荷叶中紫云英苷和牛血清白蛋白相互作用的光谱学研究

本文采用荧光光谱法、紫外光谱法研究在生理条件(pH=7.4)下荷叶中紫云英苷(AST)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明AST可与BSA结合并通过静态猝灭作用机制对BSA内源性荧光进行猝灭。在温度为298K及308K时,测得其猝灭速率常数(Kq)分别为4.31×1013L/mol/s和3.72×1013L/mol/s;结合常数(Kd)分别为2.009×105L/mol和0.927×105L/mol;结合位点数(n)分别为0.943和0.893。依据298K时测定的反应自由能变(△G0=-30.25kJ/mol),反应焓变(△H0=-59.02kJ/mol)及反应熵变(△S0=-96.54J/mol/K),结果发现AST与BSA间的结合反应可自发进行且其作用力主要表现为氢键和范德华力。此外,根据Frster非辐射能量转移理论得到AST与BSA之间的结合距离(r)为4.13nm,表明非辐射能量可从BSA转移至AST。     

牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。     

水溶性壳聚糖与牛血清白蛋白相互作用的研究

采用紫外和荧光光谱研究了水溶性壳聚糖(CS)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。结果表明:随CS浓度的增加,BSA的紫外吸收光谱表现出明显的增色效应和较小的紫移;CS可以猝灭BSA的内源荧光,其猝灭机理是CS与BSA形成复合物的静态猝灭。并且测定了在不同温度下,该反应的结合常数KA分别为6.92×106(298 K),5.01×106(308 K),3.31×106(318 K),CS与BSA以摩尔比1∶1结合。同时采用同步荧光光谱法探讨了CS对BSA构象的影响。     

芦丁与人血清白蛋白相互作用的紫外可见光谱特性研究

本文通过测定芦丁与HSA相互作用前后的紫外可见吸收光谱、圆二色性及人血清白蛋白(HSA)的荧光特性,研究了芦丁与HSA结合作用。结果表明,芦丁在紫外区有三个特征的吸收峰(264.0、285.5及354.5nm)、在330～300 nm及300～230 nm处显示圆二色性,HSA引起芦丁紫外可见吸收光谱波峰红移;芦丁与HSA相互作用后,不引起HSA二级结构的改变,但对其三级结构有影响,同时对HSA荧光激发及发生光谱最大峰位及幅度有影响。     

牛血清白蛋白对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响

以小鼠原核期胚胎为对象,以胚胎的存活率、卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数作为检测指标,在M2液的基础上添加8种浓度(0,2,4,8,16,32,64,96mg/mL)牛血清白蛋白(BSA)配置防冻液,探讨防冻液和玻璃化冷冻后对胚胎发育的影响。BSA防冻液对胚胎发育影响的实验结果表明,8个浓度组间以及与对照组间胚胎的卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),说明在防冻液中加入一定浓度的BSA对小鼠胚胎无毒性作用。防冻液经玻璃化冷冻后对胚胎发育影响的实验表明,8个浓度组间冷冻胚胎复苏后的存活率、卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数无显著差异(P>0.05)。表明BSA在这种防冻液中没有明显的保护作用。从经济、实用、生物安全角度考虑,不支持在玻璃化防冻液中添加BSA。     

荧光法研究血清白蛋白与药物的结合作用

本文应用荧光光谱法,观测了药物分子头孢菌素Ⅳ、异烟肼、维生素B_6和氟哌酸对白蛋白荧光的猝灭。由Lineweaver-Burk双倒数作图法,确定了药物与白蛋白作用的离解常数。并通过Forster偶极-偶极无辐射能量转移机理确定了药物分子氟哌酸在人血清白蛋白中与色氨酸残基之间的距离R为2.55nm,由这一距离确定了药物分子可能进入的区域和位置。     

荧光光谱法研究淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白的相互作用

在模拟生理条件下应用荧光光谱学方法分别研究了淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白（BSA）间的结合作用. 根据荧光强度数据,计算出了结合常数KA,结合位点数n和热力学参数（△G, △H 和△S）. 实验结果表明,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ都能显著猝灭BSA的内源荧光,猝灭机制均为形成基态复合物的单一静态猝灭过程. 不同温度下（17 ℃, 27 ℃, 37 ℃）得到的KA和n值,表明淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合强于淫羊藿苷. 从得到的热力学参数判断,淫羊藿苷与BSA间的主要作用力是氢键作用和范德华力,而疏水作用和静电引力在淫羊藿次苷Ⅰ与BSA形成复合物过程中起主导作用.而且同步荧光光谱显示,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合导致BSA构象发生了变化.     

魔芋葡苷聚糖(KGM)凝胶为亲和层析载体与 Sepharose 4B的比较研究Ⅱ.KGM染料亲和层析分离人血清白蛋白

将KGM和Sepharose 4B凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Cibacron Blue F3GA制成了KGM和Sepharose 4B染料亲和吸附剂,并用来与牛血清白蛋白(BSA)作用,每毫升KGM亲和吸附剂可吸附BSA 28 mg,用NaSCN洗脱时回收为84.5%,而Sepharose 4B梁料亲和吸附剂每毫升可吸附BSA 15.3 mg,用NaSCN洗脱时回收为81.7%,并对两种凝胶的染料亲和吸附性能进行了比较.用KGM染料亲和吸附剂分离的人血清白蛋白与人血清白蛋白标准品有同样的纯度,都达到了电泳纯.     

诺氟沙星与牛血清白蛋白相互作用的研究

用荧光光谱法研究诺氟沙星与牛血清白蛋白之间的结合作用,确定了诺氟沙星与牛血清白蛋白的荧光猝灭机制为静态猝灭.通过测定和计算不同温度下该结合反应的结合常数和结合位点数,并根据热力学方程求得了结合反应的热力学参数,讨论了两者间的主要作用力类型是范德华力和氢键.同时采用同步荧光技术考察了诺氟沙星对BSA构象的影响.并从荧光寿命进一步证明诺氟沙星与牛血清白蛋白的荧光猝灭机制为静态猝灭.     

栀子果实成熟度对栀子苷含量积累的影响

目的:考察栀子果实成熟度与栀子苷含量积累的关系,为确定最适采收期奠定基础。方法:以不同成熟度的栀子果实为样品,采用高效液相色谱法测定栀子苷含量,并进行对比。结果:6个不同成熟度果实样品的栀子苷含量随成熟度提高而下降,果实全青渐变色时栀子苷含量最高(8.469%);在果实3/4红前含量下降缓慢(-3.71%),差异不明显;果实全红后含量下降显著(-12.18%～32.55%)。结论:药用栀子果实的采摘应以果实全青渐变到果实3/4红前及时采摘。     

壳聚糖钴与牛血清白蛋白相互作用的研究

采用紫外-可见吸收和荧光光谱,研究了壳聚糖钴与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果发现:随壳聚糖钴浓度的增加,BSA的紫外-可见吸收光谱表现增色效应和较小的蓝移;壳聚糖钴可以猝灭BSA的内源荧光,其猝灭机理属于静态猝灭。在室温下,壳聚糖钴与BSA的的结合常数KA为2.40×106。     

人血清白蛋白荧光的红际激发效应

研究了人血清白蛋白中色氨酸的荧光红际激发效应,阐明了人血清白蛋白的红际激发效应与ＰＨ,温度及尿素浓度存在一定的关系,外界条件的改变使得色氨酸残基所处的微环境发生了变化,使得色氨酸残基的基态和激发态的能级产生不同的分布,从而得到不同的红际激发效应。     

糖化血清白蛋白检测对2型糖尿病患者短期血糖控制的疗效评价(英文)

目的:探讨糖化血清白蛋白(glycate dalbumin,GA)作为反映近期(2周内)血糖控制总体水平的指标在糖尿病人群中的临床应用价值。方法:选取2010年6月-2013年7月间深圳市福田区中医院住院的2型糖尿病(T2DM)患者323例,测定空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2hPG)、1日指尖血糖谱均值(MBG)、GA、糖化血红蛋白(HbAlc)等,并对其中92例住院近2周的患者分别在入院后6天及12天复查上述指标。结果:GA与HbAlc(r=0.791),FPG(r=0.541),2hPG(r=0.456),MBG(r=0.401),均呈正相关(P均0.01);患者入院6天检测GA为(27.1±5.45)%,入院12天为(22.77±4.34)%,均显著低于入院第一天的(30.31±6.75)%(P0.01);入院6天和12天,患者的GA较入院时分别下降3.12%和7.54%(P0.01);HbAlC分别下降0.31%和0.78%,GA下降降幅显著大于HbAlc(P0.01)。结论:GA可及时、准确的反映短期(1~2周)平均血糖的变化情况,并与长期血糖控制的金标准HbAlC有良好的相关性,是监测糖尿病患者血糖控制的良好指标。     

羧甲基化壳聚糖季铵盐与牛血清白蛋白的相互作用研究

应用荧光光谱研究了羧甲基化壳聚糖季铵盐(CMCQA)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.研究表明:CMCQA对BSA内源性荧光猝灭机制属于CMCQA和BSA形成复合物所引起的静态猝灭.在室温下,二者的结合常数为2.45×104 L/mol,结合位点数为1.04.二者主要靠静电引力相互作用.     

高速逆流色谱分离制备栀子苷

以栀子苷粗提取物为原料,采用高速逆流色谱法分离栀子苷,溶剂系统为A:乙酸乙酯∶正丁醇∶水(2∶1.5∶3)和B∶正丁醇∶水(1∶1),上相为固定相,下相为流动相,流速为2.0 mL/min,转速为850 r/min,温度控制在25℃,纯度用HPLC测定.结果表明,利用溶剂系统A和B进行HSCCC制备栀子苷,使栀子苷含量从50.75％(HPLC)分别提高至86.6％和91.8％,回收率分别为81.36％和78.12％.     

罗丹明类荧光分子探针与血清白蛋白之间相互作用的研究

本研究旨在对罗丹明类荧光探针ZM-6与人血清白蛋白(HSA)的相互作用进行研究。采用了荧光光谱法、三维荧光光谱法、同步荧光光谱法以及CD光谱法在模拟生理条件下对二者的相互作用以及HSA的构象进行了研究。研究结果表明,探针与ZM-6之间的猝灭机理主要是静态猝灭方式。根据热力学数据确定了二者之间的作用力,类型为范德华力和氢键。二者之间的结合距离为4.45 nm。同时得出,ZM-6对HSA的构象产生了影响。此研究对于探针分子的设计以及修饰提供有效的数据以及理论支持。     

牛血清白蛋白对Cu^2＋与δ-MnO2间吸附平衡性质的影响

研究了溶液中牛血清白蛋白（BSA）的存在对Cu^2＋与δ-MnO2间吸附平衡性质的影响,旨在增进人们对Cu^2＋环境化学行为的认识。结果表明：BSA存在下,Cu^2＋在δ-MnO2表面的吸附率-pH曲线呈典型的“S”形,加入BSA使Cu^2＋的吸附突跃向高pH方向移动,影响程度与BSA的加入方式有关,其次序为Ⅳ（先加BSA后加Cu^2＋）〉Ⅲ（Cu^2＋和BSA同时加）≈Ⅱ（（先加Cu^2＋后加BSA）;BSA存在下,Cu^2＋的等温吸附线遵循Langmuir等温吸附方程,Cu^2＋的饱和吸附量随BSA浓度的增大而减小,并随BSA的加入方式而改变,其次序为I（不加BSA）〉Ⅱ≈Ⅲ〉Ⅳ;Cu^2＋在δ-MnO2上的饱和吸附量随温度的升高而增大。在pH=3．0条件下,Cu^2＋在δ-MnO2上的吸附是完全可逆的,但pH=5．0的条件下,吸附是不可逆的,BSA对Cu^2＋的吸附可逆性没有影响。     

人血清白蛋白纯化技术研究进展

本文综述了国内外关于血浆人血清白蛋白（pHSA）和基因重组人血清白蛋白（rHSA）分离纯化的进展和发展趋势。以冷乙醇沉淀为主的pHSA分离方法仍是目前多数工业采用的工艺,但近年来发展的离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术具有自动化程度高、生产周期短、更符合GMP等特点,正在逐步取代传统的冷乙醇沉淀法。当前用基因工程技术表达的人血清白蛋白对分离纯化提出了新的挑战。为获得高纯度、安全、稳定的产品,各种色谱分离技术得到更多的应用,其中扩张床离子交换色谱可以省去离心、过滤等传统固液分离操作。尽管rHSA的纯化技术已有一定的发展,但纯化过程仍需进一步优化以提高产品纯度及收率。