MnSOD模拟化合物诱导人白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡

目的:研究锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞增殖抑制及诱导凋亡作用.方法:以人白血病高表达耐药基因(mdr1)的K562/ADM多药耐药细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;光学显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin v/PI双标记法检测K562/ADM细胞凋亡.结果:(1-50),mg/L MnSODm可抑制K562/ADM细胞增殖(P＜0.01),并呈时间和浓度依赖性.MnSODm诱导48h后,K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双染显示凋亡细胞显著增高.结论:MnSODm体外明显抑制人白血病K562/ADM耐药细胞的增殖,并诱导K562/ADM细胞凋亡.     

TNF-α对白血病K562及K562/ADM细胞hTERT及mdr1表达的抑制作用

目的:观察TNF-α对人髓系白血病细胞K562及其耐药细胞K562/ADM hTERT基因表达、端粒酶活性的抑制以及对多药耐药(multidrug resistance-1,mdrl)基因表达的影响。方法:K562及K562/ADM细胞传代培养,加入5×10~6U/L的TNF-α培养24h进行诱导实验;MTT法检测K562和K562/ADM细胞的增殖能力,流式细胞术检测K562和K562/ADM细胞的凋亡,RT-PCR检测hTERT和mdrl mRNA的表达,ELISA法检测端粒酶活性。结果:TNF-α诱导K562及K562/ADM细胞表现持续的生长抑制作用,且具有时效关系(P<0.05);TNF-α诱导K562及K562/ADM细胞的凋亡率增加(P<0.05),而且耐药细胞K562/ADM凋亡的增加更明显(P<0.01);hTERT基因与端粒酶活性的表达密切相关(r=0.983,P<0.05),TNF-α诱导后两者也同时下调(P<0.01);多药耐药mdrl基因伴随着hTERT基因的下调而下调(r=0.966,P<0.05)。结论:TNF-α能诱导白血病K562及K562/ADM细胞系hTERT基因表达的抑制,端粒酶活性下调的同时多药耐药基因mdrl的表达也下调。     

硒酸酯多糖通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM细胞凋亡抑制

目的:研究硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrageenan,KSC)对多药耐药K562/ADM细胞的诱导凋亡效应及其分子机制。方法:以白血病多药耐药细胞K562/ADM为KSC作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,形态学、DNA片段化和流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;FCM测定P-gp蛋白表达水平和Caspase-3活性。结果:KSC显著抑制K562/ADM细胞增殖,KSC诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化、DNA片段化和亚G1期细胞群等特征性改变。KSC下调K562/ADM细胞mdr1基因表达、抑制P-gp合成,并上调caspase-3基因表达、增强caspase-3活性。结论:KSC通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM多药耐药细胞的凋亡抑制。     

P-gp、bcl-2蛋白表达在人红白血病多药耐药现象中的意义

目的：探讨P-gp、bcl-2蛋白在人红白血病多药耐药中的作用。方法：用MTT法、原位末端转移酶标记法、流式细胞术等分别对蝎毒诱导人红白血病耐药细胞株(K562／ADM)及敏感细胞株(K562)凋亡及其P-gp、bcl-2蛋白表达进行研究。结果：蝎毒可明显抑制K562及K562／ADM细胞生长和诱导细胞凋亡(P＜0.05，P＜0.01)，其作用强度在一定范围内呈现对浓度的依赖性；耐药细胞株中P-gp、bcl-2蛋白表达明显强于敏感细胞株；蝎毒可抑制K562／ADM细胞中P-gp、bcl-2蛋白表达。结论：凋亡抑制基因bcl-2编码蛋白的过度表达可能是人红白血病多药耐药细胞凋亡耐受的分子基础，细胞凋亡与肿瘤细胞的耐药密切相关。     

维生素E琥珀酸酯下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM耐药细胞的凋亡抑制

目的研究维生素E琥珀酸酯(VitaminEsuccinate,VES)诱导多药耐药K562/ADM细胞凋亡的分子机制。方法采用四氮唑蓝比色法(MTT)检测K562/ADM增殖活性;细胞形态学和AnnexinV/PI双标记法检测细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;流式细胞法(FCM)测定P-gp蛋白表达水平和Caspase-3活性。结果VES显著抑制K562/ADM细胞的增殖;经VES处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变;AnnexinⅤ/PI双染检测凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)合成明显降低,Caspase-3mRNA表达和Caspase-3活性显著增强;VES增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性。结论VES诱导mdr1/P-gp高表达的K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制为下调mdr1/P-gp表达而逆转P-gp介导的细胞凋亡抑制和耐药性。     

中药提取物逆转K562/ADM细胞的耐药作用及其分子机制的探讨

目的 观察两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷对多药耐药(MDR)K562/ADM细胞的耐药逆转作用,探讨其分子机制.方法 建立阿霉素(ADM)诱导K562/ADM细胞耐药模型,分别将不同浓度黄芩苷、京尼平苷作用于K562/ADM细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对化疗药物的敏感性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(mdr-1)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)基因在mRNA水平的表达变化.结果 两种中药提取物黄芩苷、京尼平苷,可增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,K562/ADM细胞增殖受到明显抑制,耐药逆转倍数分别为1.95倍及1.46倍;RT-PCR检测mdr-1基因表达减弱,Topo Ⅱ基因表达增强(P<0.01).结论 黄芩苷、京尼平苷可通过降低K562/ADM细胞mdr-1基因表达和提高TopoⅡ的表达来逆转白血病细胞MDR.     

补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数.结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值.结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药.     

川芎嗪与β-榄香烯联合应用诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的实验研究

目的:探讨不同作用机制的川芎嗪(Tetrainethylpyrazine,TMP)与β-榄香烯(β-elemene)联合应用,从多环节逆转耐药细胞K562/ADM的多药耐药(multidrug resistance,MDR),以期进一步提高逆转效果.方法:采用MTT法检测细胞的药敏性及抗药性逆转,流式细胞术及透射电镜检测细胞凋亡,应用SPSS(10.0 Production Pacility)软件包对实验结果进行统计学处理.结果:1)非细胞毒性浓度的TMP(350μg/ml)及β-榄香烯(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转耐药倍数分别为2.03倍及2.18倍.β-榄香烯(4.0μg/ml)具有诱导该细胞凋亡的作用.2)上述两种药物以非细胞毒性浓度联合应用,对ADM的逆转倍数为4.65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和.其主要逆转机制是两药的联合应用通过升高细胞内ADM的浓度,诱导该细胞凋亡的途径,实现提高逆转效果的目的.结论:TMP和β-e榄香烯联合应用能明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性和诱导该细胞的凋亡.     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E 琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法: 以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性, Wright Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2 和p53 蛋白表达水平。结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P= 0 .004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示,G1 期阻滞,亚G1 期细胞比例增高,P=0 .005;Fas蛋白表达明显上调,P=0. 002;Bcl -2蛋白表达下调,P=0. 000;p53蛋白表达无明显变化。结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl 2表达有关。     

miR-139过表达降低急性髓系白血病TRAIL耐受性

目的:探讨miR-139过表达对急性髓系白血病肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)耐受性的影响。方法:采用浓度为100、200、300和400 ng/ml TRAIL处理人急性髓系白血病K562、HL-60细胞及相对应的多药耐药K562/A02和HL-60/ADM细胞,采用CCK8法计算IC50值,以IC50法评价急性髓系白血病细胞对TRAIL的敏感性。RT-PCR检测miR-139在 TRAIL敏感细胞和耐药细胞中的表达。采用脂质体2000将miR-139 mimics转染至TRAIL耐药细胞株,RT-PCR检测转染效果,CCK8法检测细胞活力及IC50值,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:在K562、K562/A02、HL-60和HL-60/ADM细胞中,HL-60/ADM细胞对TRAIL最为敏感,而K562细胞对TRAIL的耐药性最强。与敏感细胞株HL-60/ADM相比,miR-139在耐药细胞株K562中表达显著下降。转染miR-139 mimics后,K562细胞中miR-139表达和细胞凋亡率明显升高,而细胞存活率及IC50值明显降低。结论:miR-139在TRAIL耐药细胞株K562中低表达,过表达miR-139可能通过促进TRAIL诱导的细胞凋亡降低K562细胞对TRAIL的耐受性。     

β-榄香烯逆转K562/ADM细胞MDR机制的探讨

目的:探讨β-榄香烯(β-elemene)对多药耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转及作用机制。方法:MTT法检测抗药性逆转,免疫组化检测Bcl-2及P-gp蛋白的表达,流式细胞术对凋亡百分率及Bcl-2、P-gp蛋白的表达进行定量检测。结果:非细胞毒性浓度的β-elemene(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),逆转倍数为2.18倍;明显增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由(1.88±0.11)%上升至(3.93±0.06)%(P<0.01);降低耐药细胞Bcl-2及P-gp的表达,Bcl-2的表达率由(94.8±1.9)%降至(66.7±0.9)%,P-gp的表达率由(98.7±2.1)%降至(76.8±1.4)%。结论:β-榄香烯可部分逆转K562/ADM细胞的耐药性,其逆转机制具有异质性,主要以抑制Bcl-2的表达从而诱导细胞凋亡来逆转MDR,同时兼具降低P-gp表达的作用。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

浙江蝮蛇蛇毒成分逆转多药耐药白血病K562/ADM细胞耐药性分析

[目的]探讨浙江蝮蛇蛇毒提取物逆转K562/ADM细胞耐药的作用及机制.[方法]通过MTT法检测不同浓度浙江蝮蛇蛇毒提取物对K562/ADM细胞阿霉素(ADM)的IC50影响,分析其逆转耐药活性;通过实时定量PCR法检测浙江蝮蛇蛇毒提取物对K562/ADM细胞MDR1及GST-π耐药基因表达的影响.[结果]浙江蝮蛇蛇毒提取物呈浓度依赖性地降低K562/ADM细胞对ADM的IC50.实时定量PCR法检测结果显示,浙江蝮蛇蛇毒提取物作用后K562/ADM细胞内MDR1及GST-π基因表达水平有下调趋势,且随蛇毒提取物浓度增加下调趋势逐渐明显.[结论]浙江蝮蛇蛇毒提取物具有较强的逆转人白血病K562/ADM细胞多药耐药活性作用.     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas、Bcl-2和p53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖，P=0．004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示，G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高，P=0．005；Fas蛋白表达明显上调，P=0．002；Bcl-2蛋白表达下调，P=0．00～0；p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562/ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的研究氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用.方法应用免疫组化观察K562/AO2细胞系的耐药蛋白表达情况,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562/AO2细胞系耐药逆转作用,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562/AO2细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况,用半定量RT-PCR法测定氯丙嗪对K562/AO2细胞多药耐药基因(mdr-1)mRNA表达的影响.结果K562/AO2细胞不但P-gp表达阳性,而且肺耐药相关蛋白(lung resistanceelatedprotein,LRP)表达也阳性;氯丙嗪能增强多柔比星对K562/AO2细胞的杀伤作用(单用ADM组、氯丙嗪0.75 μg/mL+ADM组、氯丙嗪1.5μg/m L+ADM组和氯丙嗪3μg/mL+ADM组对K562/AO2的抑制率分别为5.2%、25.9%、39.1%和74.8%)增加K562/AO2细胞内罗丹明的蓄积(对照组、氯丙嗪0.75 μg/mL组、氯丙嗪1.5 μg/mL组和氯丙嗪3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为1.87、10.28、48.75和65.63)对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA表达无明显影响(对照组mdr-1和β-actin的面积比为0.41,氯丙嗪组为0.42).结论氯丙嗪对K562/AO2细胞的耐药有较强的逆转作用,并呈剂量依赖关系.     

TNFα诱导K562/VCR和K562细胞凋亡及逆转其耐药作用的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)体外诱导K562/VCR及K562细胞凋亡,及其逆转K562/VCR细胞多药耐药(MDR)的作用机制.方法以光镜、电镜、流式细胞仪观察细胞凋亡;流式细胞仪检测P-gp和bcl-2表达.MTT检测药物敏感性.结果 (1)TNFα浓度>100 U/ml,作用时间>48小时,2株细胞均可见典型凋亡现象,以K562/VCR细胞明显.(2)以TNFα 1 000 U/ml处理后,K562/VCR和K562细胞凋亡率分别为29.4%和10.7%.(3)K562/VCR经TNFα 1 000 U/ml处理72小时P-gp表达率从93.6%降至82.4%,bcl-2表达率从32.9%降至7.0%.(4)K562/VCR和K562细胞分别经TNFα 100 U/ml和1 000 U/ml处理后,VCR、Ara-C和VP-16的药物敏感性增加(P<0.05).结论 (1)TNFα可诱导K562/VCR和K562细胞凋亡,以前者更加敏感,且存在时间和剂量依赖性.(2)高浓度TNFα可下调bcl-2表达,但不显著改变P-gp表达.(3)TNFα能增加K562/VCR和K562细胞对VCR、Ara-C和VP-16的药物敏感性,以K562/VCR细胞更明显.(4)TNFα逆转K562/VCR多药耐药是通过诱导细胞凋亡,降低bcl-2表达,而非下调P-gp表达途径实现.     

siRNA逆转白血病K562/ADM细胞对抗癌药物耐受性的研究

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对多药耐药细胞K562/ADM耐药性的逆转效应.方法:以K562/ADM细胞为靶细胞,针对mdrl基因mRNA不同靶点设计合成4对siRNA分子,脂质体介导转染K562/ADM细胞,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测mdrl基因mRNA的表达水平,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)表达;MTT比色法检测K562/ADM细胞对多柔比星(ADM)、柔红霉素(DNR)和依托泊苷(Vp-16)的敏感性.结果:选择mdrl mRNA的4个靶点设计合成的siRNA中,针对333靶点的siRNA(si-mdrl/333)对mdrl基因的表达具有较好的沉默效果,RT-PCR和实时定量PCR检测,mdrl mRNA表达分别降低69%和63%;FCM检测P-gp的表达强度(MFI)降低约50%.si-mdrl/333可提高K562/ADM细胞对ADM、DNR和Vp-16的敏感性,耐药逆转倍数分别为3.45、1.70和2.91倍.结论:siRNA能特异性地阻抑白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞mdrl基因的表达,逆转其对抗癌药物的耐受性.     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡中mdr1和Survivin基因的表达

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡过程中mdr1和Sur vivin基因的表达变化。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,细胞形态学、DNA片段化和细胞周期改变观察K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定Caspase3活性;RT PCR检测Sur vivin和mdr1mRNA的表达。结果:ATO可抑制K562/ADM细胞增殖,并出现典型凋亡形态改变,DNA电泳出现梯状条带(DNAladder);细胞周期分析显示,2～5μmol/LATO作用24h,细胞被阻滞在G2/M期,G1期细胞减少;72h时Sub G1期细胞分别为25.6%和52.9%。2～5μmol/LATO作用24～48h,mdr1mRNA和SurvivinmRNA表达水平明显下降,48h时mdr1mRNA的抑制率分别为83.4%和87.8%,SurvivinmRNA为21.6%和68.6%。ATO作用后,Caspase3活性明显增强,活化Caspase3由17.9%增加到47.4%。结论:ATO降低K562/ADM细胞mdr1和Survivin基因表达,解除P gp和Survivin对Caspases的抑制效应而促进耐药细胞凋亡。     

斑蝥酸钠逆转K562/AO2细胞多药耐药的机制初探

目的 观察斑蝥酸钠(SCA)对多药耐药的白血病细胞(K562/AO2)细胞是否有逆转作用,并初步探讨其逆转机制.方法 应用 MTT测定多柔比星(阿霉素,ADM)对K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50);应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测K562、K562/AO2细胞表达mdr1基因水平;用流式细胞术(FCM)检测其P-gp蛋白表达的水平.结果 MTT结果显示,无毒剂量的SCA与ADM联合应用比单纯加ADM(同等剂量)对K562/AO2细胞的IC50降低了1.51倍;耐药细胞(K562/AO2)经SCA处理后mdr1基因与P-gp蛋白表达均下降(P＜0.05).结论 SCA对K562/AO2有一定的逆转作用,其机制可能与下调mdr1基因和P-gp蛋白表达有关.     

谷胱甘肽含量对肿瘤多药耐药相关蛋白1的影响

目的 研究应用丁硫氨酸亚砜胺（BSO）降低谷胱甘肽（GSH）含量后,三氧化二砷（As2O3）对K562/ADM细胞的诱导凋亡效应,及其对多药耐药相关蛋白1（MRP1）的抑制作用.方法 As2O3组（0.5、2.0、5.0 μmol/L）单独及联合100 μmol/L BSO作用于K562/ADM细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测K562/ADM细胞的增殖活性;Annexin V/PI标记法观察K562/ADM细胞的凋亡效应;分光光度法检测K562/ADM细胞内GSH含量变化;流式细胞术（FCM）检测的MRP1蛋白水平表达变化;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MRP1的编码基因mRNA的表达变化.结果 降低GSH含量后,临床剂量As2O3（0.5、2.0 μmol/L）联合BSO 24 h内即可抑制K562/ADM细胞的增殖活性,诱导K562/ADM细胞发生凋亡,72 h单用As2O3（0.5、2.0 μmol/L）凋亡率为（8.32±2.11）％、（16.75±3.56）％,GSH含量降低后,两剂量组细胞的凋亡率分别为（82.15±9.28）％和（92.72±9.41）％.72 h后,临床剂量As2O3联合BSO抑制MRP1的荧光强度分别为8.20±0.92和10.40±2.33,明显低于单用高剂量As2O3组的荧光强度（21.30±3.09）;两药联合对于MRP1 mRNA的作用效果也明显强于单用高剂量As2O3组.结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关,As2O3联合BSO可有效诱导K562/ADM细胞发生凋亡,可有效抑制MRP1及其编码基因mRNA的表达.