质转化（EMT）和卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘小鼠模型气道重塑的影响及其可能机制。方法：将BALB/c小鼠分为4组：对照组、OVA组、LXA4组和OVA+LXA4 组,HE和PAS染色观察肺组织病理改变。将BEAS-2B细胞分为6 组：对照组、白介素（IL）-4 组、IL-13组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组和LXA4 预处理组。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）mRNA水平;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及ERK1/2、pERK1/2蛋白表达水平。结果：小鼠体内实验中,与对照组相比,OVA诱导哮喘小鼠模型出现肺泡壁增厚、间质水肿、炎性细胞浸润和肺组织破坏,肺组织PAS染色强阳性,提示杯状细胞化生和气道黏液分泌增加,而LXA4预处理可以明显改善述OVA诱导的小鼠气道病变。BEAS-2B细胞实验中,TGF-β1组与对照组相比,细胞连接变得松散,细胞间隙增加,形态呈长梭形;IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组较TGF-β1组细胞形态改变更为明显;与对照组相比,TGF-β1组细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达显著降低,α-SMA mRNA和蛋白表达明显升高,pERK蛋白表达增加;与TGF-β1 组比,IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组α-SMA mRNA和蛋白表达明显升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显降低,pERK蛋白表达增加更为明显;而LXA4能抑制TGF-β1和IL-4、IL-13共刺激诱导的Beas 2B细胞α-SMA mRNA和蛋白表达升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达降低以及pERK表达增加。结论：LXA4可以抑制OVA诱导哮喘小鼠的气道重塑。Th2源性细胞因子IL-4和IL-13提供的慢性炎症环境有利于TGF-β1诱导气道上皮细胞发生EMT。LXA4能抑制气道上皮细胞EMT,这一过程可能依赖于阻断ERK1/2磷酸化。     

丹酚酸B对人肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达的影响及其机制

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对人肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1) / Smad信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞作用的信号机制。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,随机分为对照组（未加入TGF-β1或Sal B）、 Sal B(10 μmol•L^-1)组、 TGF-β1(10 μg•L^-1)组和TGF-β1（10 μg•L^-1）+ Sal B（10μmol•L^-1）组。Western blotting 法检测各组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TGF-βⅠ型受体（TβRⅠ）和Smad7蛋白表达。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与对照组比较, Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TβRⅠ和 Smad7蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）;与TGF-β1组比较,TGF-β1 + Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均下降（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过抑制肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路,从而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。     

脂氧素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症相关因子的影响及机制

目的：研究脂氧素（1ipoxin A4）对脂多糖（1ipopo-lysaccharide,LPS）诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中相关炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、环加氧酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血红素氧化酶-1（HO-1）和白介素-10（IL-10）的影响,并进一步探讨其内在分子机制。方法：以1mg／L LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型,分别用脂氧素A4或脂氧素A4和ZnPPIX干预LPS刺激的RAW264.7细胞24h后,收集培养上清并提取细胞总蛋白,酶联免疫法测定上清中TNF-α,IL-10和PGE2浓度,免疫印迹法检测细胞COX-2和HO-1的蛋白表达量,分光光度计分析HO-1的活性。结果：1mg／L LPS明显诱导TNF-α,COX-2和PGE,的生成,也适度增加IL-10及HO-1的产生;脂氧素A4可抑制LPS诱导的TNF-α（P〈0.01雠LPS组）,COX-2和PGE2（P〈0.01伽LPS组）的生成,却进一步增加IL-10（P〈0.01 vs LPS组）和HO-1表达量和活性（P〈0.01 vs LPS组）;ZnPPIX可减弱脂氧素A。对LPS诱导TNF-α（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）,COX-2和PGE2（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）的生成抑制作用,同时也下调IL-10的生成量。结论：脂氧素A4可抑制LPS诱导的巨噬细胞中致炎介质TNF-α,COX-2及PGE2的生成,同时也促进IL-10的产生,这种效应在一定程度上是通过上调HO-1表达和活性实现。     

粉防己碱对心肌成纤维细胞增殖、活化的影响

目的： 探讨粉防己碱（tetrandrine,Tet）对大鼠心肌成纤维细胞增殖、活化的影响。方法： 采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8C,CCK-8）的方法检测不同浓度Tet对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用;采用蛋白质印迹（Western blot）法检测Tet对由转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β）诱导的心肌成纤维细胞 β-链蛋白（β-catenin）、波形蛋白（vimentin,Vm）、纤连蛋白（fibronectin,Fn）及平滑肌α 肌动蛋白（smooth muscle α-actin,SMA）的表达上调的影响作用;采用实时荧光定量PCR的方法检测Tet作用下,TGF-β诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原（collagen-1,Col-1）和Ⅲ型胶原（collagen-3,Col 3）的表达上调的变化。结果：CCK-8检测结果显示,分别用0.5、1、2、4、8 μmol/L的Tet处理心肌成纤维细胞,其增殖活力分别下降至对照组的94.4%、84.9%、74.9%、63.8%、50.3%,差异有统计学意义（所有P值<0.05;1、2、4、8 μmol/L处理组P值<0.001）。Western blot检测结果显示：5 μg/L 的TGF-β显著上调β-catenin、Vm、Fn及SMA的表达（P值分别为0.001、0.008、0.010、0.001）,而用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞后,可以阻断由TGF-β诱导的β-catenin、Fn、SMA的表达上调（P值分别为0.009、0.005、0.019）,但不改变Vm的表达变化（P>0.05）。荧光定量PCR检测结果表明：用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞,可以减弱由TGF β诱导的Ⅰ型及Ⅲ型胶原的表达上调,差异有统计学意义（P<0.001）。结论：Tet可以显著抑制心肌成纤维细胞的增殖,并阻断由TGF-β诱导的心肌成纤维细胞活化,据此推断,Tet可能具有抗心肌纤维化的作用,进而阻断心肌重塑。     

甘草酸二铵对脂多糖诱导下人牙周膜成纤维细胞表达前列腺素E_2的影响

目的脂多糖（LPS）干预下,不同浓度甘草酸二铵（Diammonium glycyrrhizinate,DG）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）表达前列腺素E2（PGE2）的影响。方法取用组织块法原代培养的人牙周膜成纤维细胞,对细胞进行形态学及免疫学鉴别后,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的甘草酸二铵进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化。结果不同浓度甘草酸二铵能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随甘草酸二铵浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势（P〈0.05）。结论甘草酸二铵可能对LPS诱导的HPDLFs致炎症过程中表达PGE2有重要的抑制作用,为临床牙周病治疗提供新的科研资料。     

过氧化酶体增殖物激活受体α抑制血管紧张素Ⅱ促心肌纤维化作用的试验研究

目的：探讨体外条件下过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促心肌纤维化的抑制作用。方法：培养新生Wistar大鼠原代心脏成纤维细胞(CFs),以AngⅡ10-7mol/L刺激,体外模拟心肌纤维化,再用不同浓度的PPARα激动剂苯扎贝特作用于细胞。用MTT比色法检测CFs的增殖情况,采用RT PCR法检测Ⅰ型胶原（collagen I）、基质金属蛋白酶（MMP） 2、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP)-1 mRNA的表达。 结果：① AngⅡ刺激后12h,CFs的collagen Ⅰ、TIMP-1 mRNA表达明显增加,MMP-2 mRNA表达减少;苯扎贝特呈剂量依赖性抑制AngⅡ的作用, PPARα特异性抑制剂MK886可以完全抑制苯扎贝特的作用;② AngⅡ明显促进CFs增殖,苯扎贝特不能抑制AngⅡ的促增殖作用。结论： PPARα途径活化后抑制AngⅡ的促心肌纤维化作用。     

Smad泛素化调节因子2在转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞活化中的作用及其分子机制

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10 μg·L^-1 TGF-β1作用1、2和6 h(分别为TGF-β1 1 h组、TGF-β1 2 h组和TGF-β1 6 h组),并设对照组(不加TGF-β1), RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2 mRNA和蛋白的表达水平。MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组 (10 μg·L^-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 μg·L^-1TG F-β1+Control siRNA)和Smurf2 siRNA转染组(10 μg·L^-1 TGF-β1+Smurf2 siRNA)。Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-β Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Smad2和Smad3 mRNA和蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且随着TGF-β1作用时间的延长,其表达水平呈逐渐增加的趋势;与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05)。与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均下降(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2 siRNA组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平均升高(P<0.05),而Smurf2 siRNA组和TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平均明显下降(P<0.05);与TGF-β1组比较,Smurf2 siRNA组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1组和Smurf2 siRNA组细胞中TβRⅠ mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而Smurf2 siRNA组和TGF-β1组细胞中TβRⅠ mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组细胞中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: Smurf2可能通过泛素化降解Smad7和SnoN,参与调控TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥其促进TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。     

凋亡细胞调控巨噬细胞表达IL-12家族细胞因子的水平

［摘要］ 目的观察凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素12 （interleukin-12,IL-12）家族细胞因子表达的影响。 方法将小鼠巨噬细胞系RAW264.7（RAW 细胞）和小鼠腹腔巨噬细胞分别分为空白对照组、脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激组（LPS组）、凋亡细胞刺激组（apo组）、脂多糖+凋亡细胞刺激组（LPS+apo组）,实时定量PCR检测各组细胞刺激前后mIL-12p35、mIL-12p40、mIL-23p19水平。采用酶联免疫吸附测定方法检测各组激活的RAW细胞培养液中IL-10、前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）和转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）的含量。 结果RAW细胞和小鼠腹腔巨噬细胞LPS组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19 mRNA表达量高于空白对照组和apo组,LPS+apo组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19 mRNA表达量高于空白对照组和apo组,低于LPS组（P＜0.05）。LPS组和LPS+apo组IL-10、PGE2、TGF-β浓度均高于对照组,LPS+apo组TGF-β浓度高于对照组和LPS组（P＜0.05）;LPS组和LPS+apo组IL-10、PGE2浓度差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论凋亡细胞抑制活化巨噬细胞IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19 mRNA的表达。凋亡细胞对IL-10和PGE2分泌无影响,但促进TGF-β的分泌。     

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的：探讨低氧/低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对人肝内胆管上皮细胞（HIBEC）上皮-间质转化（EMT）的诱导作用及其分子机制。方法：HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果：与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高（P＜0.05）。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制（P＜0.05）。结论：低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。     

GPC3-WNT-JNK通路介导脂多糖诱导肺局部细胞炎症

目的：探讨GPC3在脂多糖（LPS）诱导的气道上皮细胞局部炎症微环境中的重要作用,并以GPC3-WNT通路介导的调控机制为核心进一步研究LPS诱导的肺局部炎症分子机制。方法：LPS经气道滴入小鼠后模拟肺损伤模型,检测肺泡灌洗液及肺组织中GPC3表达情况以及其表达位置。培养人肺16HBE细胞,LPS刺激16HBE细胞建立急性炎症细胞,予以RT-PCR检测其细胞中GPC3、TNF-α和TGF-β的mRNA表达情况,予以Western Blot检测GPC3、TGF-β和TNF-α蛋白表达情况。加入外源性GPC3刺激16HBE细胞,建立GPC3高表达细胞模型,检测炎症因子TNF-α和TGF-β mRNA的表达情况。不同浓度GPC3-WNT通路抑制剂处理细胞,观察上述指标变化。结果：LPS诱导ALI小鼠模型显示GPC3表达水平显著提高。此外,LPS在体外也产生了GPC3表达升高的现象。同时,外源性GPC3蛋白刺激支气管上皮细胞产生多种炎症因子,可能提示GPC3具有促炎作用。此外,GPC3诱导支气管上皮细胞系炎性细胞因子的产生被WNT-JNK通路的抑制剂阻断,提示ALI/ARDS过程中GPC3参与肺局部的潜在信号通路。结论：LPS刺激支气管上皮细胞的过程中存在一条线性信号通路即GPC3-WNT-JNK。这一发现可能为ALI/ARDS的治疗和生物标志物的开发提供一个新的分子靶点和分子机制。     

异丹叶大黄素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的影响

目的 探究异丹叶大黄素(ISO)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及潜在机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,采用不同浓度ISO处理细胞,CCK-8法检测细胞活力。使用200 ng/ml LPS诱导RAW264.7细胞,以ISO、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行干预,Western blot检测各组细胞中炎症介质白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、P65、磷酸化P65(p-P65)、IκB、磷酸化IκB(p-IκB)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、高迁移率组蛋白B1(HMGB1)以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、P62的表达,DCFH-DA探针检测各组细胞内活性氧(ROS)的变化。采用腹腔注射LPS(15 mg/kg)方法构建小鼠ALI模型,HE染色观察各组肺组织形态的病理变化,Western blot检测各组肺组织中炎症介质和自噬相关蛋白的表达,流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中ROS的含量。结果 ISO可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2、HMGB1的表达,抑制ROS的产生,促进LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表达,降低P62的表达,激活自噬通路(P均<0.05);当使用自噬抑制剂3-MA干预后可显著增加p-P65/P65、p-IκB、iNOS、COX-2、HMGB1的表达且降低IκB的表达(P均<0.001),并促进ROS的产生。ISO能够改善LPS诱导的ALI小鼠的肺组织病理变化,显著抑制肺组织中p-P65/P65、p-IκB、iNOS、COX-2、HMGB1的表达且促进IκB的表达(P均<0.001),减少BALF中ROS的含量,3-MA则会逆转ISO的保护作用。结论 ISO对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用,其机制可能与ISO激活巨噬细胞自噬有关。     

金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

目的探讨金盏花苷E对脂多糖（LPS）诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法CCK-8实验检测不同浓度（0、 2、4、6、8、10、20、25、30 μg/mL）的金盏花苷E对RAW264.7 细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E（0、6、8、10 μg/mL）预处理 RAW264.7细胞2 h,然后用LPS（100 ng/mL）刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检 测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7 细胞内ROS含 量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20 μg/mL时对RAW264.7细 胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的促炎 细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0 μg/mL组抑制作用尤为显著（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激 活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生（P<0.01 vs LPS组）。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途 径,抑制LPS诱导的炎症反应。