香豆素类化合物对胃蛋白酶活性的影响研究

目的：基于香豆素类化合物与胃蛋白酶相互作用的研究，探讨香豆素类化合物对胃蛋白酶活性的影响，可能与胃部疾病治疗存在潜在的关系。方法：采用紫外-可见光谱法及福林酚法，以牛血红蛋白为底物，分别用香豆素、4-羟基香豆素、7-羟基香豆素、7-羟基-4-甲基香豆素作为干扰剂与胃蛋白酶混合，测定胃蛋白酶在540 nm处的吸光度值，计算胃蛋白酶表观酶活；在香豆素类化合物-胃蛋白酶体系中添加抗坏血酸，研究抗坏血酸对各体系中胃蛋白酶活性的影响；同时采用紫外-可见光谱法对香豆素类化合物与牛血红蛋白的相互作用光谱特征进行测定。结果：随着香豆素类化合物浓度增加，胃蛋白酶表观酶活呈降低趋势，但趋势略有不同。4-羟基香豆素、7-羟基香豆素、7-羟基-4-甲基香豆素、香豆素对胃蛋白酶的抑制率分别为10.15%～35.92%、7.27%～12.14%、10.58%～29.29%、13.88%～47.13%。添加抗坏血酸的4-羟基香豆素、7-羟基香豆素和7-羟基-4-甲基香豆素体系与未添加抗坏血酸的香豆素类化合物-胃蛋白酶体系相比，胃蛋白酶表观酶活进一步降低，而添加抗坏血酸的香豆素-胃蛋白酶体系与未添加抗坏血酸的香豆素-...     

4-甲基-香豆素及4-甲基喹啉-2(1H)-酮的7位羟基、巯基与炔丙基卤代物的不同反应性

目的合成具有抗HIV活性的三环杂环化合物的关键中间体.方法 7-羟基-4-甲基-香豆素、7-羟基-4-甲基喹啉-2(1H)-酮、7-巯基-4-甲基-香豆素分别与3-氯-3-甲基-1-丁炔、3-溴丙炔反应得到相应产物,其结构经波谱确证.结果 4-甲基-香豆素的7位羟基发生正常的双分子亲核取代反应(SN2),得到炔丙基醚产物4、7和10,进一步热环合得到三环杂环化合物5、8和11;7-巯基-4-甲基-香豆素、7-巯基-4-甲基喹啉-2(1H)-酮与3-氯-3-甲基-1-丁炔反应分别得丙二烯醚双分子亲核取代反应(SN2′)产物聚集双键硫醚化合物12和14,且不能进一步热环合成三环杂环.结论 4-甲基-香豆素及4-甲基喹啉-2(1H)-酮的7位羟基、巯基与炔丙基卤代物表现出不同的反应性.     

胞嘧啶核苷卟啉与DNA相互作用及抗肿瘤活性的初步研究

目的初步研究胞嘧啶核苷卟啉与DNA(ctDNA)相互作用及抗肿瘤活性。方法人体生理条件下(pH=7.4),利用紫外光谱法和荧光光谱法初步研究胞嘧啶核苷卟啉与小牛胸腺DNA的相互作用。采用MTT法,替加氟为阳性对照药,以肝癌细胞Bel-7402、宫颈癌细胞Hela、乳腺癌细胞MCF-7为测试细胞株对胞嘧啶核苷卟啉抗肿瘤活性进行检测。结果实验发现,胞嘧啶核苷卟啉[T(p-CH3)PPO-Cytidine]与DNA相互作用使紫外-可见光谱发生了6 nm的红移,并出现了明显的减色效应。荧光光谱强度明显减少,吸收峰位发生变化。初步体外抗癌活性实验结果表明,胞嘧啶核苷卟啉对肝癌细胞Bel-7402、宫颈癌细胞Hela、乳腺癌细胞MCF-7的抑制率呈剂量依赖性,随着浓度的增加抑制强度逐渐增大。结论胞嘧啶核苷卟啉对DNA发生了作用且可能形成了配合物,通过卟啉结构单元的引入可以明显提高胞嘧啶核苷的抗肿瘤活性。     

依托泊苷与鲱鱼精DNA相互作用的研究

目的 研究依托泊苷与DNA的相互作用.方法 采用荧光光谱及紫外光谱法,结合Ⅰˉ效应、离子强度的影响及DNA熔点测定,分析依托泊苷与DNA光谱效应.结果 DNA对依托泊苷的内源荧光有明显的猝灭作用,猝灭过程为静态猝灭;结合常数KA=2.02×10 -4L·mol-1,结合位点数n=0.89.结论 依托泊苷与DNA的结合作用方式可能为沟槽作用.     

7-羟基香豆素及6, 7-二羟基香豆素与 DNA的作用机理及构效关系研究

 目的: 研究7-羟基香豆素（umbelliferone, UMB）和6, 7-二羟基香豆素（aesculetin, AES）与小牛胸腺DNA的作用机制,探讨其构效关系。方法: 采用荧光光谱法研究UMB和AES与DNA的结合作用,并计算相关结合参数,利用紫外光谱、盐效应、I-猝灭、与单双链DNA作用、DNA热变性温度及黏度测定等方法确定UMB和AES与DNA的作用模式。结果: DNA对UMB和AES的荧光猝灭机制均为静态猝灭;UMB和AES与DNA的结合常数分别为2.13×104和5.27×102 L?mol-1,作用力主要是氢键和范德华力。结论: UMB和AES与DNA的作用方式均为沟槽作用。     

合成、测试和应用手性荧光底物以评价不同反应介质中的酶作用

开发了用2D-荧光光谱法进行在线监控的拟一对映异构体反应。可以在线跟踪酶反应中过量的对映体。合成了可用荧光光谱检测的底物L／D-苯丙氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素（L／D-PheAMC）和L／D-苯丙氨酸-7-氨基-4-三氟代-甲基香豆素（L／D-PheAFC），并应用于水相系统。测试了几种蛋白酶和酯酶，以检测适于水解香豆酮底物的生物催化剂。     

3-羟基-2-萘醛缩氨基硫脲稀土配合物的合成及其与DNA的相互作用

合成了3-羟基-2-萘醛缩氨基硫脲及其稀土配合物,通过IR、UV、元素分析、摩尔电导及热分析等进行了结构表征.在pH 7.22的Tris-HC1缓冲液中,采用紫外光谱、荧光光谱和黏度法研究了目标化合物与ct-DNA的相互作用.结果表明该化合物以插入式与ct-DNA键合.     

7-羟基香豆素及6,7-二羟基香豆素与DNA的作用机理及构效关系研究

目的:研究7-羟基香豆素(umbelliferone,UMB)和6,7-二羟基香豆素(aesculetin,AES)与小牛胸腺DNA的作用机制,探讨其构效关系。方法:采用荧光光谱法研究UMB和AES与DNA的结合作用,并计算相关结合参数,利用紫外光谱、盐效应、I-猝灭、与单双链DNA作用、DNA热变性温度及黏度测定等方法确定UMB和AES与DNA的作用模式。结果:DNA对UMB和AES的荧光猝灭机制均为静态猝灭;UMB和AES与DNA的结合常数分别为2.13×104和5.27×102L.mol-1,作用力主要是氢键和范德华力。结论:UMB和AES与DNA的作用方式均为沟槽作用。     

5-羟甲基糠醛与牛血清白蛋白相互作用的光谱特性研究

目的:研究在模拟人体生理条件下5-羟甲基糠醛(5-HMF)和牛血清白蛋白(BSA)结合反应的特征。方法:采用荧光光谱法和紫外光谱法。取一定浓度的BSA与不同浓度的5-HMF溶液反应(27、37℃下),测定荧光强度和吸光度,再以此通过S理te,r测n-V定ol了m其er公相式互计结算合结时合5-常HM数F和与结B合SA位作点用数距,通离过。计结算果热:2力7、学37数℃据下探5讨-H5M-HFM与FB与SAB的SA结的合相常互数作K用分机别制为;运1.4用×1F0?3rsLt.erm能ol量-1转和移7.9原×103L.mol-1,结合位点数分别为0.61和0.78;根据基本热力学参数判断二者主要通过典型的疏水作用力发生相互作用,作用距离为5.6nm。结论:5-HMF对BSA有较强的荧光猝灭作用,该过程为静态猝灭,二者在试验浓度范围内形成了复合物,从而使5-HMF可以BSA为载体进行贮存和运输。     

玉竹中4种高异黄烷酮的快速制备与鉴定

目的从玉竹中快速制备4种高异黄烷酮(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ),并考察其显微红外光谱(IR)与显微拉曼光谱(Raman)。方法取10 kg玉竹用80%乙醇加热回流提取,经过硅胶柱层析分离,采用半制备液相色谱(HPLC)与制备薄层色谱(TLC)联用技术快速纯化,制备4种单体化合物,采集核磁共振谱(NMR)、质谱(MS)及紫外光谱(UV)进行结构鉴定,并利用显微IR与显微Raman进一步验证4种化合物的结构。结果制备的4种化合物分别为6-甲基-5,7-二羟基-4',8-二甲氧基高异黄烷酮(Ⅰ)、6,8-二甲基-4',5,7-三羟基高异黄烷酮(Ⅲ)、6-甲基-4',5,7-三羟基-8-甲氧基高异黄烷酮(Ⅳ)、6-甲基-4',5,7-三羟基高异黄烷酮(Ⅴ),纯度均大于99.0%。4种化合物的IR特征峰主要来自ν_(-OH)、ν_(-C=O)、ν_(-O-CH3);Raman特征峰主要来自ν_(=CH)、ν_(-CH)、γ_(=CH)、β_(-CH)、ν_(C=C),两者互补,可以得到更全面的结构信息。结论本制备方法简便、快速,单体纯度高,适于从天然药物中提取制备少量不稳定化合物,且首次采用显微IR与显微Raman结合,提供了反映4种高异黄烷酮结构的振动光谱信息。     

两头尖中的香豆素类成分及其生物活性研究

为了研究两头尖的香豆素类化学成分, 利用硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法对两头尖提取物进行分离和纯化, 根据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构。从中分离得到两个新的香豆素类化合物, 分别鉴定为4, 7-二甲氧基-5-甲基-6-羟基香豆素 (1) 和4, 7-二甲氧基-5-醛基-6-羟基香豆素 (2)。生物活性试验显示两个化合物对肿瘤细胞的增殖有抑制作用, 对维甲酸α受体 (RARα) 有激动活性, 同时对人白细胞弹性蛋白酶也有抑制作用。     

亚甲蓝类似物的合成及其与牛血清白蛋白相互作用的研究

目的 合成3种亚甲蓝类似物3,7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物、3,7-二(二正丁胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物和3,7-二(二正戊胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物,并研究模拟生理条件下这3种亚甲蓝类似物与牛血清白蛋白的相互作用.方法 通过1H-NMR及MS对这3种亚甲蓝类似物进行结构表征,应用荧光光谱法研究了模拟生理条件下这3种亚甲蓝类似物与牛血清白蛋白的相互作用.结果 3种亚甲蓝类似物和BSA相互作用形成了蛋白质-药物复合物并猝灭其固有荧光,亚甲蓝类似物与BSA相互作用过程的ΔG0<0,亚甲蓝类似物与BSA荧光残基间的距离r均小于7 nm.结论 亚甲蓝类似物和BSA相互作用的猝灭机制为静态猝灭,二者之间的反应是自发进行的.非辐射能量转移理论表明BSA与亚甲蓝类似物之间存在非辐射能量转移.同步荧光光谱和三维荧光光谱的研究结果表明,亚甲蓝类似物与BSA的相互作用导致BSA构象发生变化.     

枸橼果实的香豆素和黄酮类成分研究

目的研究枸橼果实的化学成分。方法用硅胶柱色谱法及Sephadex LH-20柱色谱法进行分离纯化,依据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构。结果从枸橼果实的95%乙醇提取物中分离鉴定了11个化合物,包括7个香豆素类化合物:7-羟基香豆素(1)、5,7-二羟基香豆素(2)、7-羟基-6-甲氧基香豆素(3)、5,7-二甲氧基香豆素(4)、6,7-二甲氧基香豆素(5)、佛手柑内酯(6)和8-(2',3'-二羟基-3'-甲丁基)-5,7-二甲氧基香豆素(7);4个黄酮类化合物:香叶木素(8)、柚皮素(9)、柚皮苷(10)和橙皮素(11)。结论化合物1,2,5～9为首次从枸橼中分离得到。     

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、s-美芬妥因(CYP2C19)、氯唑沙宗(CYP2E1)、香豆素(CYP2A6)及咪达唑仑(CYP3A4)与人肝微粒体进行孵化反应,采用HPLC和LC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(1,7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑)的浓度,通过与对照组比较,确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1~10μmol.L-1时对7种酶均无明显抑制作用,在100μmol.L-1时对CYP2D6有抑制趋势,但对其他6种酶无抑制作用,均无统计学意义(P>0.05)。结论MPD在与以上6种酶(CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6)代谢的药物联合用药时,发生药物相互作用的可能性较小。     

湿度变化对西洋参品质动态影响及可逆性的光谱成像检测

目的:应用光谱成像技术探讨湿度变化对西洋参品质的动态影响及可逆性。方法:选用中心波长为254 nm的紫外光源激发西洋参样品发射荧光进行在体检测,系统光谱分辨率5 nm,光谱覆盖范围420～680 nm。对存放于不同湿度条件下的3份西洋参检品连续检测,绘制归一化特征光谱图。并用自定义中心波长反映西洋参的品质变化规律。结果:环境湿度变化对西洋参品质量有显著影响,且受潮西洋参饮片经重新干燥处理后,其特征荧光光谱的变化不可逆转。结论:荧光光谱成像技术可用于中药贮藏与养护状况的监测,并具有操作简便、快速、无损等优点。     

茵陈化学成分的分离与鉴定

目的:分离、鉴定茵陈提取物中的化学成分。方法:采用硅胶柱、ODS开放柱和制备液相等色谱方法分离茵陈提取物,并通过NMR和MS等谱学技术确定分离出的化合物结构。结果:从茵陈提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为7-羟基香豆素(1)、5,7-二甲氧基香豆素(2)、7-羟基-8-甲氧基香豆素(3)、7,8-二羟基香豆素(4)、槲皮素(5)、山柰酚(6)、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷(7)、咖啡酸(8)。化合物1～4、7为首次从蒿属植物中分离得到。结论:本试验结果可为茵陈的进一步开发利用提供依据。     

豆腐果苷对人肝微粒体CYP450酶体外抑制作用研究

目的:通过评价豆腐果苷在体外对人肝微粒体CYP450酶的7种亚型酶活性的影响,预测服用豆腐果苷可能出现的食物-药物及药物-药物代谢的影响。方法:将豆腐果苷与CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、S-美芬妥因(CYP2C19)、氯唑沙宗(CYP2E1)、香豆素(CYP2A6)及咪达唑仑(CYP3A4)与人肝微粒体进行孵育反应,采用HPLC和LC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(1,7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑)的浓度,与对照组比较,确定豆腐果苷对以上7种亚酶活性的影响。结果:豆腐果苷在1～100μmol.L-1时对7种酶的抑制作用均无明显统计学意义(P>0.05)。结论:豆腐果苷可能不会引起有临床意义的CYP450酶抑制现象的发生。     

光谱法研究替诺昔康与小牛胸腺DNA相互作用

目的研究替诺昔康与小牛胸腺DNA(ct DNA)之间的相互作用。方法借助紫外光谱和荧光光谱考察了替诺昔康与ct DNA之间的相互作用,同时通过热变性研究、黏度法试验考察了替诺昔康与ct DNA的相互作用模式。结果 ct DNA加入使替诺昔康紫外光谱出现轻微减色效应,且随着ct DNA浓度的增大,减色效应变强;替诺昔康的加入使ct DNA-盐酸小檗碱发生荧光猝灭,且其猝灭程度具有浓度相关性。替诺昔康对于ctDNA溶液的黏度和热变性温度影响不大。结论替诺昔康与ct DNA是以沟槽方式结合,并且替诺昔康可以使ct DNA-盐酸小檗碱发生静态荧光猝灭。     

HPLC法同时测定消瘤藤中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素的含量

摘要：目的:建立测定广西特色瑶药消瘤藤药材中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素含量的高效液相色谱的方法。方法:运用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为320 nm,柱温为25℃,进样量10μl,以外标法定量。结果:茵芋苷浓度在1.032～103.2μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为99.78%（RSD=2.7%,n=6）;7-羟基香豆素浓度在1.022～102.200μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为98.78%（RSD=3.8%,n=6）;7-羟基-8-甲氧基香豆素浓度在1.112～111.2μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为97.56%（RSD=3.7%,n=6）。结论:该方法操作简便、结果准确、重复性好,提供了一种更好的控制消瘤藤药材质量的方法。     

四物口服液对羟基自由基的清除作用

目的 评价四物口服液体外对羟基自由基的清除作用.方法 采用荧光分光光度法,过氧化氢溶液与不同浓度的四物口服液稀释、混匀,254 nm紫外光照射后加入苯甲酸溶液,室温放置后在激发波长304 nm、发射波长401 nm条件下测定荧光强度,用羟基自由基清除率IC50（荧光强度降低50％时药物浓度）作为四物口服液对羟基自由基清除率大小的评价指标.结果 四物口服液体外对羟基自由基清除率IC50为0.009 3倍原药.结论 四物口服液具有体外清除羟基自由基的作用.