骨肉瘤高转移细胞SOSP—M1生物学稳定性及组织学起源的鉴定

目的 检测人骨肉瘤细胞高转移亚系SOSP-M1在裸小鼠体内传代过程中的生物学稳定性并鉴定其组织学特性。方法 利用原位移植将细胞系在33只裸鼠体内连续传代,组织块培养收集各代肺转移灶的肿瘤细胞。观察各代肿瘤细胞致瘤率、转移率、形态结构、骨形成蛋白、波形蛋白,肌动蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达情况以及遗传学方面的变化。结果 各代肿瘤细胞致瘤率均为100%,体内增殖稳定,肺转移率在80%以上,其显微及超微结构形态,抗原表达、染色体数目及结构变化均符合人骨肉瘤的特征。结论 该细胞亚系在裸鼠体内传代生物学特性相对稳定,是人骨肉瘤实验研究的良好模型。     

骨肉瘤高转移细胞SOSP-M_1生物学稳定性及组织学起源的鉴定

目的　检测人骨肉瘤细胞高转移亚系SOSP M1 在裸小鼠体内传代过程中的生物学稳定性并鉴定其组织学特性。　方法　利用原位移植将细胞系在 33只裸鼠体内连续传代 ,组织块培养收集各代肺转移灶的肿瘤细胞 ,观察各代肿瘤细胞致瘤率、转移率、形态结构、骨形成蛋白、波形蛋白、肌动蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达情况以及遗传学方面的变化。　结果　各代肿瘤细胞致瘤率均为 10 0 % ,体内增殖稳定 ,肺转移率在 80 %以上。其显微及超微结构形态、抗原表达、染色体数目及结构变化均符合人骨肉瘤的特征。　结论　该细胞亚系在裸鼠体内传代生物学特性相对稳定 ,是人骨肉瘤实验研究的良好模型。     

人肝门部胆管癌转移动物模型的建立及生物学特性研究

目的利用人肝门部胆管癌细胞系（FRH-0201）接种裸鼠脾脏，建立肝、肺转移模型。方法将FRH-0201细胞系（120代）接种于7只Balb／c裸小鼠脾脏。出现转移时，将转移瘤行组织病理学及超微结构观察。将转移的肿瘤行细胞培养，再次接种裸鼠脾脏，观察转移成瘤情况。结果脾脏局部成瘤率为100％（7／7），转移瘤发生率14．3％（1／7）。转移瘤细胞再次接种于裸小鼠脾脏，转移发生率100％。转移瘤电镜显示典型恶性细胞特征。转移瘤细胞染色体众数19条，主流范围18～44条。结论该实验所建立的肝门部胆管癌转移瘤，符合恶性肿瘤的特点，与人肝门部胆管癌生物学特性一致。     

免疫双缺陷鼠人乳腺癌转移模型的生物学特性研究

目的：采用原位移植法对立人乳腺癌免疫双缺陷鼠-SCID转移模型并研究移植瘤的生物学特性。方法：将人乳腺癌细胞系MDA-MB-231瘤块原位移植于6只SCID鼠乳房的脂肪垫上，用其癌转移淋巴结传代共传18代68只。采用光镜、电镜、免疫组织化学等手段对各代移植瘤的形态特征、移植瘤的侵袭和转移等生物学特性进行研究。结果：肿瘤移植成功率为97％，液氮冻存复苏移植成功率为100％，荷瘤小鼠体内出现淋巴道转移，9代后转移率为95％。原位移植瘤病理组织学结果表明移植瘤的形态学特点与原始细胞系完全一致，而原代与晚代移植瘤之间的超微结构有差异，显示进一步恶化的特征。多指标免疫组织化学检测表明，原代与晚代移植瘤之间存在有癌基因及蛋白表达的差异。结论：该模型为有乳腺癌的研究的较理想模型。     

裸鼠人肝癌原位移植多药耐药模型的建立及其耐药机制的探讨

目的　在体内建立人肝癌裸小鼠原位移植多药耐药模型,并研究其耐药机理。方法采用人肝癌（BEL-7402）裸小鼠（4～6周龄）原位移植,给予阿霉素(1.5mg/kg体重,每周1次)腹腔注射诱导耐药（共8周）,经四唑蓝(MTT)快速比色法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P-糖蛋白（P-gp）的表达,并用罗丹明试验观察该蛋白功能。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征,实验组肝癌细胞表面P-gp表达为(75.45±5.67)%,而对照组表达仅(4.25±1.28)%,差异有非常显著性（P＜0.01）,对阿霉素的耐药倍数提高了16.67倍,对羟基喜树碱具有交叉耐受性（13.67倍）。耐药细胞表面P-gp有较强的药物外排功能。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生,其耐药倍数与临床肝细胞癌相似。该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生机制以及逆转其多药耐药性具有重要价值。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型的建立

目的 建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型.方法 采用人原发性胃恶性淋巴瘤术中新鲜瘤组织块植入裸小鼠胃壁黏膜下层,观察原位移植的成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学）、染色体核型和流式细胞分析.结果在裸小鼠体内建成了一株人原发性胃恶性淋巴瘤原位移植高转移模型（HGBL-0305）.移植瘤的组织病理学为原发性胃弥漫性大B细胞淋巴瘤.免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD22、CD79α阳性,CD3、CD7阴性.染色体众数范围56～69条;移植瘤细胞DNA指数为1.47±0.12,均为异倍体.目前该瘤株在裸鼠体内生长4年,已经传至45代,共移植裸鼠156只;肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃内自主侵袭性生长,浸润破坏胃壁各层组织结构.HGBL-0305模型的肝转移率为69.5%,脾转移率为55.6%,淋巴结转移率为45.7%,腹腔种植转移率为30.5%.结论 HGBL-0305模型是成功的人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植自发性高转移模型,完整地模拟了人原发性胃恶性淋巴瘤患者的自然临床病理过程,为研究原发性胃恶性淋巴瘤发病机制、转移生物学和抗转移治疗提供了理想的动物模型.     

淋巴因子活化杀伤细胞与重组白细胞介素—2预防胃癌术后腹膜 …

证实淋巴因子活化杀伤细胞与重组细胞介素－２对胃癌术后腹膜种植转移的预防及治疗作用。方法 在裸小鼠腹腔接种胃癌组织形成腹膜种植转移模型，于不同阶段在裸小鼠腹腔内灌注不同剂量的ＬＡＫ细胞及ｒＩＬ－２；并对胃癌根治术后２７例患者腹腔应用ＬＡＫ细胞加ｒＩＬ－２。结果在裸小鼠腹腔接种胃癌细胞的同时，显微镜下出现癌微灶及肉眼可见癌微灶三个阶段腹腔内注入一定量的ＬＡＫ细胞，其预防种植转移的效果递减。     

转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型的建立

目的 建立稳定有效的转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型.方法 采用56只BALB/C-nu/nu裸小鼠,建立转移性人肝癌裸小鼠原位种植模型;随机分为2组,移植瘤术后2周进行肝动脉结扎(HAL)组和仅开腹为假手术组.两组中各随机抽出6只裸鼠,在2次手术后2 d利用哌莫硝唑(PimoIlidazole)作为乏氧探针行肝脏移植瘤标本免疫组织化学显色和Western blot检测移植瘤组织中乏氧诱导因子(HIF)-1α蛋白的表达.结果 人肝癌裸小鼠原位种植成瘤率为100.0%(56/56);HAL手术成功率达93.3%(28/30);与假手术组比较,HAL组移植瘤内乏氧细胞(Pimonidazole阳性细胞)显著增加(P＜0.05),移植瘤组织HIF-1α蛋白表达升高(P＜0.05).结论 转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型手术成功率高,能够导致肝脏移植瘤有效乏氧,是一种较理想的研究肝动脉断流对人肝癌生物学特性影响的实验模型.     

肝门部胆管癌神经浸润动物模型的建立

目的建立肝门部胆管癌神经浸润裸鼠模型。方法将培养的胆管癌细胞系QBC939细胞接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠背部皮下原代胆管细胞癌动物模型,取原代肿瘤组织接种于裸鼠腹腔近肝脏处,建立腹腔二代移植瘤模型,成瘤后行种植瘤组织解剖学和病理学观察。结果肝门部胆管癌背部皮下原代种植瘤成瘤率为100%（5/5）,未见神经浸润;腹腔二代移植瘤成瘤率为45%（9/20）,神经浸润率为22%（2/9）,神经浸润模型成功率为10%（2/20）。病理学观察显示为瘤细胞大小不一,形态多样,不规则;细胞分化程度低,胞浆减少,细胞核大,异形性明显,大小不等,可见核分裂像;无明显腺管样结构。结论肝门部胆管癌细胞具有较强的神经浸润性,应用QBC939细胞系建立肝门部胆管癌神经浸润裸鼠模型为研究肝门部胆管癌神经浸润方式及生物学特性创建了良好的实验平台。     

人原发性小肠恶性黑色素瘤裸小鼠原位移植肝转移模型的建立

目的为探讨小肠恶性黑色素瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法将原发性小肠恶性黑色素瘤患者术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织块分别植入裸小鼠的小肠黏膜层，观察原位移植成瘤率，移植瘤的侵袭和肝转移率。进行形态学[光镜、电镜和免疫组织化学（免疫组化）]染色体核型和流式细胞分析。结果人小肠恶性黑色素瘤原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织均获移植成功。建成一株人原发性小肠（原发灶）恶性黑色素瘤裸鼠原位移植模型（HSIM-0501）和一株人原发性小肠（肝转移灶）恶性黑色素瘤裸鼠原位移植肝转移模型（HSIM-0502）。移植瘤组织病理学为高度恶性黑色素瘤；免疫组化显示S-100蛋白；黑色素瘤单克隆抗体45阳性；电镜下瘤细胞质内可见大量黑色素颗粒及黑色素复合体。染色体众数55～59条；流式细胞DNA指数值1．49-1．61；均为异倍体。HSIM-0501和HSIM-0502分别传至25代和27代；共移植裸鼠317只；肿瘤移植成瘤率和液氮冻存复苏成活率均为100％。HSIM-0501肝转移率为46．2％，淋巴结转移率为36．7％；HSIM-0502肝转移率和淋巴结转移率均为100％。移植瘤在裸鼠小肠内自主侵袭生长，发生血液转移、淋巴结转移和腹腔内种植性转移。结论HSIM-0501和HSIM-0502是首次成功建立的人原发性小肠恶性黑色素裸鼠原位移植肝转移模型，可用于小肠恶性黑色素瘤的发病机制、侵袭和转移及抗转移实验治疗的研究。     

人肝细胞癌细胞系HCC-9903的建立及其生物学特性研究

目的 新建1株人体肝细胞肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的、理想的实验模型。方法 以手术切除肝癌标本作原代培养,建立细胞系。通过光镜、电镜、倍增时间、生长曲线、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体分析、刀豆球蛋白凝集试验、裸鼠接种、AFP、HBV及端粒酶检测,对其生物学特性进行分析。结果 第29天完成原代培养。形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征。染色体数目分布在49－135,众数为60－67,1q^(i)和t(6,11)等为其标记染色体;有四射体和核内复制出现。裸鼠接种成瘤,瘤细胞形态与原病人的病理切片相似。端粒酶检测强阳性。结论 该细胞系符合建系标准,是1株新建的人体肝细胞肝癌细胞系,命名为HCC－9903。其生物学特性研究内容及检测手段较国内外已建肝恶性肿瘤细胞系更为全面。     

稳定表达荧光的高转移人肝癌裸鼠模型的建立

目的 建立稳定表达红色或绿色荧光的人肝癌裸鼠转移模型.方法 用带红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒感染人高转移潜能肝癌细胞HCCLM3,获得稳定表达红色或绿色荧光的新细胞系HCCLM3-R和HCCLM3-G.1×107细胞皮下接种、2 mm3组织块原位移植裸鼠,建立稳定表达荧光的人肝癌裸鼠转移模型.结果 皮下接种5只裸鼠和肝脏原位移植10只裸鼠肿瘤全部生长,经180 d裸鼠体内连续6次传代肿瘤荧光表达稳定,肝内播散、肺转移和腹腔转移检出率分别为100%、100%和90%.结论 采用HCCLM3-R、HCCLM3-G细胞所建立的荧光表达人肝癌裸鼠转移模型,是一个较理想的研究肝癌生长和转移的动物模型.     

甲胎蛋白启动子驱动的yCDglyTK双自杀基因治疗裸鼠肝癌的机制研究

目的研究携带甲胎蛋白（AFP）启动子的酵母菌胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶（yCDglyTK）双自杀基因体内靶向性治疗肝癌的效果和机制。方法构建携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因表达质粒,通过阳离子脂质体将携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因转染HepG2和SMMC7721肝癌细胞的裸鼠肝癌皮下种植瘤,观察自杀基因体内杀瘤效果以及细胞凋亡的情况。结果成功构建携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因,其靶向性地在AFP阳性的HepG2细胞种植瘤上表达,而AFP阴性的SMMC7721细胞种植瘤上无表达,氟胞嘧啶（5-FC）、更昔洛韦（GCV）及两者联合可有效抑制HepG2细胞种植瘤的生长,抑瘤效果GCV＋5-FC〉5-FC〉GCV,而SMMC7721细胞种植瘤的生长未受影响。HepG2细胞种植瘤治疗后有明显的细胞凋亡,而SMMC7721细胞种植瘤内极少凋亡细胞。结论携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因能有效地靶向性地杀伤AFP阳性的肝癌细胞,细胞凋亡可能是其杀伤的重要机制之一。     

人脐血内皮祖细胞体内促进血管重建的实验研究

目的：通过观察人脐血内皮祖细胞（EPC）在裸鼠体内缺氧状态下分化成内皮细胞的现象，初步研究其促进血管重建的作用。方法：根据EPC表面标记CD133，采用免疫磁珠法分离培养EPC。设计EPC裸鼠成瘤实验，观察瘤体内血管增生情况；将荧光标记的EPC注射于裸鼠腹部皮瓣中，观察EPC参与皮瓣血管重建情况；将EPC接种于聚羟基乙酸（PGA）中，移植于裸鼠皮下，观察EPC参与血管重建。结果：原代EPC贴壁后呈梭形，从第7天开始数量明显增加，呈克隆状生长。透射电镜观察到成熟内皮细胞最具特征性的细胞器——weibel-Palade小体。裸鼠成瘤实验：抗人vWF免疫荧光显示大量EPC参与肿瘤血管生成；裸鼠皮瓣实验：荧光标记EPC参与裸鼠皮瓣血管生成；PGA移植实验：抗人vWF免疫酶组织化学染色显示EPC参与血管生成。结论：EPC参与血管重建，具有促进血管新生，加速缺血组织血管化的作用。     

Oncogenic transformation and growth factor production of a human urothelial cell line

The objective of this study was to demonstrate that a nontumorigenic simian virus 40 (SV40) immortalized human urothelial cell line can be tumorigenically transformed following growth in a serum free, growth factor free, chemically defined culture system. The tumorigenicity of the cells was determined by the generation of tumors after inoculation into athymic nude mice. A cell line was derived from one of the tumors and the origin of the transformed cells was confirmed by immunohistochemical staining and analysis of the DNA fingerprint profile. Conditioned medium derived from the nontumorigenic parent cell line and the tumor line contained an activity that synergized with recombinant granulocytemacrophage colony stimulating factor (rmu GM-CSF) and recombinant macrophage colony stimulating factor (rhu M-CSF) to produce large colonies in bone marrow cultures (HPP-CFC). The concentration of human stem cell factor (SCF) and human Interleukin-I a-like activity produced by the urothelial cells was lower in the medium conditioned by the transformed tumorigenic cells than by the nontumorigenic parental cells. This data suggest that there are differences in the growth factor production of normal urothelial and tumor cells. It is possible that tumors deprived of normal levels of growth factors and nutrients may undergo further tumor progression, thus contributing to the heterogeneity seen in the clinic.     

肺癌抑癌基因-1对人骨肉瘤细胞株MG63的侵袭和转移抑制效应研究

目的观察肺癌抑癌基因-1（TSLC1）稳定转染至骨肉瘤细胞株后对其侵袭、转移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法采用稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞株M8T为研究对象,转染空载体的细胞系M8P设为对照组,MG63细胞株为空白组;Transwell法检测三组细胞株的体外侵袭和迁移能力;将细胞制成1×107细胞悬液,于裸鼠尾静脉注射,第4周开始处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织石蜡包埋切片HE染色检测。将0.5 mL磷酸盐缓冲液（PBS）重悬2×107细胞皮下注射5周龄裸鼠,皮下肿瘤生长情况1周检测1次。结果 M8T细胞株体外侵袭细胞数目为（25.86±2.12）,迁移的细胞数目为（37.55±3.46）;其裸鼠皮下成瘤形成时间：于注射后第4周开始生长,较对照组和空白组细胞株成瘤时间晚,体积显著减小,体内肺转移形成时间为注射后第9周,肺部转移灶发生率为40%。结论 TSLC1基因可明显抑制人骨肉瘤细胞的侵袭和转移及皮下成瘤能力。     

缺氧增加肝癌细胞胚胎干细胞基因表达促进恶性转化

目的 研究缺氧对原发性肝癌恶性表型的影响及相关机制.方法 建立体内、外缺氧模型,比较缺氧对MHCC97H肝癌细胞成瘤和侵袭转移能力的影响,并通过检测细胞增殖周期,CD90、CD133标记的肝癌干细胞数量以及胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)样基因Oct4,Nanog,Sox2等的表达分析缺氧对肝癌细胞生物学特性的影响.结果 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞运动(t=2.792,P=0.023)、侵袭(t=7.624,P＜0.0001)、转移(x~2=5.507,P=0.031)潜能,并增加软琼脂集落形成(t=3.292,P=0.011)和裸鼠皮下成瘤率(x~2=8.571,P=0.015).在缺氧环境中,MHCC97H肝癌细胞增殖能力受到抑制,G1期细胞比例显著增加,Oct4,Nanog,Sox2等基因表达明显上调.结论 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞成瘤和转移等恶件表型与获得胚胎干细胞样特征有关.     

Establishment and characterization of cell lines derived from a human osteosarcoma

Continuously growing cell lines have been established in vitro from a human osteosarcoma after transplantation into athymic nude mice. These cell lines grew as an adherent monolayer and consisted of various types of cells. Twelve clones were colonially isolated from a cell line, HuO-3N1, and subdivided into three groups depending on the morphologic features. The cells of HuO-3N1 and its clones had alkaline phosphatase (ALP)-positive granules in the cytoplasm. Cytogenetic studies showed that these cell lines were human aneuploid lines. A tumor was produced by injection of HuO-3N1 cells into an athymic nude mouse. ALP activity increased in a clonal cell line, HuO-3N1 cl-2, when cells were treated with 1,25-dihydroxy-vitamin D3. The proliferation of cells was inhibited when the cells were cultured in a medium supplemented with L-homoarginine, which is an inhibitor of bone and liver-specific ALP. This cell line has an osteoblastic phenotype and provides a useful model for studies of human osteosarcoma and phenotypical expression of human osteoblastic cells.