圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的:利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导药用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法:采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果:利用发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg.L-1NAA转化率最高。结论:圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的：利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导约用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法：采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果：利川发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg·L^-1 NAA转化率最高。结论：圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响

目的:探讨外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响。方法:将稳定继代的黄芩愈伤组织在含有不同浓度NAA或KT的MS液体培养基悬浮震荡培养,光照16 h黑暗8 h进行培养18 d后,采用HPLC的方法,测定黄芩苷的含量,采用酶联免疫吸附法测定内源激素的含量,以黑暗条件为对照。结果:①与对照组相比,光照和黑暗条件下分别加入0.2 mg.L-1NAA后,黄芩苷含量显著降低,分别为未加入NAA时的2.56%,3.36%。②黑暗条件下,加入外源NAA后,ZR含量显著降低,但IAA,ABA和GAs含量变化不明显。③0.2 mg.L-1 NAA和不同浓度KT的协同作用对黄芩苷的含量呈现先增长后降低的趋势。其中1.0 mg.L-1的KT作用下黄芩苷含量最高,且黑暗条件下显著高于光照条件,达到2.13μg.L-1。结论:外源生长素不利于黄芩有效成分黄芩苷的积累,0.2 mg.L-1 NAA+1.0 mg.L-1 KT的组合对黄芩苷的积累量具有显著的促进作用。     

植物激素对丹参毛状根生长和丹参酮生物合成的影响

目的:研究植物激素对固体培养丹参毛状根生长和丹参酮ⅡA生物合成的影响。方法:组织培养法诱导毛状根、超声法提取丹参酮、高效液相色谱法测定丹参酮。结果:在1/2 MS培养基中添加一定浓度GA3与6-BA的组合激素对丹参毛状根生长有抑制作用,最高抑制作用达到100%(毛状根死亡),而添加1.0 mg/L KT与1.0mg/L IBA的组合激素则可以明显促进丹参毛状根的生长,生长量是对照的3.251倍;添加0.2 mg/L NAA和3.0mg/L 6-BA与3.0 mg/L NAA的组合激素时丹参毛状根体内丹参酮ⅡA的总含量最高;添加2.0 mg/L 6-BA则对丹参酮ⅡA的生物合成有显著促进作用,丹参酮ⅡA浓度是对照的3.012倍。结论:在丹参毛状根培养基中加入不同的植物激素及其组合激素对毛状根的生长和丹参酮ⅡA的生物合成有显著的影响。     

白色紫锥菊不定根诱导及咖啡酸衍生物积累研究

以白色紫锥菊试管苗子叶为外植体,研究了植物生长素2,4-D,IAA,IBA,NAA对不定根诱导以及IBA浓度对液体悬浮培养中不定根的生长及咖啡酸衍生物积累的影响,并进行了生物反应器培养.结果表明,对白色紫锥不定根诱导最适合植物生长素是IBA1.0mg· L-1,不定根诱导数目达到22.5根/培养皿.液体悬浮培养中IBA 1.0 mg·L-1最适合不定根生长及咖啡酸衍生物的积累.白色紫锥菊不定根在5L气升式生物反应器中培养30 d后可获得8.98 g· L-1干重,是三角瓶悬浮培养干重4.38 g·L-1的2.05倍;生物反应器培养的不定根中紫锥菊苷质量分数为14.08 mg·g-1(干重),是栽培根的2.4倍;氯原酸,菊苣酸,总咖啡酸衍生物含量是栽培根的4.0 ～25.6倍.该研究为大量生产紫锥菊药品可提供富含紫锥菊苷等咖啡酸衍生物的高品质生物医学药材.     

决明毛状根诱导及激素与诱导子对毛状根生长和蒽醌类化合物合成的影响

目的研究激素与诱导子对决明毛状根生长和蒽醌类化合物合成的影响。方法用发根农杆菌LBA9402感染决明Gassia obtusifolia外植体，建立决明毛状根培养系统。结果NAA为决明毛状根培养的最适外源激素，培养基中添加0．05％NAA可使毛状根中5种蒽醌类化合物总和提高4倍。黑曲霉诱导子对毛状根生长影响不大，却明显促进蒽醌类化合物的形成，其中每50mL培养基加入2．0mL诱导子可使蒽醌类化合物总量增加2倍多。茉莉酸(JA)对决明毛状根中蒽醌类化合物合成具有明显的促进作用．其中10μmol/L作用最强，蒽醌类化合物总量比对照提高73％，JA对毛状根生长有抑制作用，但不太显著。结论为进一步筛选适宜的决明毛状根培养系统并调控次生代谢产物的研究奠定了基础。     

基于茉莉酸甲酯诱导的丹参毛状根酚酸类成分次生代谢机制研究

目的:研究外源茉莉酸甲酯诱导后丹参毛状根中酚酸类有效成分形成的次生代谢分子机制.方法:用茉莉酸甲酯(MJ,100μmol·L-1)对丹参毛状根进行诱导实验,分别在0,6,12,24,36h收获材料,运用实时定量PCR对丹参中迷迭香酸次生代谢途径上的关键酶基因的mRNA表达水平进行检测.同时,采用LC-MS测定各个时间点毛状根材料中迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(LAB)及咖啡酸(CA)的含量.结果与结论:外源性信号分子MJ作用于丹参毛状根,酚酸类成分迅速积累,表现为CA,RA均在诱导后24h达到最大值,LAB的含量36h后达到最高.其诱导机制可能与不同程度的激活RA合成中苯丙氨酸途径上关键酶基因PAL,4CL,C4H与酪氨酸途径中TAT,HPPR基因的表达有关,基因表达在时间呈现先后性,其中,4CL与PAL的贡献度较大.这为今后更深一步的研究丹参水溶性酚酸类成分的次生代谢途径机制提供了依据.     

不同激素对冬凌草花瓣愈伤组织的诱导及其次生代谢产物的影响

目的:研究不同激素对冬凌草花瓣愈伤诱导及次生代谢产物含量的影响。方法:以冬凌草花瓣为外植体,在1/2 MS附加不同激素配比的培养基上诱导愈伤组织,HPLC法测定冬凌草甲素、乙素的含量,研究不同处理对愈伤组织诱导及次生代谢产物的影响。结果:当NAA的浓度过高时将会引起冬凌草花瓣愈伤组织的褐化。在一定浓度范围的6-BA可以促进冬凌草花瓣愈伤组织中冬凌草乙素的生物合成。1/2 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1为冬凌草花瓣愈伤组织诱导最佳培养基。结论:不同激素对冬凌草花瓣愈伤组织的诱导及冬凌草乙素的含量影响不同,为进一步研究冬凌草愈伤组织的培养提供了依据。     

影响金铁锁毛状根生长及皂苷积累的因素

目的优化金铁锁毛状根液体培养基、碳源、激素和培养条件,促进毛状根生长及皂苷的积累。方法将毛状根置于添加了碳源和植物生长调节剂的液体培养基中培养,观察其形态、色泽变化,测定其生物量和皂苷含量。结果金铁锁毛状根在含有30 g.L-1蔗糖的12MS中生长最快;6-BA、2,4-D均能促进皂苷的合成,但对毛状根的生长有抑制作用;添加少量的NAA、IAA、IBA都能促进毛状根的生长和皂苷产量的提高,当分别添加0.5 mg.L-1NAA、IAA、IBA时,皂苷产量较对照品提高53.42%,25.55%,79.60%。结论通过液体培养基、碳源、激素等因素的改变,可以提高金铁锁毛状根的生长速度和皂苷的含量。     

三角叶黄连愈伤组织诱导和培养条件的优化

目的:对三角叶黄连愈伤组织的培养条件进行优化,建立三角叶黄连组织培养的技术体系.方法:采用响应面方法( RSM)中的Box-Behnken设计方法优化三角叶黄连愈伤组织增殖的最佳激素配比;考察不同培养基、外植体、温度、光照条件对三角叶黄连愈伤组织诱导的影响.结果:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率最高,为12.67％,最佳培养条件为(15±2)℃,暗培养.2,4-D,KT是影响三角叶黄连愈伤组织形成的主要因素,其次为NAA.结论:三角叶黄连愈伤组织诱导的最适培养基为6,7-V +2,4-D0.5 mg·L-1+KT 2.0 mg·L-1,增殖的最适培养基为6,7-V +2,4-D 4.6 mg·L-1+KT3.8 mg·L-1+NAA2.4 mg·L-1.     

光照和植物生长物质对宁夏枸杞正常根和发状根离体生长的影响

目的:探索光照和植物生长物质对宁夏枸杞无菌苗正常根和发状根离体生长的影响,建立离体根的最佳培养体系。方法:以宁夏枸杞无菌苗正常根和发根农杆菌A₄诱导叶外植体再生的发状根为材料,观察根切段在光照、植物生长物质种类和含量等不同的培养条件下的生长(长长、侧根形成)情况。结果与结论:MS培养基中添加植物生长物质(IAA,IBA,NAA)能够诱导宁夏枸杞正常根切段的生长和分枝形成,而1 mg.L^-1IBA的存在最适合于正常根的长期离体培养。在无激素培养基上,光照能促进Ⅱ型发状根的长度增长和分枝侧根,却不利于Ⅰ型发状根的生长。在添加的3种外源植物生长物质(IAA,IBA,NAA)中,低含量的IAA更适合于Ⅰ型发状根的增长培养;而在促进Ⅱ型发状根的增长和侧根形成方面,1 mg.L^-1IBA的作用最强。随着植物生长物质添加含量的增加,Ⅱ型发状根的愈伤组织化程度也加大,同时也抑制了从发状根或其形成的愈伤组织上形成新的分枝侧根。     

天山雪莲组培苗生根培养体系的优化

 目的 研究不同培养基、不同植物激素和活性炭对天山雪莲组培苗生根的影响。 方法 采用 7 种培养基, 3 种植物激素和不同添加量的活性炭,通过测定天山雪莲的根长、根数和生根率 3 个生根指标来筛选最适生根培养基。 结果 有 4 种培养基可以促进生根,其中 White 培养基的效果最佳,根长达 3.431 cm ,根数 2 条,生根率达 80% ;添加生长素 IAA( 吲哚乙酸 ) 、 IBA( 吲哚丁酸 ) 和 NAA( 萘乙酸 ) 均可以促进生根,其中 0.2 mg·L^-1 的 IAA 的效果最佳,根长达到 1.294 cm ,平均根数达到 8 条 , 生根率为 100% ;添加活性炭可以提高生根质量,最适添加量为 1 g·L^-1 。此时,平均根长为 1.620 cm ,平均根数为 9 条,生根效果最佳。 结论 天山雪莲组培苗最适生根培养基为 White+0.2 mg·L^-1 IAA+1 g·L^-1 活性炭。     

黄花蒿发根的生长及部分代谢成分的特征研究

目的:研究黄花蒿发根的生长形态和部分次生代谢物特征。方法:比较发根和未转化根的形态差异,测定生长调节剂如萘乙酸(NAA)和赤霉素(GA3)对根生长的影响,分析了发根和未转化根的部分次生代谢物的含量特征。结果:低浓度NAA(0.01～0.05 mg.L-1)能明显促进发根侧根和次侧根的形成,对未转化根则无显著作用,高浓度NAA(0.1 mg.L-1)抑制发根的生长,而对未转化根的生长起促进作用。未转化根中不含有青蒿素,而在发根中检测到较高含量的青蒿素(0.64 mg.g-1),未转化根中青蒿乙素含量较高(1.24 mg.g-1)。在未转化根和发根中,青蒿黄酮chrysoplenetin含量相当,而发根中另一种黄酮化合物artemitin含量(0.76 mg.g-1)是未转化根的3.5倍。结论:黄花蒿发根具有较独特的生长和次生代谢特征。     

Enzymatic degradation of cichoric acid in Echinacea purpurea preparations

Cichoric acid (2R,3R-O-dicaffeoyltartaric acid) (1) is highly susceptible to enzymatic degradation during the preparation of Echinacea purpurea products. Degradation of 1 and other caffeic acid derivatives can be inhibited by antioxidants added to the extraction solvent or in buffered protein extracts saturated with nitrogen. Inhibitor studies conducted with protein extracts prepared from dried overground parts of E. purpurea revealed that polyphenol oxidases (PPO) but not peroxidases are responsible for the oxidative degradation of exogenous and endogenous caffeic acid derivatives. With a view to stabilizing aqueous extracts with respect to their content of 1, the effects of ascorbic acid and ethanol were tested. Compound 1 was not stable under conditions where oxidative processes could almost be excluded. It was found that an esterase hydrolyzing the ester bonds between tartaric acid and caffeic acid is still active under PPO inhibitory conditions. Finally, addition of 40% ethanol and 50 mM ascorbic acid to aqueous extracts of "Echinaceae purpureae herba" resulted in a constant amount of cichoric acid over four weeks.     

金樱子组织培养及植株再生研究

目的对金樱子茎段进行离体培养研究,为金樱子人工培育种苗提供依据。方法用带腋芽的茎段作外植体,采用不同激素配比的MS培养基进行诱导培养。结果金樱子丛生芽诱导用MS+6-BA1.8mg·L-1+KT0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培养基较佳;芽继代增殖用MS+6-BA1.5mg·L-1+KT0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培养基,其增殖系数达12.0;诱导生根用1/4MS+NAA0.2mg·L-1+IBA0.2mg·L-1培养基,根多、粗壮,生根率达100%。结论本研究结果对人工培育金樱子种苗是可行的。