高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞低氧诱导因子1α（hypoxia—inducible factor-1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境，研究RPE细胞分别在5．56mmol／L葡萄糖（对照组）、5．56mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（低氧组）、25mmol／L葡萄糖（高糖组）以及25mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（联合组）的培养条件下，通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达，Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较，高糖组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白，对照组未能检测出HIF-1α蛋白；且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加（均P〈0．05）。与低氧组比较，联合组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组（P〈0．05）；同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加（均P〈0．05）。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成，且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用，在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定，同时也促进VEGF的表达增加。     

HIF-2α-VEGF-Notch信号通路在高强度聚焦超声不完全消融后肝癌中的作用

目的 探讨HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch等基因在高强度聚焦超声不完全消融肝癌血管新生中的表达及其作用.方法 实验共分5组,HIFU残留肝癌细胞亚系为实验组,未处理肝癌细胞为对照组,转染HIF-2α基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制HIF-2α组,转染VEGF基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制VEGF组,转染空载慢病毒残留肝癌细胞为空载组.免疫荧光检测实验组与对照组的VEGF表达.低氧(1％O2)处理实验组与对照组细胞0、6、12、24 h,荧光定量PCR和Westernblot检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达水平.荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4 mRNA和蛋白表达水平.结果 VEGF蛋白在对照组与实验组细胞中均有表达.HIF-1α在低氧处理12 h达到顶峰,随后下降,而HIF-2α、VEGF随着低氧处理时间增加而呈上升趋势,且实验组HIF-2α、VEGF表达较对照组明显增高(P＜0.05).转染慢病毒后,抑制HIF-2α组HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),抑制VEGF组VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),实验组HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α-VEGF-Notch信号通路参与调控高强度聚焦超声残余肝癌血管新生.     

低氧诱导因子1α在骨肉瘤中的表达及其与血管生成的相关性

目的:探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤血管生成的关系.方法:低氧及模拟低氧条件下体外培养MG-63骨肉瘤细胞,另外收集30例骨肉瘤组织石蜡标本及20例新鲜冷冻骨肉瘤组织标本,采用RT-PCR、Western印迹、ELISA及免疫组织化学等方法,分别检测骨肉瘤细胞及组织中HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA及蛋白表达,并计算微血管密度(MVD).结果:在低氧及模拟低氧条件下,MG-63骨肉瘤细胞HIF-1α的mRNA表达无明显变化,但蛋白表达明显增加,而VEGF的mRNA、蛋白表达都增加(P＜0.05).20例新鲜骨肉瘤组织中HIF-1α mRNA总表达率为90%,VEGF mRNA总表达率为100%,均明显高于瘤旁组织(P＜0.05).HIF-1α、VEGF蛋白在骨肉瘤石蜡组织中阳性表达率分别为86.7%、93.3%,明显高于瘤旁组织的6.7%、26.7%(P＜0.05).Spearman等级相关分析HIF-1α蛋白表达与MVD明显相关(P=0.005,r=0.767),VEGF蛋白表达与MVD正相关(P＜0.002,r=0.701).结论:骨肉瘤中存在HIF-1α的高表达,可能与肿瘤血管生成相关;HIF-1α高表达可能提示骨肉瘤患者预后不良.     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1ɑ及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-lα,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境,研究RPE细胞分别在5.56 mmol/L葡萄糖(对照组)5、.56 mmol/L葡萄糖 150μmol/L CoCl2(低氧组)、25 mmol/L葡萄糖(高糖组)以及25 mmol/L葡萄糖 150μmol/L CoCl2(联合组)的培养条件下,通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达,Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较,高糖组RPE细胞HIF-1αmRNA表达无显著性差异,而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白,对照组未能检测出HIF-1α蛋白;且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加(均P<0.05)。与低氧组比较,联合组RPE细胞HIF-1αmRNA表达无显著性差异,但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组(P<0.05);同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加(均P<0.05)。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成,且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用,在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定,同时也促进VEGF的表达增加。     

HIF-1α在RAD001联合DDP下调胃癌SGC7901/DDP细胞株VEGF分泌中的作用

目的 研究缺氧诱导因子（HIF-1α）在mTOR特异性抑制剂RAD001联合DDP下调胃癌细胞株SGC7901/DDP VEGF表达中的作用,并探讨其相关作用机制.方法 体外培养胃癌SGC7901/DDP细胞株,分别给予RAD001、DDP及RAD001＋DDP干预48 h后,免疫细胞化学染色及Western-blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达情况,RT-PCR法检测HIF-1α mRNA、VEGF mRNA的合成情况.结果 RAD001单独作用于SGC7901/DDP细胞48 h后,HIF-1α、VEGF蛋白的表达和HIF-1α 、VEGF mRNA的合成下降,且呈剂量依赖性.联合用药组比单独用药组作用增强,差异有统计学意义（P〈0.05）.VEGF和HIF-1α蛋白呈正相关（r=0.993,P〈0.01）,HIF-1α mRNA和VEGF mRNA呈正相关（r=0.994,P〈0.01）.结论 RAD001能够抑制细胞体外VEGF、HIF-1α的蛋白表达及mRNA的合成,RAD001联合DDP作用后,效果增强,其机制可能与mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路有关.     

低氧诱导因子促内皮祖细胞活性的可行性研究

目的探讨在体外低氧诱导因子-1α（HIF-1α）促血管内皮祖细胞（EPCs）成血管活性的可行性。方法密度梯度法分离人外周血EPCs，电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPCs，RT-PCR法观察未转染／转染质粒在转染后3、12、20、72h，HIF-1α及下游靶基因血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达含量的变化；免疫组化法检测常氧中转染前后HIF-1α蛋白表达、VEGF受体Flk-1蛋白表达在不同组质粒转染后的差异；ELISA法测定各组质粒转染后VEGF在培养基上清中释放含量及VEGF依赖性一氧化氮合成酶（eNOS）含量的改变。结果HIF-1α基因有效转染入EPCs；HIF-1α mRNA在未转染时即有表达，在HIF-1α质粒转染后3、12、20、72h，含量较未转染时增加（P〈0．05）；HIF-1α过表达诱导VEGF表达上调（P〈0．05）。Flk一1蛋白在常氧下有一定含量，在HIF-1α质粒转染后Flk-1蛋白表达进一步增加。VEGF释放含量在HIF-1α过表达组显著增加（P〈0．05）；HIF-1α诱导eNOS含量增加，并与时间、VEGF刺激量成正比。结论HIF-1α质粒在体外能有效的转染入EPCs，促进其下游靶基因及受体表达，引起相应的功能学改变，促EPCs向内皮细胞分化、扩增，可进一步应用于基因治疗。     

红景天对急性心肌梗死大鼠心肌组织Ⅷ因子相关抗原、低氧诱导因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察红景天对急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）大鼠心肌组织低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α）、低氧诱导因子1β（hypoxia-inducible factor1β,HIF-1β）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨红景天促进大鼠缺血心肌血管新生的机制,并了解红景天苷是否为红景天发挥这些作用的有效成分。 方法：建立Wistar大鼠AMI模型,造模前7d开始分组灌胃生理盐水（对照组）、红景天（红景天组）或红景天苷（红景天苷组）,每组12只。灌胃持续至造模手术后第7天,处死动物取心脏标本。免疫组织化学方法检测梗死心肌边缘区和非梗死区Ⅷ因子相关抗原（von Willebrand factor,v WF）的表达,计算其免疫组织化学指数;实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测心肌组织HIF-1α、HIF-1β、VEGF mRNA的表达;蛋白印迹方法检测HIF-1α、HIF-1β、VEGF蛋白的表达。 结果：红景天组梗死边缘区和非梗死区心肌v WF蛋白表达均显著高于对照组（P〈0.05）;红景天组HIF-1α、HIF-1β、VEGF mRNA表达和HIF-1α、VEGF蛋白表达均较对照组显著升高（P〈0.01）,HIF-1β蛋白水平虽较对照组升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。红景天苷组各指标的表达水平均介于对照组和红景天组之间。 结论：红景天具有促进AMI大鼠心肌血管新生的作用,其机制可能与上调HIF-1α、HIF-1β、VEGF表达有关。红景天苷可能是红景天发挥上述作用的有效成分之一。     

生长抑素类似物对氯化钴诱导的人胆管癌细胞QBC-939 HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的研究生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对体外低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）诱导缺氧环境培养的人胆管癌细胞株QBC-939HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响。方法不同浓度的OCT组（5、0．5、0．05、0．005mg／L、对照组不加OCT）干预体外缺氧环境（150umol／LCoCl2诱导）培养的胆管癌细胞QBC-939,用ELISA法检测不同浓度OCT对细胞培养上清液中VEGF蛋白合成的影响,用免疫组化法检测不同浓度OCT对QBC-939细胞HIF-1α、VEGF蛋白合成的影响。结果ELISA检测结果显示各OCT组细胞培养上清液中VEGF蛋白浓度均低于对照组（P〈0．05）,并体现出一定剂量范围内的依赖关系。免疫组化检测各OCT组HIF-1α、VEGF蛋白的平均灰度与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。不同浓度OCT组及对照组HIF-1α和VEGF蛋白表达呈正相关（r=0．937,P〈0．01）。结论OCT对VEGF表达的抑制作用可能是其抗肿瘤的机制之一,而对HIF-1α的抑制作用可能是其抑制VEGF表达的途径之一。     

低氧环境下西尼地平抑制HIF-1α下调宫颈癌HeLa细胞VEGF表达的研究

目的 探讨西尼地平能否在低氧环境下,通过抑制HIF-1α下调宫颈癌HeLa细胞VEGF的表达.方法 将HeLa细胞分为常氧组（Normoxia组）、低氧环境组（Hypoxia组）、低氧环境＋3μM西尼地平组（Hypoxia＋3μM Cilnidipine组）和低氧环境＋30μM西尼地平组（Hypoxia＋30μM Cilnidipine组）.在低氧环境（1% O2、5% CO2和94% N2）下,对Hypoxia＋3μM Cilnidipine组和Hypoxia＋30μM Cilnidipine组细胞使用西尼地平（3μM和30μM）干预,在干预后不同时间点（0、24、48和72 h）使用MTT法对HeLa细胞活性进行测定;在干预72h后,使用RT-PCR法对细胞表达的VEGF和HIF-1α mRNA进行测定,使用Western blot法对细胞表达的VEGF和HIF-1α蛋白进行测定.结果 在低氧环境下,西尼地平干预后,HeLa细胞的细胞活性呈时间和剂量依赖性降低（P均〈0.05）;在干预72 h后,细胞VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平较未干预细胞降低并呈剂量依赖性（P均〈0.05）.结论 在低氧环境下,西尼地平可能是通过抑制HIF-1α的表达下调HeLa细胞VEGF的表达,导致肿瘤的增殖能力降低.     

Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞VEGF、HIF-1α表达的影响

目的 探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）分泌的影响。方法 用不同浓度Ruxolitinib（1、5、10、50、100、500 nmol/L）处理HEL细胞24、48、72 h,通过CCK-8法观察其对HEL细胞增殖的抑制作用;不同浓度Ruxolitinib处理细胞24、48、72 h,RT-PCR检测Jauns激酶2基因（JAK2） mRNA水平,Western blot检测p-JAK2、VEGF、HIF-1α蛋白表达;鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）体内血管生长实验检测Ruxolitinib对血管生成的影响。结果 不同浓度Ruxolitinib（除外1 nmol/L作用24 h）均可抑制HEL细胞增殖。不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞24、48、72 h 后,RT-PCR结果显示JAK2 mRNA表达较对照组降低（P<0.01）;Western blot结果显示p-JAK2、VEGF、HIF-1α蛋白表达较对照组亦均降低（P<0.05）;CAM实验结果显示Ruxolitinib处理细胞72 h后血管数目明显减少。结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2通路,抑制HEL细胞VEGF、HIF-1α表达进而抑制血管新生。     

臭氧通过调节HIF-1α-VEGF信号通路治疗类风湿关节炎的实验研究

目的探索臭氧通过调节低氧诱导因子-1α（HIF-1α）-血管内皮生长因子（VEGF）通路对类风湿关节炎（RA）的治疗机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为对照组（Con组）、类风湿关节炎组（RA组）、O3治疗组（O3组）,采用弗氏完全佐剂乳化的牛Ⅱ型胶原诱导建立RA大鼠模型。O3组大鼠右膝关节腔注射O3,Con组和RA组局部注射0.9%氯化钠溶液,治疗结束后测量各组大鼠膝关节肿胀率,并检测各组血清、关节液及滑膜组织HIF-1α和VEGF蛋白表达水平,及滑膜组织HIF-1α和VEGFmRNA表达水平。结果与Con组比较,RA组和O3组大鼠膝关节肿胀率明显增高,血清、关节液及滑膜组织HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高（P＜0.05）,滑膜组织HIF-1α和VEGFmRNA表达水平也显著升高（P＜0.05）。与RA组比较,O3组右膝关节肿胀率明显减小（P＜0.05）,关节液及滑膜组织中表达水平明显下降（P＜0.05）,滑膜组织上述因子mRNA表达水平也显著下降（P＜0.05）,但血清中上述细胞因子表达水平无统计学差异（P＞0.05）。结论臭氧可以通过抑制关节内HIF-1α、VEGF的表达水平,调控HIF-1α-VEGF信号通路来治疗类风湿关节炎。     

低氧对人肺腺癌细胞株A549细胞周期及HIF-1α、p27表达的影响

目的 探讨低氧诱导入肺腺癌细胞株A519发生G0/G1期细胞周期阻滞的分子机制。方法 将培养的细胞分为对照组、低氧21h组低氧48h组。流式细胞仪检测细胞周期分布及p27蛋白表达，免疫细胞化学与原位杂交技术检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α ）蛋白表达及p27mRNA转录水平。结果①低氧21h组与18h组G0/G1期细胞比例显著高于对照组（P＜0．05）；②HIF-1α蛋白在对照组有少量表达，随着低氧时间的延长，其表达增加（P＜0.01）；p27mRNA转录水平及p27蛋白表达均随低氧时间的延长而增高（均P＜0.01）;③低氧组HIF-1α表达与p27蛋白表达存在显著相关（r=0.958,P＜0.01）；低氧组p27蛋白表达与G0/G1期阻滞呈现著正相关（r=0.867,P＜0.01）；低氧组HIF-1α表达与p27mRNA转录呈显著相关（r=0.695,P＜0.01）。结论 低氧能使人肺腺癌细胞株A549发生G0/G1期阻滞，HIF-1α对p27转录和表达的调控在其中可能起重要作用。     

尼美舒利对氯化钴诱导的BGC-823细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利对低氧模拟剂氯化钴诱导的胃癌细胞株BGC-823 HIF-1α、VEGF表达的影响。方法：分别应用150μmol／L氯化钴单独或联合10μmol／L、40μmol／L、80μmol／L的尼美舒利作用于BGC-823细胞24h，收集细胞，应用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α及VEGF的表达。以胎牛血清加RPMI1640培养基培养细胞作正常对照。结果：与正常对照组比较，150μmol／L氯化钴刺激24h，可显著提高细胞HIF-1α蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），但对HIF-1α mRNA表达无影响。与氯化钴单独作用比较，尼美舒利和氯化钴联合作用24h，细胞HIF-1α蛋白、VEGF mRNA和蛋白表达降低（P〈0．01），并呈剂量依赖性，但对HIF-1α mRNA表达无影响。结论：COX-2抑制剂尼美舒利可抑制氯化钴诱导的HIF-1α、VEGF表达，这可能是其抗肿瘤血管生成的机制之一。     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

低氧诱导对人肝癌SMMC7721细胞生物学行为的影响

目的研究低氧对体外培养的人肝癌细胞株SMMC7721增殖、细胞周期、凋亡和黏附、迁移能力的影响,探讨其中可能存在的分子机制.方法通过氯化钴诱导人肝癌SMMC7721细胞低氧,MTT法、流式细胞术、细胞黏附试验、transwell小室迁移实验观察低氧对肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期以及细胞黏附和迁移能力的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测低氧对细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP2）mRNA和蛋白表达的影响.结果 MTT法显示氯化钴诱导的低氧对肝癌细胞生长起抑制作用;低氧24 h,流式细胞术显示细胞凋亡、坏死增加,细胞周期G0/G1期、S期细胞比例减少,G2/M期比例增加;黏附试验显示低氧后细胞黏附力增强（P〈0.01）,transwell小室实验显示,低氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加（P〈0.05）;RT-PCR和细胞免疫化学检测显示低氧条件下HIF-1α、VEGF、MMP2的mRNA和蛋白表达均较常氧时增加（P〈0.05）.结论氯化钴诱导低氧可抑制SMMC7721细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡、坏死增加,同时细胞黏附、迁移能力增强;低氧时HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,并通过调节及其下游靶基因VEGF、MMP2的表达参与了这一生物学行为的转变.     

钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及侵袭转移能力的影响

目的：探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响．方法：在培养基中加入150μmol/L CoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米（verapamil,VPL）组．用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组中HIF-1α的mRNA水平;蛋白印迹实验和免疫细胞化学检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA—MB-231中HIF-1α蛋白的表达;Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测各实验组中细胞侵袭迁移能力的改变．结果：两株细胞各实验组都存在HIF-1α的mRNA转录和蛋白的表达,CoCl2组HIF-1α mRNA水平和蛋白水平较对照组显著增高（P〈0．01）,加VPL干预后,HIF-1α mRNA水平和蛋白水平都大大降低（P〈0．01）,MCF-7和MDA—MB-231间有显著差异（P〈0．01）;两株细胞的侵袭迁移能力VPL＋CoCl2组较CoCl2组明显降低（P〈0．05）,MDA—MB-231更明显（P〈0．01）．结论：阻断钙信号转导途径可以使HIF-1α的表达下调,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力．     

曲古抑菌素A体外对结肠癌细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的：观察曲古抑菌素A（TSA）体外对结肠癌HT-29细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子（HIF）-lα表达的影响。方法：体外培养结肠癌HT-29细胞，给予TSA100、200、400、600、800nmol／L。分别处理12、24、48、72h，对照组加入同等体积的DMSO。MTT法检测各组HT-29细胞的存活率；AnnexinV、TUNEL。法检测HT-29细胞凋亡率；RT-PCR、免疫印迹法分别检测低氧状态下（37℃、1％O2）HT-29细胞HIF-1α mRNA及蛋白的表达。结果：MTT法检测结果发现，与对照组相比，TSA处理组HT-29细胞活力明显降低（P〈0.05），随着浓度的增大、时间的延长，其抑制作用逐渐增强。AnnexinV、TUNEL法检测结果发现，TSA能诱导HT-29细胞的早期凋亡，TSA（200、400、600、800nmol／L。）处理组凋亡率明显高于对照组（P％0．05）。低氧条件下，TSA抑制HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达，随着浓度的增大，其抑制作用逐渐增强；而对HIF-1α mRNA的表达无影响。结论：TSA体外可能通过抑制低氧条件下HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达，诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。     

小窝蛋白-1对血管内皮生长因子孵育的骨肉瘤细胞血管内皮生长因子受体-2表达水平的影响

目的：研究小窝蛋白-1（caveolin-1）对血管内皮生长因子（VEGF）孵育的骨肉瘤细胞株（SOSP-9607）血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）表达的影响,探讨其在骨肉瘤发展中作用的可能机制。方法：实验分为三组,即对照组、VEGF组、VEGF＋caveolin-1小片段干扰核糖核酸（siRNA）组。反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测VEGF孵育的SOSP-9607细胞中caveolin-1、VEGFR-2信使核糖核酸（mRNA）的表达;蛋白质印迹（Western Blot）检测caveolin-1、VEGFR-2蛋白的表达。结果：与对照组相比,VEGF组细胞caveolin-1、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达明显增加（均P〈0.01）,VEGF＋caveolin-1 siRNA组细胞caveolin-1 mRNA和蛋白表达减少,而VEGFR-2 mRNA表达增加,蛋白水平却表达减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：caveolin-1能明显减少VEGF刺激下的骨肉瘤细胞中的VEGFR-2蛋白水平的表达,提示caveolin-1在VEGF依赖性信号级联反应中起正调控作用,为临床选择合适的靶点治疗骨肉瘤的血管生成提供实验依据。     

结直肠癌组织中HIF-1α和VEGF表达及其意义

目的探讨低氧诱导因子HIF-1α和鼻管内皮生长因子VEGF在结直肠癌中的表达及其意义。方法用免疫组化法检测43例结直肠癌和10例正常结肠组织中低氧诱导因子HIF-1α和血管内皮生长因子VEGF的表达。结果HIF-1α在大多数结直肠癌细胞中表达,HIF-1α的表达和结直肠癌的浸润深度以及远处转移呈正相关（P〈O．01）,与结直肠癌组织的分化程度呈负相关（P〈O．01）。结直肠癌组织中HIF-1α的表达与VEGF表达呈正相关（r：n5,P〈Q05）。结论HIF-1α与结直肠癌的分化、浸润及淋巴结转移有关,其机制可能与上调VEGF表达促进肿瘤血管生成相关。