几种生物材料表面黏附特性的实验

目的:应用微吸管吸吮技术测量大鼠骨髓基质细胞在聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的黏附力,以筛选生物相容性良好的生物材料。方法:实验于2003-11/2004-05在华中科技大学附属协和医院骨科组织工程实验室完成。选取4周龄健康SD大白鼠4只。大鼠麻醉后抽取双侧胫骨和股骨的骨髓基质细胞体外培养,第3代细胞用于实验。制备以玻璃为底、直径约25mm的特制圆形小腔室,分别将聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物溶液0.3mL滴入小腔室内,300r/min离心5m in,在玻璃表面形成聚合物薄膜。用微吸管拉制器拉制微吸管,加工成前端内径为2～4μm的微管,并用微量进样器向微管内灌满培养液,微管后端接于水压控制的微操作手上,并与自动压力控制系统连接。将第3代骨髓基质细胞接种在表面为不同材料的小腔室内,在每种材料表面随机测量20～30个细胞,以没有涂覆材料的玻璃为对照,测量骨髓细胞于不同时间在三种生物材料表面的细胞黏附力。结果:实验纳入大鼠4只,全部进入结果分析。不同生物材料上骨髓基质细胞黏附力的比较:细胞种植到生物材料表面4,12,24h,骨髓基质细胞在聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的黏附力均明显高于聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯[(172.78±15.23),(155.609±17.29),(144.84±21.14);(324.84±102.73),(199.39±37.20),(234.09±62.09);(180.77±29.22),(170.32±21.14),(174.38±44.29)×10-10N,P均<0.05]。结论:微细管吸吮法能够精确测量细胞在支架材料上的黏附力。在聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物这三种生物材料中,聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的细胞黏附力最好,是较理想的生物材料。     

比较电纺β-磷酸三钙/明胶引导组织再生膜与聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯膜的生物相容性

背景:以往有很多学者通过发泡法将β-磷酸三钙与明胶复合得到引导组织再生材料,但将其采用静电纺丝技术制成纤维膜的报道很少.目的:制备新型引导组织再生膜,并比较其与聚乳酸,聚丙交酯/乙交酯膜的细胞毒性.方法:采用静电纺丝法制备β-磷酸三钙/明胶引导组织再生膜,通过扫描电子显微镜对纤维膜表面进行观察.通过MTT实验对电纺β-磷酸三钙/明胶膜与聚乳酸,聚丙交酯/乙交酯膜的细胞毒性进行对比.结果与结论:新型电纺β-磷酸三钙/明胶膜为多孔状,β-磷酸三钙颗粒呈结节状附着在明胶纤维表面,纤维直径平均为400～500 nm,分布比较集中,大多在200～500 nm之间.与聚乳酸,聚丙交酯/乙交酯膜及阴性对照之间细胞毒性差异无显著性意义(P>0.05).说明新型电纺β-磷酸三钙/明胶引导组织再生膜细胞毒性较低,基本符合生物材料安全性的要求,有望成为新型的引导组织再生膜材料之一.     

糖皮质激素对骨髓基质细胞增殖及分化的影响

目的 观察糖皮质激素对骨髓基质细胞垃针及分化的作用，探讨糖皮质激素导臻继发性骨质疏松的病理学机制。方法 骨髓基质细胞以随机数字表法随机分为对照组和实验组。以1&;#215;10^-7mol/L地塞米松加入髋基质细胞培养物中，测定增殖的骨髓基质细胞数及培养液中骨钙素含量，通过苏彤Ⅲ脂肪细胞染色计数观察地塞米松作用时间对脂肪细胞分化的影响。结果 实验组及培养液中骨钙素含量（5.2&;#177;1.4）ng/mg蛋白质，明显低于对照组（12.5&;#177;1.5)ng/mg蛋白质（t=12.61,P&;lt;0.001）；骨髓基质细胞数实验组（3.73&;#177;0.43）&;#215;10^5个细胞/孔，明显低于对照组（5.76&;#177;0.69）&;#215;10^5个细胞/孔（t=7.45,P&;lt;0.001）；脂肪细胞的数量随地塞米松作用时间延长而增多。结论 糖皮质激素抑制骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化，促进其向脂肪细胞分化，这可能与糖皮质激素引起继发性骨质疏松时，骨量减少，髓内脂肪组织增多有关。     

乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架的细胞相容性及缓释作用

目的：体外实验观察生物可降解材料乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架的细胞相容性及其缓释作用. 方法：实验于2005-05/09在首都医科大学附属北京市神经外科研究所损伤修复实验室完成.①实验方法：乙交酯-丙交酯共聚物采用专利技术（200510011350.9）制备,体外将许旺细胞和神经干细胞与乙交酯-丙交酯共聚物共培养.②实验评估：扫描电镜下观察许旺细胞和神经干细胞在乙交酯-丙交酯共聚物内生长状况;应用组织工程技术将神经生长因子整合入乙交酯-丙交酯共聚物内,0.02 g乙交酯-丙交酯共聚物（干质量）中含有1μg神经生长因子,ELISA法检测每天神经生长因子释放的质量浓度. 结果：①扫描电镜下乙交酯-丙交酯共聚物横断面可见其为网格状,纵断面可见其直孔道.②许旺细胞和神经干细胞在乙交酯-丙交酯共聚物支架上生长良好,与其紧密贴附.③培养后第4天神经生长因子释放的质量浓度达峰值,第7天趋于平稳,稳定释放的质量浓度为100μg/L. 结论：①乙交酯-丙交酯共聚物与许旺细胞和神经干细胞具有良好的生物相容性及细胞亲和性.②按神经生长因子（1μg）与乙交酯-丙交酯共聚物（干质量0.02 g）的比例合成的神经生长因子-乙交酯-丙交酯共聚物组织工程材料可缓慢稳定释放神经生长因子,达到其可以发挥生物学活性的质量浓度100μg/L.     

定量超声技术评估组织工程骨修复家兔桡骨的骨强度

目的：应用定量超声技术评估应用组织工程骨修复的家兔桡骨骨强度，探讨其成骨活性以及矿化规律。方法：实验于2004-04／2005—01在第四军医大学唐都医院骨实验室完成。选取健康30d龄家兔40只，随机分为两组，即聚乳酸-聚乙醇酸＋骨髓基质细胞组，聚乳酸-聚乙醇酸组，20只／组。聚乳酸-聚乙醇酸＋骨髓基质细胞组家兔自体骨髓基质细胞移植到预制形状的聚羟乙酸-乳酸中，体外复合培养1周后移植修复家兔桡骨15mm的缺损；聚乳酸-聚乙醇酸组采用单纯聚乳酸-聚乙醇酸对家兔桡骨骨缺损进行修复，未加入骨髓基质干细胞。对两组家兔的新生组织进行组织学、生物化学及放射线检查，12周后见新生骨完全填充了缺损，组织学显示其成骨过程为软骨内成骨。然后分别于12，16，22周对两组进行骨超声评估，测量超声波在桡骨中的传播速度。结果：实验纳入40只家兔全部进入结果分析。两组家兔骨缺损模型不同时期超声波在桡骨中的传播速度值的比较：①聚乳酸-聚乙醇酸＋骨髓基质细胞组与聚乳酸-聚乙醇酸组在骨修复后12，16，22周均逐渐升高[（2890&;#177;99），（3010&;#177;108），（3106&;#177;116）m／s；（2720&;#177;96），（2910&;#177;101）．（3100&;#177;98）m／s；P均〈0．05]。②第12，16周聚乳酸-聚乙醇酸＋骨髓基质细胞组传播速度值明显比聚乳酸-聚乙醇酸组快（P均〈0．05）；而第22周时两组传播速度值基本接近（P〉0．05）。结论：应用定量超声技术检测到家兔桡骨骨缺损修复后不同时期的超声波在骨骼中的传播速度值，成骨活性呈动态变化，矿物质含量及骨强度均随时间的延长而升高，反映了修复后的骨髓基质细胞其组织工程骨的成骨能力增加。聚乳酸-聚乙醇酸＋骨髓基质细胞组成骨活性、骨内矿物质含量及骨强度在骨修复后12，16周明显高于聚乳酸-聚乙醇酸组，至22周时两组成骨活性接近稳定，其骨强度大致相同。提示定量超声技术为组织工程骨的生物力学强度检测确定了一种新的方法。     

转染血管内皮生长因子165基因的狗骨髓基质细胞超微结构变化及成骨能力

目的：探讨转染血管内皮生长因子165基因的狗骨髓基质细胞体外生物学特性。 方法：实验于2002—05／2005—06在华中科技大学同济医学院协和医院骨科完成。实验分为血管内皮生长因子基因转染组与对照组。从3只成人杂交犬髂骨取骨髓进行骨髓基质细胞分离培养，将重组的血管内皮生长因子165基因用脂质体介导转染狗骨髓基质细胞，用反转录聚合酶链反应方法检测血管内皮生长因子的表达；通过四唑盐、对硝基苯磷酸盐检测细胞增殖与碱性磷酸酶的活性；考马斯亮蓝法检测蛋白质含量；透射电镜观察细胞超微结构。 结果：（D重组质粒pcDNA3-人血管内皮生长因子165转染骨髓基质细胞后第7，14天，反转录聚合酶链反应方法检测有血管内皮生长因子mRNA表达。②骨髓基质细胞转染基因后，细胞的增殖能力无明显影响。③培养后第6，8，10，12天，转染血管内皮生长因子基因骨髓基质细胞与对照组细胞比较，碱性磷酸酶活性增高，蛋白质合成增多[转染组碱性磷酸酶为（428．09&;#177;96．67），（565．11&;#177;94．17），（562．94&;#177;39．17），（596．45&;#177;30．17）nkat，对照组碱性磷酸酶为（363.57&;#177;20.67），（536．44&;#177;11．42），（537．11&;#177;96．83），（548．10&;#177;92．34）nkat；转染组细胞蛋白合成为1．41&;#177;0．23，1．46&;#177;0．24，1．59&;#177;0．33，1．74&;#177;0．26；对照组细胞蛋白合成为0．82&;#177;0．11，0．83&;#177;0．09，0．85&;#177;0．06，0．91&;#177;0．091。④透射电镜可见转基因细胞内质网增多，线粒体致密，而糖原溶解与脂肪空泡则减少。 结论：血管内皮生长因子基因转染可促进骨髓基质细胞的成骨分化。     

雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因及成骨细胞生成的影响

目的 研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的条件培养体系中，17β-雌二醇（Ea）对其核结合因子α1(Chfα1）基因表达影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法 取自1只3月龄雌性SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代后，用1，25（OH）2D3和地塞米松（DEX）诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。应用半定量RT-PCR技术，观察不同浓度Ea对骨髓基质细胞分化过程中核结合因子α1mRNA表达的影响，以α-磷酸套酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果 Ea能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Ghfα1 mRNA的表达，且呈剂量依赖性。Ea浓度为0,1&;#215;10^-10，1&;#215;10^-8和1&;#215;10^-6mmol/L时，Cbα1 mRNA表达量分别为23.4%&;#177;1.8%（t=17.8,P&;lt;0.01）。Northern blot结果显示Cbfα1 mRNA的表达量分别为4.22&;#177;0.11,2.51&;#177;0.12(t=21,P&;lt;0.01),1.88&;#177;0.10(t=31,P&;lt;0.01)和1.17&;#177;0.09(t=41,P&;lt;0.01)。ALP活性随Ea浓度增加而降低，在上述Ea浓度时，ALP活性分别为（42.6&;#177;2.5)U/g。（17.9&;#177;2.0)U/g(t=15,P&;lt;0.01),(10.8&;#177;1.5)U/g(t=21,P&;lt;0.01）和（3.6&;#177;0.7)U/g(t=29,P&;lt;0.01）。细胞Ⅰ型胶原的含量随Ea浓度增加而降低。结论 Ea能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Chfα1 mRNA的表达，减少成骨细胞的生成。     

骨髓基质细胞载体支架的细胞相容性特点

目的:近年来,尽管骨组织工程发展迅速,但目前缺乏理想的支架材料,体外构建的组织工程化活性骨在体内的成骨能力各家报道不一,探讨骨髓基质细胞与L-聚乳酸/聚磷酸钙纤维复合支架的细胞相容性,为骨组织工程选择可降解支架材料提供依据.方法:实验于2002-03/06在第三军医大学中心实验室完成.将兔骨髓基质细胞与L-聚乳酸/聚磷酸钙纤维复合后在体外进行培养,观察细胞形态学变化,并对细胞黏附、细胞活度及接种细胞上架率进行测定.结果:扫描电镜下见支架上黏附细胞较多,接种前与接种支架后消化洗脱细胞的苏木精-伊红(HE)染色可见细胞形态无明显变化,接种支架前的细胞活度为97.08&;#177;1.06,接种后的细胞活度为96.87&;#177;0.96,接种支架的细胞上架率为(61.5&;#177;0.41)%.表明兔骨髓基质细胞能在L-聚乳酸/聚磷酸钙纤维复合支架上贴附、细胞活度不受影响及较高的细胞上架率.结论:L-聚乳酸/聚磷酸钙纤维复合支架具有良好的细胞相容性,可作为骨髓基质细胞的载体应用于骨组织工程.     

去抗原异种松质骨作为骨组织工程载体的可行性

目的：对自行研制的去抗原异种松质骨材料与骨髓基质细胞复合培养进行生物相容性进行评价，为骨组织工程中生物材料的选择提供实验依据。 方法：实验于2004—05／2005—05在教育部省部共建新疆民族与地方高发病重点实验室完成。①取新生小牛股骨下端松质骨，锯成15mm&;#215;5mm&;#215;5mm大小骨块，经1：1氯仿，HCl，H2O2和PBS＋NaOH＋NaM混合液等物理化学处理．制成去抗原异种松质骨载体。①选用清洁级健康3月龄新西兰大白兔2只，抽取骨髓．通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离纯化骨髓基质细胞，将传代至第3代细胞接种于24孔培养板内，实验分为2组：实验组每孔加入5mm&;#215;5mm&;#215;3mm去抗原异种松质骨材料一块。对照组单纯接种细胞，每组4孔。于4，8d后进行处理．用于观察及检测。③通过扫描电镜、MTT测试法、考马斯亮蓝和碱性磷酸酶活性检测法，观察去抗原异种松质骨材料对细胞生长、增殖及功能表达的影响。 结果：①骨髓基质细胞生长情况：倒置相差显微镜观察，骨髓基质细胞能在去抗原异种松质骨材料上黏附、增殖，细胞形态良好。②骨髓基质细胞在去抗原异种松质骨材料生长结果：扫描电镜观察，骨髓基质细胞在去抗原异种松质骨材料生长良好。③实验组于接种后4和8d骨髓基质细胞增殖、蛋白质含量和碱性磷酸酶活性（A值）分别为0．50&;#177;0．03．0．78&;#177;0．10．0．44&;#177;0．02和0．73&;#177;0．14，1．21&;#177;0．07，0．59&;#177;0．03，与对照组（0．51&;#177;0．02．0．80&;#177;0．15，0．45&;#177;0．01；0．70&;#177;0．11．1．20&;#177;0．04，0．60&;#177;0．02）比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：去抗原异种松质骨对骨髓基质细胞体外增殖和蛋白质合成无不良影响，对骨髓基质细胞的生长增殖无明显的干扰作用，对骨髓基质细胞向成骨细胞转化无影响，即去抗原异种松质骨材料无细胞毒性；同时具有良好的细胞相容性，可用作骨组织工程的支架材料。     

种植神经干细胞-许旺细胞的共聚物支架移植修复大鼠损伤脊髓

背景：前期实验显示,在体外乙交酯-丙交酯共聚物支架与神经干细胞和许旺细胞有良好的相容性。目的：观察与许旺细胞共移植,神经干细胞是否能在乙交酯-丙交酯共聚物取向支架内存活、分化,乙交酯-丙交酯共聚物组织工程复合物是否能促进轴突再生及其髓鞘化。方法：制作成年Wistar大鼠T8段半横断脊髓损伤模型,随机分为3组：支架组植入乙交酯-丙交酯共聚物支架,神经干细胞组植入接种神经干细胞（标记绿色荧光蛋白）的乙交酯-丙交酯共聚物取向支架,联合组植入接种神经干细胞（标记绿色荧光蛋白）和许旺细胞的乙交酯-丙交酯共聚物取向支架。结果与结论：移植的神经干细胞可在大鼠脊髓内存活,并迁移至邻近脊髓,联合组标记绿色荧光蛋白阳性细胞存活率显著高于神经干细胞组（P〈0.001）。联合组胶质纤维酸性蛋白/标记绿色荧光蛋白双阳性细胞多于神经元特异性烯醇化酶/标记绿色荧光蛋白双阳性细胞,神经干细胞组未发现神经元特异性烯醇化酶/标记绿色荧光蛋白双阳性细胞。联合组有少部分绿色荧光蛋白阳性细胞表达突触素,再生轴突和有髓轴突数量高于其他两组,但差异无显著性意义（P=0.058）。表明与许旺细胞共移植,可促进神经干细胞向神经元样细胞分化,少部分神经元样细胞还可能形成了突触连接;种植了神经干细胞和许旺细胞的乙交酯-丙交酯共聚物支架可促进轴突再生及其髓鞘化。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

The characteristics of interpretation of results of analysis of protein amount in urine of pregnant women

The adequacy of implementation of present proteinuria diagnostic thresholds under examination of pregnant women was examined. The analysis was applied to all urine samples of pregnant women from December 2009 to March 20010. The amount of protein in urine was concurrently evaluated by turbidimetric analysis with sulfosalicylic acid, colorimetric analysis with pyrogallol red, "dry chemistry" technology (the diagnostic strips). It is established that the mentioned techniques of analysis of protein in urine provide independent results. The results of colorimetric analysis are characterized by better precision and adequacy. However, in case of pregnant women the diagnostic threshold of protein concentration should be shifted from 0.120 to 0.150 g/l.     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。