戊四氮诱导发育鼠癫痫持续状态后海马区HIF-1α的表达及其与神经干细胞增殖的关系

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及nestin蛋白在戊四氮(PTZ)诱导发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马区的表达变化,探讨HIF-1α与神经干细胞(NSCs)增殖的关系. 方法 出生后7、14、21、28 d SD大鼠各192只,按随机数字表法分为模型组(96只)和对照组(96只),腹腔注射10 g/L戊四氮(PTZ)溶液制作SE模型,对照组注射等剂量生理盐水,造模后6h、12h、1d、2d、3d、7d采用RT-PCR、免疫组化分别检测各组大鼠海马区HIF-1 αmRNA和蛋白的表达;出生后21d大鼠48只按随机数字表法分为模型组(24只)和干预组(24只),其中干预组大鼠右侧海马齿状区微量注射1 μL HIF-1α反义寡聚核苷酸(ASODN),左侧注射等体积生理盐水,6h后2组大鼠均造模.造模后2d采用RT-PCR检测大鼠海马区HIF-1 αmRNA的表达,造模后7d、14d免疫组化检测海马区HIF-1α、nestin的表达. 结果 与对照组(未检测到)比较,各日龄大鼠SE后海马区HIF-1α mRNA的表达明显升高,表达趋势一致.SE后6h时HIF-1α mRNA的表达随日龄增大而下降,差异有统计学意义(P＜0.05).各日龄大鼠SE后各时间点海马区HIF-1α阳性细胞分布的部位随时间变化而不同;与模型组和干预组注射生理盐水侧比较,SE后2d干预组注射ASODN侧HIF-1αmRNA的表达明显降低,SE后7d、14d海马区nestin阳性细胞计数较少,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 发育期大鼠SE后海马区HIF-1αmRNA及其蛋白的表达增强,与日龄有关;SE后HIF-1α对NSCs增殖可能存在调控作用.     

凋亡诱导因子在戊四氮致痫大鼠海马组织中的表达

目的研究凋亡诱导因子(AIF)mRNA在戊四氮(PTZ)点燃癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织中的表达情况。方法通过腹腔注射戊四氮建立急性点燃大鼠模型,运用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分析AIFmRNA在大鼠癫痫发作后的表达情况。结果癫痫发作后海马组织AIFmRNA的表达水平早期即出现升高(6h组与对照组相比,P<0.05),且持续较长一段时间(48h组与对照组相比,P<0.01)。结论AIF可能参与了戊四氮致痫大鼠海马神经元的凋亡过程。     

海人酸致痫大鼠海马IL-1β、TNF-α的表达

目的 立体定向手术建立海人酸(KA)颞叶癫痫大鼠模型,检测海马内IL-1β、TNF-α蛋白及其mRNA的表达.方法 大鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组和模型组.模型组大鼠一侧海马CA3区注射KA (生理盐水组注射生理盐水),观察其行为学特征,HE染色和Nissl染色以及电镜观察其病理学改变,免疫组化法检测大鼠海马内IL-1β、TNF-α蛋白的表达,原位杂交法检测TNF-α mRNA的动态表达.结果 大鼠注射KA后出现湿狗样抖动、头面部肌阵挛、肢体阵挛及全面强直阵挛发作等,病理结果显示海马神经元变性、缺失及胶质细胞增生,模型组IL-1β在致痫后3 、6 h表达水平明显增加并于12 h达高峰,之后逐渐下降,7 d后与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);TNF-α蛋白与mRNA表达时程基本一致,3 h出现,12 h达高峰,而后逐渐下降,7 d后回归至对照组表达水平,15 、30 d又高于对照组(P＜0.05).结论 (1)大鼠一侧海马注射KA是人类颞叶癫痫理想的动物模型;(2)内源性IL-1β、TNF-α参与了癫痫发病机制.     

癫痫幼鼠海马丝裂酶原蛋白活化激酶表达的特点及其对巨噬细胞炎性蛋白-α/趋化因子受体5表达的影响

目的探讨癫痫幼鼠海马丝裂酶原蛋白活化激酶(MAPKs)表达的特点及其对巨噬细胞炎性蛋白-α(MIP-1α)/趋化因子受体5(CCR5)表达的影响。方法应用立体定向技术对侧脑室内注射海人酸(KA),建立幼鼠惊厥模型。将出生21 d的Wistar幼鼠分为空白对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组及KA 4h、8 h、16 h、24 h、3 d组,比较各组MAPKs表达的差异。另将出生21 d的幼鼠分为PBS+二甲亚砜(DMSO)组、KA+DMSO组、KA+PD98059(ERK1/2抑制剂)组和KA+SB203508(p38MAPK抑制剂)组,比较各组MIP-1α、CCR5表达的差异。采用Western Blot方法检测MAPKs蛋白水平及CCR5的表达。采用ELISA方法检测MIP-1α的表达。采用免疫组化染色方法检测各组大鼠海马P-ERK1/2、P-p38MAPKs等蛋白的表达。采用免疫荧光双标染色探讨P-ERK1/2和P-p38MAPK的胶质细胞来源。结果与空白对照组比较,KA 4 h、8h、16 h、24 h、3 d组P-ERK1/2水平明显增高;KA 8 h、16 h、24 h、3 d组P-P38MAPK水平明显增高(均P0.05)。侧脑室注射KA后大鼠P-ERK1/2与P-P38MAPK表达主要分布在齿状回门区和锥体细胞层等神经元损伤明显的海马组织中。在侧脑室注射KA后,部分P-ERK1/2来源于活化的小胶质细胞及星形胶质细胞,而P-p38MAPK仅在小胶质细胞中出现免疫活性表达。与PBS+DMSO组比较,KA+DMSO组、KA+PD98059组和KA+SB203508组大鼠海马组织中MIP-1α、CCR5蛋白水平均明显增高,OX-42阳性细胞数明显增加(均P0.05)。与KA+DMSO组比较,KA+PD98059组、KA+SB203508组大鼠海马组织中MIP-1α、CCR5蛋白水平均明显降低,OX-42阳性细胞数明显减少(均P0.05)。结论在幼鼠癫痫发生的早期阶段,MAPKs(ERK1/2、p38MAPK)可部分地调控MIP-1α/CCR5的表达。     

戊四氮致惊厥大鼠海马神经元Cyclin D1表达改变和意义

目的 探讨戊四氮致惊厥大鼠海马细胞周期素Cyclin D1与神经细胞凋亡的关系。方法 利用寡核苷酸探针原位组织杂交技术观察各组海马Cyclin D1 mRNA的表达水平。同时采用TUNEL原位末端标记方法观察神经元凋亡。结果 戊四氮致惊厥后6h,大鼠海马内Cyclin D1 mRNA表达开始增强,12h达到高峰,24h开始回落。同时,观察到戊四氮致惊厥大鼠海马神经元凋亡数量有类似改变。结论 Cyclin D1 mRNA表达水平的增高可能表明戊四氮致惊厥大鼠海马神经元重新进入细胞周期,可能与神经细胞凋亡有关。     

ERK1/2信号通路对缺血后适应大鼠皮层的作用

目的研究脑缺血大鼠缺血后适应模型中大脑皮质的ERK1/2通路表达特点及应用ERK1/2特异性抑制剂PD98059后对缺血后适应神经保护作用的影响,研究缺血后适应是否通过ERK1/2信号通路介导对急性缺血性脑梗死再灌注后的神经保护作用。方法将20只SD大鼠随机分为假手术组、缺血2h再灌注组、缺血2h后适应组以及PD98059+缺血2h后适应组(PD+2h后适应组),每组5只,用线栓法建立急性大脑中动脉闭塞的缺血性脑梗死模型,4组分别进行不同形式的实验。对比4组大鼠再灌注1h、24h的神经功能评分及再灌注24h后的梗死体积。每组另增加15只大鼠,分别于再灌注后2h、6h、24h留取缺血大脑皮质;Western blot检测再灌注2h、6h、24h后总T-ERK1/2、P-ERK1/2表达。结果 PD+2h后适应组与缺血2h再灌注组神经功能缺损评分高于缺血2h后适应组,脑梗死体积大于缺血2h后适应组。缺血后适应组再灌注2h、6h、24h后P-ERK1/2表达明显高于缺血2h再灌注组及PD+2h后适应组;以上表明,缺血后适应通过ERK1/2信号通路减轻大鼠缺血性脑损伤,应用P-ERK1/2的阻滞剂PD98059后,阻断了缺血后适应的脑保护作用。结论通过对本实验研究数据的分析后发现,缺血后适应对大鼠急性缺血性脑梗死具有神经保护作用,应用ERK1/2特异性抑制剂PD98059后,缺血后适应神经保护效应减弱,说明缺血后适应对急性缺血性脑梗死再灌注损伤的保护作用与MAPK/ERK信号通路具有深层次紧密关系。     

依达拉奉对癫(癎)大鼠海马肿瘤坏死因子-α和白介素-1β表达的影响

目的 探讨依达拉奉对癫(癎)大鼠海马肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β表达的影响.方法 36只Wistar大鼠随机分为依达拉奉组、癫(癎)组和正常对照组.应用戊四氮腹腔注射制作癫(癎)模型.依达拉奉组在造模前0.5 h及造模后立即、造模后12 h分别予以腹腔注射依达拉奉3 mg/kg.癫(癎)大鼠于造模后进行行为学观察.应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠海马TNF-α和IL-1β的表达.结果 造模后,癫(癎)组12只大鼠均为Ⅴ级发作;依达拉奉组3只大鼠为Ⅴ级发作,2只为Ⅳ级发作,5只为Ⅲ级发作,2只为Ⅱ级发作.与正常对照组比较,依达拉奉组与癫(癎)组大鼠海马TNF-α、IL-1β的表达水平均明显增高(P<0.05～0.01);与癫(癎)组比较,依达拉奉组大鼠海马TNF-α、IL-1β的表达水平均明显降低(均P<0.01).结论 依达拉奉能明显降低癫(癎)大鼠海马TNF-α和IL-1β的表达水平,从而发挥抗癫(癎)作用.     

海人酸致痫大鼠海马IL-1β、TNF-α仪的表达

目的立体定向手术建立海人酸（KA）颞叶癫痫大鼠模型，检测海马内IL-1β、TNF-α蛋白及其mRNA的表达。方法大鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组和模型组。模型组大鼠-侧海马CA3区注射KA（生理盐水组注射生理盐水），观察其行为学特征，HE染色和Nissl染色以及电镜观察其病理学改变，免疫组化法检测大鼠海马内IL-1β、TNF-α蛋白的表达，原位杂交法检测TNF-α mRNA的动态表达。结果大鼠注射KA后出现湿狗样抖动、头面部肌阵挛、肢体阵挛及全面强直阵挛发作等，病理结果显示海马神经元变性、缺失及胶质细胞增生，模型组IL-1β在致痫后3、6h表达水平明显增加并于12h达高峰，之后逐渐下降，7d后与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；TNF-α蛋白与mRNA表达时程基本一致，3h出现，12h达高峰，而后逐渐下降，7d后回归至对照组表达水平，15、30d又高于对照组（P％0.05）。结论（1）大鼠-侧海马注射KA是人类颞叶癫痫理想的动物模型；（2）内源性IL-1β、TNF-α参与了癫痫发病机制。     

槲皮素对大鼠癫痫持续状态后海马XIAP mRNA与蛋白表达的影响

目的研究大鼠癫痫持续状态(SE)后海马组织XIAP的表达变化及槲皮素对其表达的影响。方法建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠SE模型,应用免疫组化和RT-PCR方法检测XIAP与caspase-3蛋白以及XIAP mRNA的表达。结果海马CA3区XIAP蛋白在SE后2 h(0.5503±0.0172)起逐渐增加,8 h(0.6221±0.0238)达高峰,与对照组比较(0.1507±0.0165),差异有统计学意义(P<0.01)。海马CA3区caspase-3活性蛋白在对照组未见明显表达,在SE后4~72 h明显增多。与对照组比较,SE组海马XIAP mRNA表达水平在2~8 h增加(P<0.01)。与SE组比较,槲皮素组海马XIAP mRNA表达水平及CA3区XIAP蛋白表达在8 h、24 h高于SE组(P<0.01),CA3区caspase-3活性蛋白表达在8 h、24 h、72 h低于SE组(P<0.01)。结论XIAP可能参与了SE后神经元凋亡的调控过程,槲皮素可以提高SE后海马神经元XIAP的表达。     

细胞外信号调节激酶通路在帕金森病运动并发症中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在左旋多巴诱发的运动并发症中的作用.方法 通过6-羟多巴胺立体定向注射至大鼠前脑内侧前脑束建立帕金森病(PD)动物模型.对建模成功的PD大鼠每日2次左旋多巴(50 mg/kg 加12.5 mg/kg苄丝肼)腹腔注射,持续22 d.在第23天注射左旋多巴前,给予PD大鼠ERK特异性的抑制剂PD98059处理.评估旋转反应时间及剂峰旋转圈数,采用蛋白免疫印迹法检测纹状体区ERK1/2 磷酸化表达情况.结果 长期使用左旋多巴处理使PD大鼠损伤侧纹状体ERK1/2 磷酸化水平显著增强(155.6%±6.5%), 而PD98059 可明显降低ERK1/2磷酸化水平(85.4%±5.6%).同时,PD98059逆转了左旋多巴所诱导的PD大鼠旋转时间的缩短,减少了剂峰旋转次数.此外,蛋白激酶C(PKC)抑制剂能部分减轻ERK1/2磷酸化水平(101.2%±6.2%,与左旋多巴+溶剂组相比较t=3.2,P<0.05).结论 PD运动并发症的发生可能与纹状体ERK通路的激活有关,并且ERK通路的激活部分是PKC所依赖的;抑制ERK通路活性的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.     

急性低氧条件下复氧后大鼠脑HIF-1α、nNOS蛋白的表达与人参皂甙Rd干预

目的观察大鼠脑缺氧状态下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、神经元性一氧化氮合酶(nNOS)蛋白的表达规律及低氧状态下人参皂甙Rd(Rd)干预对其影响并探讨机理。方法将成年Wistar大鼠120只随机分为3组:①急性低氧组(对照组);②低氧预处理组(低氧干预组);③人参皂甙Rd预处理组(药物干预组)。每组按照缺氧后不同时间点再分为4个亚组,各亚组10只大鼠,分别观察各组大鼠海马锥体细胞层神经元形态的变化及HIF-1α、nNOS蛋白的表达规律。结果在缺氧后复氧即刻,我们可以发现HIF-1α、nNOS蛋白的少量表达,主要存在于海马细胞,多在细胞质中表达;随着时间的推移,在复氧后4 h,HIF-1α、nNOS表达渐达高峰,至复氧后9h HIF-1α表达明显减少,而nNOS表达至复氧后24 h明显减少。低氧预处理组及人参皂甙Rd预处理组的实验结果发现HIF-1α、nNOS表达较对照组减少,与急性低氧组各时间点相比,均有统计学意义(P=0.009)。两个干预组之间各时间点比较无统计学差异(P>0.05)。结论急性低氧可以促使HIF-1α、nNOS蛋白在大鼠海马神经细胞的表达,具有时间依赖性;同时低氧预处理及人参皂甙Rd预处理均可促使大鼠脑组织HIF-1α、nNOS表达减少,可能对急性缺氧性脑损伤产生保护作用,其具体机理可能与其抗自由基、抑制Ca2+内流有关     

PDTC对慢性致痫大鼠海马NF-κB及IL-10表达的影响

目的研究NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对慢性致痫大鼠海马组织中核转录因子κB(NF-κB)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响。方法通过腹腔注射亚惊厥量的戊四氮(PTZ)来建立慢性癫痫大鼠模型,并将大鼠分为PTZ模型组、PTZ+PDTC干预组和生理盐水对照组。实验14d、21d、28d和35d分别取大鼠海马组织检测,用实时荧光定量PCR检测癫痫大鼠海马组织中NF-κB/P65和IL-10mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中IL-10蛋白的表达。结果 PTZ模型组海马组织中NF-κB p65 mRNA的表达于14d开始增高,持续至28d,35d后恢复至14d水平,与对照组之间比较差异具有统计学意义(P<0.01);经PDTC干预后,NF-κB p65 mRNA的表达明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.001)。海马组织中IL-10经过PDTC干预后,IL-10 mRNA的表达也明显低于模型组(P相似文献   

戊四氮点燃癫(癎)大鼠海马巢蛋白和骨形成蛋白-4的表达研究

目的观察巢蛋白(nestin)和骨形成蛋白4(BMP4)基因在戊四氮(PTZ)点燃癫大鼠海马中的表达,并探讨两者与癫发病机制的关系。方法将81只成年雄性SD大鼠随机分为实验组(n=54)和对照组(n=27)。实验组采用PTZ点燃癫大鼠,按点燃中的不同时相点,又随机分为9组。用免疫组化技术、地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术,观察海马nestin和BMP4表达的变化。结果nestin阳性细胞在PTZ注射后3d开始出现在齿状回、CA3区和CA1区,到7d达到高峰,以后逐渐减少。BMP4在PTZ注射后7d开始增多,在点燃后1d达到高峰,以后逐渐减少,主要分布在齿状回、CA3区和CA1区。结论PTZ点燃可引起海马内星形胶质细胞增生、活化和神经发生,这可能是癫海马组织胶质化、神经元可塑性的病理基础;BMP4可能在PTZ癫形成过程中起重要作用。     

海人酸致痫大鼠海马NMDAR2B及ERK1/2蛋白表达的变化

目的 通过研究海人酸致痫大鼠海马NMDAR2B及ERK1/2蛋白表达的变化,为进一步探明癫痫脑损伤的机制奠定基础.方法 采用在立体定位仪下,将海人酸注射至大鼠杏仁核的方法制备癫痫模型.将大鼠随机分为正常对照组,假手术组及致痫组,分别于不同时间取材,应用免疫组化的方法观察脑组织NMDAR2B蛋白及ERK1/2蛋白表达的变化.结果 正常海马各区均有极少量的NMDAR2B阳性细胞分布,海人酸致痫组后2h大鼠海马各区NMDAR2B表达迅速增加,6h达高峰,并持续至至癫痫后24h(P＜0.01),ERK1/2蛋白致痫后半小时表达开始增高,3h达高峰,后开始下降,6h后恢复到致<痫前的水平(P＜0.01).结论 NMDAR2B参与了癫痫发生和癫痫脑的长时程的兴奋过程,ERK1/2短时程参与了癫痫的发生过程.     

盐酸美金刚对癫痫大鼠海马GSK-3β表达的影响

目的探讨盐酸美金刚(memantine,MN)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃慢性癫痫大鼠学习记忆能力及海马中糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)表达的影响。方法动物分为正常对照组(NC)、癫痫组(PTZ)、盐酸美金刚干预组(MN),采用PTZ致痫模型,Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot和RT-PCR方法检测大鼠海马GSK-3β、P-GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达。结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。MN组大鼠学习记忆能力明显好转,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。结论 PTZ点燃慢性癫痫大鼠学习记忆受损,其海马组织中P-GSK-3β蛋白表达明显降低,P-GSK-3β可能参与癫痫后认知功能障碍发病机制;盐酸美金刚可提高P-GSK-3β蛋白表达水平,从而改善癫痫大鼠学习记忆能力。     

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马神经元磷酸化Akt表达的影响

目的观察重组人红细胞生成素对戊四氮所致的癫痫持续状态(statusepil epticus,SE)的SD大鼠海马神经元磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响,并应用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步探讨重组人红细胞生成素是否对SE大鼠的海马神经细胞具有保护作用及作用的可能机制。方法采用戊四氮点燃大鼠SE模型。75只SD大鼠随机分为5组(n=15),A组:正常对照组(腹腔注射生理盐水);B组:生理盐水治疗组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后30分钟,再腹腔注射生理盐水);C组:重组人红细胞生成素治疗组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后30分钟,再腹腔注射重组人红细胞生成素);D组:PI3K抑制剂LY294002干预组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后10分钟,再脑室内注射LY294002,SE发作后30分钟腹腔注射重组人红细胞生成素);E组:DMSO(二甲基亚砜)对照组(腹腔注射戊四氮点燃SE发作后10分钟,再脑室注射LY294002的溶剂DMSO,SE发作后30分钟腹腔注射重组人红细胞生成素),检测各组大鼠行为、脑电图的改变及HE染色观察各组海马病理学的改变、免疫组织化学法观察各组磷酸化Akt的表达。结果重组人红细胞生成素治疗组较生理盐水治疗组磷酸化Akt的表达增多;PI3K抑制剂LY294002干预组海马磷酸化Akt表达较重组人红细胞生成素治疗组减少。结论重组人红细胞生成素对SE大鼠的海马神经元具有保护作用,其作用机制可能是重组人红细胞生成素提高了Akt的活性,激活了存活通路PI3K/Akt途径,这可能是重组人红细胞生成素发挥神经保护作用的机制之一。     

侧脑室注射IL-1β、IL-1ra对癫痫大鼠脑皮层、海马Fos蛋白表达的影响

目的　了解外源性和内源性白细胞介素 - 1(IL- 1)对戊四氮 (PTZ)致痫大鼠脑皮层、海马神经元兴奋性的影响。方法　应用流式细胞免疫荧光技术对大鼠大脑皮层、海马 Fos表达进行定量分析。结果　 IL- 1β和IL - 1ra侧脑室注射后再致痫大鼠分别较单纯 PTZ致痫大鼠皮层海马 Fos表达显著增高和下降 (P<0 .0 1,P<0 .0 5)。结论　内源性和外源性 IL- 1β均有增高癫痫大鼠脑皮层及海马神经元兴奋性的作用。     

Toll样受体4/核因子-κB信号通路在癫癎持续状态大鼠海马损伤中的作用

目的 通过观察癫疴持续状态(status epilepticus,SE)后大鼠海马Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor KB,NF-κB)的表达;并观察应用NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)后,对TLR4/NF-κB信号通路及海马损伤的影响,探讨TLR4/NF-κB信号通路在SE后大鼠海马损伤的发生发展过程中的作用.方法 106只SD大鼠随机分为对照组(A组)、SE组(B组)和PDTC干预组(C组),其中B组再随机分为B1～B4组(分别于惊厥后4、24、48和72 h处死),B组和C组采用氯化锂.匹罗卡品法制作大鼠SE模型,C组在大鼠惊厥终止后30 min,给予100 mg/kg PDTC腹腔注射,每天1次,连用3 d.光镜下观察大鼠海马病理学改变;免疫组织化学法检测海马TLR4和NF-κB/p65蛋白的表达变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马TLR4 mRNA表达的动态改变.结果 长程惊厥发作后,脑内神经元损伤存在动态变化,在72 h内随着观察时间的延长,神经元损伤逐渐加重,C组改变较B4组明显减轻.B组各时间点TLR4蛋白的表达(B1组0.1287±0.0260,B2组0.1296±0.0285,B3组0.1330 4-0.0329,B4组0.1604 4-0.0457)均明显高于A组(0.0964±0.0324,t=0.0641～0.3236,P<0.05),并随时间延长明显增高;C组TLR4蛋白表达(0.1271±0.0330)较B4组显著降低(t=-0.0334,P<0.01).B组可见NF-κB/p65蛋白在胞核内有不同程度表达,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组与B4组比较,NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P<0.01).B组各时间点TLR4 mRNA的表达均较A组(0.268±0.072)高(P<0.05),且随时间延长逐步升高,惊厥后72 h达到高峰(1.242±0.100);C组海马TLR4 mRNA的表达(0.984±0.263)明显低于B4组(t=-0.2578,P<0.05).各组TLR4的表达情况与NF-κB/p65一致.结论 ,TLR4及NF-κB/p65在SE后的大鼠海马中表达升高,NF-κB抑制剂PDTC可以下调TLR4的表达,并减轻惊厥后海马病理损伤程度,提示TLR4/NF-κB信号通路在惊厥后海马损伤的发生发展过程中起促进作用.     

雷公藤多甙对致痫大鼠学习记忆及海马Ng和PKC表达的影响

目的研究雷公藤多甙(TWP)在戊四氮(PTZ)所致癫痫大鼠学习记忆障碍中的干预作用及可能机制,探讨神经颗粒素(Ng)和蛋白激酶C(PKC)在癫痫大鼠海马组织中的表达的影响。方法通过水迷宫及Y迷宫筛选方式挑选学习记忆功能正常的SD大鼠90只,随机分为PTZ致痫组、TWP低剂量组(TWP1)、TWP高剂量组(TWP2)、正常对照组,采用戊四氮(PTZ)腹腔注射慢性点燃癫痫。用水迷宫和Y迷宫对4组大鼠进行学习记忆能力检测,运用实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附法分别检测其海马组织Ng和PKC基因mRNA及相应蛋白的表达水平。结果与PTZ组相比,TWP干预组大鼠在水迷宫中提高,其学习记忆能力接近NC组(P0.05);而4组逃避潜伏期差异无统计学意义(P0.05)。在Y迷宫TWP干预组错误反应次数比PTZ组明显减少(P0.05),其行为能力接近NC组(P0.05);但4组在全天总反应时间上的差异无统计学意义(P0.05)。经TWP干预后大鼠海马Ng和PKC基因mRNA及相应蛋白的表达上调,与PTZ组比较,差异具有统计学意义(P0.05),上调水平与NC组接近(P0.05);而TWP1和TWP2两组之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论 TWP可有效改善PTZ所致癫痫大鼠的学习记忆能力,这与上调大鼠海马组织Ng及PKC表达水平密切相关。     

右美托咪定调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨右美托咪定(DEX)调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法通过腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱构建癫痫持续状态(SE)大鼠模型,并随机分为4组,每组各10只。SE+DEX组在SE模型构建成功后腹腔注射DEX 1μmol/L,阳性对照组腹腔注射1μmol/L苯巴比妥,药物干预24 h后,通过Nissl法和TUNEL法检测大鼠海马神经元损伤及凋亡情况,Western blot法检测大鼠海马组织中MAPK、p ERK、p CREB蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax表达。结果与正常对照组相比,SE、阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著增加(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞数、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05)。与SE组相比,阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著降低(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05)。结论 DEX可能通过抑制MAPK/ERK-CREB通路抑制海马神经元凋亡对其有保护作用。