用双单克隆抗体ELISA定量测定人血清载脂蛋白B_1

本实验采用自身不分泌型的Sp2/0骨髓瘤细胞与纯化的载脂蛋白B_(100)(apo B_(100))免疫BALB/c小鼠脾细胞融合。经筛选、检测获得三株分泌apo B_(100)的杂交瘤细胞系,制备了高效价的apo B_(100)单克隆抗体(McAb)。用此McAb建立了检测血清(浆)apo B_(100)抗原的双McAb-ELISA间接夹心法,采用同样的抗apo B_(100)McAb作为包被和第二抗体,以酶交联物作指示抗体。结果表明该法板内变异系数为2.01％。在已知apo B_(100)含量的样品中加入不同浓度的参考标准进行回收实验,低、高浓度各测四次,结果平均回收率为98.20％,102.12％。经     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法测定apo B方法的研究

以低密度脂蛋白为抗原,用杂交瘤技术获得三株抗人apo B细胞株,用混合的单克隆抗体作酶标记双抗体夹心法测定人血清apo B。apo B抗体的标记用辣根过氧化物酶(HRP),对ELISA双抗夹心法的实验条件进行了选择,75份血清与卫生部北京老年医学研究所应用的多克隆抗体激光比浊法进行了对照,结果基本相似。经临床应用40例正常人血清apo B含量为0.85±0.20g/L高脂血症患者24例含量为1.34±0.35g/L。     

抗体基因工程——重组抗体

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。为此,人们试着获得人型免疫球蛋白(Ig)的McAb。目前除了人-人杂交瘤外,用抗体基因工程方     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

脂蛋白(α)单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

应田淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清脂蛋白(α)(LP(a))杂交瘤细胞株(BH6、BH7、BH11和BH21),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:BH6为IgG1,BH7、BH11和BH21均为IgG2a,腹水效价为1×10~(-7)。特异性测定:LP(α)McAb与载脂蛋白(apo)AⅠ、AⅡ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E,人血清白蛋白,纤维蛋白溶酶原(pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实,BH6和BH21为识别LP(α)上同一抗原决定簇的McAb;BH7和BH11则为针对LP(α)上另一抗原决定簇的McAb。分别利用单株和混合株McAb标记酶建立了可应用于人血清LP(α)含量测定的ELISA双抗体夹心法。     

杂交瘤技术的进展(文献综述)

<正> 自从1975年Kohler和Milstein建立杂交瘤技术以来,单克隆抗体(McAb)的研制及应用迅猛发展。McAb的应用主要集中在体内诊断、理论性研究以及纯化和鉴定抗原等方面,临床应用尚有一定困难。近年来杂交瘤技术又有进展,为HcAb的制备和应     

分泌肾综合征出血病热毒单克隆抗独特型抗体的杂交瘤细胞系的建立

将HFRS病人Ab1免疲BALB／c小鼠，取脾细胞与Sp2／0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合，制备了HFRSV的McAb2。初期融合试验中用ELISA间接法检测阳性克隆,阳性率为3．2～7．4％。其中5株杂交瘤经克隆化后阳性率达到100％。特异性鉴定表明，5种McAb2只与HFRS病人Ab1结合，不与正常人Ig结合。McAb2所识别的独特型是人Ab1与部分小鼠抗HFRSV的McAb上的交叉反应独特型。本文还应用McAb2作为探针，对抗HFRSV的单克隆抗体的独特型进行了分析.     

单克隆抗体亲和力的测定及其意义

随着单克隆抗体杂交瘤技术日益广泛的应用,需要对获得的单克隆抗体(McAb)进行系统地分析鉴定,以确定其在各种免疫学试验中的价值。除了对McAb的免疫球蛋白链理化性质、结合抗原的特异性、以及检测抗原时的敏感度进行分析外,测定McAb对特定抗原的结合亲和力(affinity),对选择合适的McAb用于某一特定目的十分重要。     

用抑制性单克隆抗体对恶性疟原虫裂殖体和裂殖子表面抗原的鉴定

根据体外抑制试验证明,94D_1,94C_3,92D:,9_3A_3,9 B和9_3D_4等6株McAb对恶性疟原虫的增殖有明显的抑制活性,为了分析这些McAb相应的靶抗原以及进一步的提取和纯化。我们首先对上述靶抗原的理化特性作了初步鉴定。用葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫吸附柱自小鼠杂交瘤腹水中提取纯化抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。纯化后的单克隆抗体与溴氰活化的琼脂糖珠(Sepharose 4B)制备免疫吸附柱。将~(125)I—标记的恶性疟原虫tritonX—100提取物通过上述亲和层析柱,洗脱物经透析浓缩后,用SDS—PAGE—放射自显影鉴定与保护性McAb对应的靶抗原的分子量。同时用提纯后的McAb与恶性疟原     

ABO血型McAb取代常规人血清血型试剂的可行性探讨

为了获得可用于大量细胞培养生产血型单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,本文在7次细胞融合中,建立了35种分泌抗A、抗B McAb的细胞株,并对其细胞培养上清抗体效价≥1:128的6种McAb进行特性分析和临床验证,实验结果表明,这些细胞具有工业生产血型 McAb的潜力,本文对所得McAb替代现用人血清血型试剂的可行性进行探讨。     

载脂蛋白B100单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和应用

利用顺序超速离心法从正常人血浆中分离低密度脂蛋白,密度为1.030～1.05g/ml,免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合试验,成功地建立了3株持续稳定地分泌载脂蛋白B100单克隆抗体(Apo B100)的杂交瘤细胞系,并进行了鉴定分析。用纯化的ApoB100抗原进行ELISA实验,显示具有特异性;特异性阻断试验表明该抗体只能被Apo B100吸收及阻断;聚丙烯酰胺盘状电泳分析,杂交瘤腹水有一特异的明显区带;此外,进行了免疫球蛋白类型鉴定及柒色体检查。经临床应用,84例正常人血清Apo B100含量为78.64±34.75mg％;50例高胸血症患者为197.8±42.8mg％,两组平均值比较,差异非常显著(P<0.01)。Apo B100McAb可作为检测血清ApoB100的诊断试剂。     

单克隆抗体制品质量控制中的若干方法学问题

随着B淋巴细胞杂交瘤技术的普及以及越来越多的单克隆抗体(McAb)制品进入临床研究及应用,McAb制品的质量控制已成为一个不容忽视的课题。McAb制品的质量控制主要是指对该制品的制备过程及最终产品进行监控,以期获得化学纯度及生物学     

骨髓瘤蛋白(IgDλ)独特型单克隆抗体的制备

本文用从1例骨髓瘤患者(IgDλ)尿中提取的λ链作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过两次融合,分别经3～4次克隆后获得86株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,经鉴定其中15株为抗独特型McAb。其中12株仅与同源性λ链和IgD反应,不与正常人λ链,k链,IgG、IgA、IgM、IgD、IgE及白蛋白(HSA)和一系列副球蛋白反应.间接免疫荧光法证明,抗独特型McAb与骨髓瘤患者外周血淋巴细胞和骨髓细胞阳性率高达23%,不与正常人群外周血淋巴细胞和骨髓细胞反应,其中部分McAb与实验室培养的浆细胞瘤株呈现阳性反应.     

抗可溶性抗原鼠单克隆抗体的特性分析和鉴定

<正> 随着小鼠B淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体(McAb)技术的发展,预计今后80％左右的常规动物多克隆抗体(PcAb)将被McAb取代。McAb在分子结构、亲和力、稳定性、效价和抗原位点(或称决定簇)特异性方面都与PcAb不同,因而在实际工作中必须对获得的McAb进行更多的鉴定,以使成为更加稳定、标准和特异的制剂。近几年来,我们研究室     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

抗人μ链单克隆抗体特性鉴定及临床初步应用

<正> IgM是血清中重要的免疫球蛋白之一,其含量测定与许多疾病的诊断有密切关系。我们从巨球蛋白血症患者血清中纯化了IgM作为抗原免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术获得了分泌抗入μ链单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对此McAb特性进行鉴定及临床初步应用。 一、特性鉴定: (一)所获二个细胞株(2D_6、E_4)的染色体分别     

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定

用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。     

小鼠IgG_1抗血清的制备

<正> 小鼠IgG分有IgG_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)和IgG_3四种亚类,现用B淋巴细胞杂交瘤所分泌的单克隆抗体(McAb),均属一定的Ig及其亚类,因此需用相应的抗血清进行鉴定。这类抗血清制备较难、国内尚无产品供应。我们利用杂交瘤细胞在培养液中分泌的McAb为原料,经纯化和免疫家兔,制得较为满意的兔抗鼠IgG_1血清,鉴于本法操作简便、经济实效,特介绍如下。     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。     

四种抗人IgA单克隆抗体的特性研究

<正> 杂交瘤技术自1975年建立以来就引起了广泛的关注。目前抗免疫球蛋白的单克隆抗体(McAb)已是实验与临床研究的重要试剂,其中抗人IgA McAb国内外已开展了一定的工作。夏恺等报道,建立了四株分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,并应用于鼻咽癌的早期诊断等。国外也有报道,应用其于巨细胞病毒感染的诊断及B细胞发育分化的研究等。 作者建立了二林分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,5A6和2F7,其分泌抗