梨火疫病拮抗细菌FX1及其抑菌物质的防病作用

以前期从植物酵素液中初筛出的梨火疫病菌（Erwinia amylovora）拮抗细菌为供试菌株，采用打孔抑菌圈法、共培养法复筛出对梨火疫病菌具有强抑菌活性的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）FX1菌株。FX1菌株的除菌发酵滤液对梨火疫病菌的抑菌圈直径为26.11mm，与梨火疫病菌共培养的抑菌率为99.99%。比较不同方法提取的FX1菌株发酵滤液粗提物的抑菌活性，结果显示：酸沉淀法和硫酸铵饱和沉淀法得到的粗提物具有显著的抑菌作用，酸沉淀法提取物抑菌活性更强。利用特异性引物在FX1菌株中扩增检测到脂肽类（bmyB、fenD、ituC、srfAA、srfAB、bioA、yngG和yndJ）和抑菌蛋白类（TasA）抑菌物质合成相关基因，表明该菌株可能具有合成脂肽类和抑菌蛋白类物质的能力。利用库尔勒香梨（Korla Fragrant Pear）离体花序和杜梨（Pyrus betulaefolia）盆栽苗测定FX1菌株抑菌物质的防病效果显示，喷施FX1菌株脂肽类物质粗提液、除菌发酵滤液和菌体发酵液对香梨花序3～5 d的保护性防效分别为79.07%、56.85%和50.02%；...     

解淀粉芽胞杆菌防治番茄果实灰霉病及其抑菌物质分析

通过对峙培养法筛选对灰葡萄孢菌有显著拮抗性的产芽胞细菌,利用番茄果实检测拮抗菌及其发酵上清液对灰霉病的防治效果,采用ESI-MS检测拮抗菌发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质并利用PCR检测合成抑菌物质的相关基因,通过菌体菌落形态观察、生理生化试验、16S rDNA及gyrB分析对拮抗细菌进行种属鉴定。结果表明,分离筛选的拮抗菌fqhm-13及其发酵上清液对番茄果实灰霉病防治效果分别达到69.0%和78.1%。fqhm-13发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质为脂肽抗生素C14 ~ C16的surfactin A和C15 ~ C17的iturin A。fqhm-13基因组中含有脂肽抗生素合成基因ituC、ituD、fenD和srfAB。fqhm-13菌株为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。该研究为利用芽胞杆菌及其代谢产物防治番茄果实灰霉病奠定了材料基础。     

枣炭疽病菌拮抗芽孢杆菌的筛选鉴定及其抑菌物质分析

从冬枣果实中分离芽孢杆菌,通过对峙培养法筛选对炭疽病菌有显著拮抗活性的菌株,利用冬枣果实检测拮抗菌对炭疽病的防治效果并对拮抗菌进行种属鉴定,采用抑菌圈法及液相色谱一质谱联用技术分别对拮抗菌合成抑菌物质进行抑菌活性检测和结构鉴定。获得1株对枣炭疽病菌有显著拮抗活性的芽孢杆菌Tj-19,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。Tj-19菌体及其发酵上清液对冬枣果实炭疽病的防治效果分别达到74.9%和75.8%,主要抑菌物质为伊枯草菌素A和伊枯草菌素B。     

解淀粉芽孢杆菌HAB-2抑制杧果炭疽菌的活性成分分析

【目的】明确HAB-2菌株的分类地位及其抑菌活性物质稳定性。【方法】根据β-甘露聚糖酶基因(gumG或ydhT)的差异设计特异性引物进行基因克隆分子鉴定以及显微观察相结合手段,明确芽孢杆菌HAB-2分类地位;通过有机溶剂萃取法、硫酸铵饱和沉淀法、酸沉淀法对HAB-2菌株进行抑菌活性物质提取,检测抑菌活性,并对活性成分进行稳定性测定,确定其主要活性成分;通过平板对峙法,光学显微镜下观察活性成分对杧果炭疽病病原菌丝的影响;将HAB-2正丁醇提取物涂抹在接种杧果炭疽菌的杧果上,观察粗提物对杧果炭疽病的表面防效。【结果】HAB-2菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。其中正丁醇提取物活性最好,抑菌圈直径为(22.01±0.3)mm。正丁醇提取物在紫外线照射120 min后,抑菌活性为对照的93.64%;最适pH为5~6;经100℃处理后,正丁醇提取物的抑菌活性仍然为对照组的81.12%。正丁醇提取物可使杧果炭疽病菌菌丝扭曲、膨大、畸形,从而抑制杧果炭疽病菌,保护杧果果实;HAB-2正丁醇提取物处理后的杧果未出现杧果炭疽病病状。【结论】HAB-2菌株正丁醇提取物抑菌活性高,对酸碱和热稳定性良好,具有良好的生物农药开发应用前景。     

新型生物有机肥防治西瓜枯萎病机理

以解淀粉芽孢杆菌hj1为试材,采用平板对峙培养法测定了hj1的抑菌活性,利用PCR扩增其抗生素合成基因,应用盆栽试验检测其防治西瓜枯萎病的效果。结果表明:菌株hj1可拮抗西瓜枯萎病菌专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporumf.sp.niveum),确定其含有bam与fenB基因,分别为杆菌抗霉素(Bacillomycin)与环状脂肽(Fengycin)的相关合成基因。含菌株hj1的新型生物有机肥(BOF)对西瓜枯萎病防治效果显著,发病率仅为16.8%,病情指数下降到0.9,防治效果达到83.2%;促生效果同样明显,植株株高、鲜质量和干质量在所有处理中均为最高。施用新型生物有机肥还提高了细菌(芽孢杆菌)与放线菌等有益菌的含量,降低了真菌(尖孢镰刀菌)的含量。表明施用含有菌株hj1的新型生物有机肥能有效防治西瓜枯萎病,并促进西瓜植株生长。     

解淀粉芽胞杆菌L19对马铃薯枯萎病菌的抑制及植株的促生作用

为获得对马铃薯枯萎病菌具有优良拮抗效果,并对马铃薯植株具有促生作用的双重功能生防菌株,采用平板对峙方法测定分离筛选得到的菌株L19发酵产物对马铃薯枯萎病菌的生长抑制作用,利用PCR技术和气相色谱—质谱联用技术(GC–MS)分别对其脂肽类抗生素和挥发性化合物进行检测鉴定,采用温室盆栽试验和叶绿素荧光检测技术研究了其对马铃薯植株的促生作用以及对光合作用的影响。通过拮抗试验共分离得到25株生防菌株,其中菌株L19可显著抑制尖孢镰刀菌菌丝的生长,经形态学及gyrB序列分析,鉴定其为解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。光学显微观察发现,L19发酵液致使马铃薯枯萎病菌菌丝扭曲、黏连、膨大和泡状化等畸形,菌丝丧失穿透力,并且随着发酵液浓度的增加,其孢子萌发率降低。L19含有sfp、ituA、fenB、bacD、mycB等脂肽合成基因;可产生12种挥发性化合物,芳香族含量所占比例为47.42%,其次为醇类和酮类,其中2–乙基甲苯为主要挥发性物质,占比20.91%;具有产生纤维素酶的能力。盆栽试验表明,不同浓度L19发酵液可增加马铃薯植株的生长指数,其中5×10     

甜瓜镰刀菌果腐病菌拮抗菌筛选及其拮抗性研究

以新疆喀什地区伽师县盐碱地土壤为材料,通过平板对峙法和琼脂扩散法筛选获得对腐皮镰刀菌(Fusarium solani)BM1具有显著拮抗作用的菌株JS6-1和JS3-4。两菌株发酵上清液对甜瓜果腐病病原菌的抑菌圈直径分别为22.90和21.05 mm,通过形态学观察、生理生化试验和16s rRNA基因序列分析初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis JS6-1和暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis JS3-4。抑菌谱测定结果表明两株菌对尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum KW1、香梨黑斑病菌链格孢菌Alternatia alternata HB2、香梨腐烂病菌Valsa mali var. pyri FL1等9种植物病原菌均有较强的抑制作用。酶活及产铁载体测定结果表明,两株菌可产生纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶和铁载体等物质。采用酸沉淀法提取两株菌脂肽类物质,并以腐皮镰刀菌Fusarium solani BM1为指示菌进行抑菌试验结果表明,两株菌脂肽类粗提物对病原菌的抑菌圈直径分别为20.55和19.05 mm,对病原菌孢子萌发抑制率分...     

草莓灰霉病菌拮抗放线菌的筛选及活性测定

以分离自新疆古尔班通古特沙漠土壤的放线菌为试材,采用琼脂块法和生长速率法,研究了供试放线菌对草莓灰霉病菌的抑菌活性;采用形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析等方法对筛选出的高活性拮抗菌株进行种类鉴定。结果表明:从141株放线菌中筛选出1株对草莓灰霉病菌的抑菌圈直径为20.67mm的高活性拮抗菌株XJ93。该菌株无菌发酵滤液对多种植物病原真菌具有明显抑制作用,抑菌率为25.00%~71.67%;80℃处理60min其抑菌率未见明显变化,在pH 5~9范围内其抑菌活性稳定,在可见光和紫外线照射150min内亦保持良好的抑菌活性。拮抗菌株XJ93经鉴定为唐德链霉菌(Streptomyces tendae)。拮抗放线菌XJ93具有广谱抑菌活性,对环境有良好的稳定性,可作为防治果蔬草莓灰霉病的生物农药潜力菌株进行开发应用。     

柑桔拮抗内生细菌的抑菌活性试验研究

从南丰蜜桔叶片和洋葱的健康植物组织提取液中筛选出3株对柑桔溃疡病(Xanthomonas campestris pv.Citri(Hasse)Dye)有拮抗作用的内生菌株Bb1、Bb2和YC1,通过拮抗菌株的抑菌活性试验,得出3株菌株对柑桔溃疡病均有较好的抑制效果。     

萝芙木内生真菌的分离及发酵产物抑菌活性的研究

从萝芙木的果实中分离得到5株内生真菌:LG-A、LG-B、LG-C、LG-D与LG-E,以5株内生真菌为试验材料,采用微量滤纸片法,研究了5株内生真菌发酵乙醇粗提物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果果实链格孢菌的抑菌活性,以期筛选出具有农用抗植物病原真菌的活性菌株。并采用菌丝生长速率法,进一步测定了菌株LG-B与LG-D乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性。结果表明:菌株LG-B与LG-D对3种苹果病原真菌均有明显的抑制作用。LG-B与LG-D发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,菌株LG-B对苹果腐烂病菌的EC50仅为16.2mg·L~(-1),LG-D对苹果腐烂病菌与苹果轮纹病菌的EC50分别为21.0mg·L~(-1)和52.8mg·L~(-1)。     

贝莱斯芽孢杆菌Mr12预防苹果轮纹病等病害的潜力及其全基因组分析

【目的】探究新疆野苹果内生贝莱斯芽孢杆菌Mr12对多种植物病害的生防潜力,明确其抑菌活性物质稳定性、抑菌作用表现和抑菌物质遗传基础,为生防制剂开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定菌株Mr12对6种供试植物病原菌的抑制作用。以苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)为供试病原菌,测定Mr12无菌滤液抑菌稳定性及无菌滤液对苹果轮纹病菌孢子萌发和菌丝生长的影响;利用3代测序平台Nanopore测定Mr12的全基因序列,通过BLASTX比对注释所含基因,预测分析菌株Mr12抑菌作用的遗传基础。【结果】菌株Mr12对6种供试植物病原菌均具有抑制作用,抑制率在55%～91%。该菌株无菌滤液在pH 4～10范围内抑菌活性稳定,对酸碱的耐受范围广;对紫外线照射和蛋白酶K不敏感,80℃以内具有较强的热稳定性。Mr12无菌滤液可使苹果轮纹病菌菌丝膨大畸形,抑制菌丝生长和孢子萌发。通过全基因序列信息分析,发现Mr12含有合成difficidin、fengycin、bacillibactin、surfactin等多种肽聚糖和聚酮糖类抗性化合物的基因簇,以及能够降解病原菌细胞壁的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶相关的基因。【结论】菌株Mr12对多种植物病原物具有广谱拮抗作用,抑菌物质稳定性高,具有产生多种肽聚糖和聚酮糖类抗性化合物和细胞壁水解酶的能力。     

苦豆子内生拮抗放线菌的筛选及活性菌株鉴定

以6种植物病原真菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对126株苦豆子内生放线菌进行了抗菌活性筛选。结果表明:15株菌具有较高的抑菌活性,占总菌株数11.9%,其中菌株YWZKDS4和NDZKDS65对稻瘟病病菌和黄瓜枯萎病菌的抑菌带宽度最大,分别为15.12mm和18.54mm;菌株NDZKDS22具有广谱抗菌活性,它们的抑菌带宽度均大于10mm以上;根据形态特征和16SrRNA基因序列同源性分析,3株活性菌株YWZKDS4、NDZKDS22、NDZKDS65分别与Streptomyces scabiei、Streptomyces albospinus和Streptomyces capillispiralis亲缘关系最近,序列相似性分别为99.1%、96.4%、98.8%。试验结果表明,苦豆子内生放线菌对6种植物病原真菌具有较好的抑菌活性。     

苹果褐腐病拮抗毛壳菌的筛选及鉴定

【目的】筛选适合于防治苹果褐腐病(Monilinia fructigena)的生防毛壳菌,为苹果采后病害的生物防治提供潜在的菌株材料。【方法】选择4株毛壳菌,采用平板对峙法测量抑菌率和抑菌带宽度;通过生防毛壳菌发酵粗提物检测其抑菌活性强弱;通过离体接种苹果果实比较毛壳菌的控病作用。结合形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(r DNA-ITS)序列对抑菌活性强的毛壳菌菌株进行鉴定。【结果】供试的4株毛壳菌中,菌株24-9在平板对峙试验、发酵粗提物抑菌试验和离体接种试验中均表现出稳定而较强的抑菌活性,通过形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)序列构建系统发育树,将菌株24-9鉴定为球毛壳菌Chaetomium globosum。【结论】该生防毛壳菌菌株可用于开发苹果采后病害生防制剂,提高植物抗性,丰富我国苹果采后病害的生防菌资源库。     

芍药灰霉病拮抗细菌的筛选及生防机制研究

以芍药灰霉病发病典型叶片为试材,采用组织分离法进行病原菌的分离,平板对峙法筛选拮抗芍药灰霉病原菌的内生细菌,结合形态学特征和分子生物学手段进行病原真菌和拮抗细菌菌株的鉴定;采用离体叶片法测定拮抗细菌菌株对芍药灰霉病的防治效果,明确引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类,并获得防治芍药灰霉病的内生细菌菌株,以期为芍药灰霉病的防治提供参考依据。结果表明：引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea),筛选获得3株对灰葡萄孢菌具有显著拮抗作用的内生细菌菌株SY5、SY15和SY30,其中菌株SY5抑菌效果明显,抑菌率为84.44%。芍药离体叶片防治结果发现,3个菌株均对芍药灰霉病具有良好的防治效果,菌株SY5的防治效果可达67.66%。菌株SY5、SY15和SY30均被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。初步探讨3个菌株的生防机制,结果表明3个菌株均可合成脂肽类物质,且对灰霉病菌菌丝有较强的致畸作用,其中菌株SY5脂肽类物质对灰葡萄孢菌的抑制率最高,为88.89%。     

马铃薯早疫病拮抗菌的筛选及其代谢产物的抑菌活性

以马铃薯早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani)为指示菌,通过平板对峙法,筛选出菌株及其发酵滤液对马铃薯早疫病病原菌均具有较强拮抗作用的生防菌株BAF-6;通过形态特征、生理生化特性鉴定以及16S r DNA序列分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株发酵滤液经60~80℃热处理,抑菌活性均在95%以上;紫外线照射8 h或在p H值为2~10的酸碱环境下,发酵滤液的抑菌活性稳定;经蛋白酶处理后抑菌活性仍达50%以上。     

拮抗放线菌MY-4的分离、鉴定及其对果蔬病原菌的抑制作用

【目的】为了鉴定从沙糖橘果实表面分离得到的拮抗放线菌株MY-4,并确定该菌株对果蔬病原菌的拮抗作用,【方法】采用分析MY-4形态学、生理生化特性及16S rDNA序列相似性方法以确定其分类地位,并采用平板对峙培养法和生长速率法测定了其抑菌活性。【结果】结果显示,菌株MY-4为小白链霉菌(Streptomyces albulus Routien),菌株MY-4及其无菌发酵液对供试16种果蔬病原真菌均具有拮抗作用,其中菌株MY-4对香蕉炭疽病菌的拮抗作用最强,平板抑菌带宽度达17.08 mm,无菌发酵液对柑橘绿霉病菌的拮抗作用最强,菌丝生长抑制率高达98.82%,【结论】小白链霉菌菌株MY-4具有活性高、抑菌谱广的特点,有望继续研究开发成新的生防剂。     

羊耳蒜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性筛选

以兰科野生植物羊耳蒜为试材,采用常规无菌培养技术分离其根部的内生真菌,同时采用平板对峙的方法,研究了所获得的内生真菌菌株对常见植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:从羊耳蒜的根中共分离获得43株内生真菌,经形态学鉴定分属于7个属,其中丝核菌属占优势。筛选得到4株具有较强抑菌活性的菌株,占分离菌株总数的9.3%,抑菌活性集中在油菜菌核病菌。结合分子生物学鉴定发现,这4株菌株分别为腐皮镰孢菌Fusarium solani、柱孢霉属菌株Cylindrocarponsp.、轮枝菌属菌株Lecanicilliumsp.和胶膜菌属菌株Tulasnella sp.。     

冬虫夏草生理活性成分的研究进展

冬虫夏草是极其名贵的药用真菌之一,主要含有虫草多糖、核苷类物质、甾醇类物质、氨基酸、活性肽、虫草酸等生理活性物质,对于人体健康具有重要的意义。对近年来冬虫夏草的生理活性成分、成分分析方法以及药理作用等方面的研究进行归纳与论述,为冬虫夏草在食品和药品上的进一步研究与开发提供参考。     

白菜软腐病拮抗菌M-14拮抗机理和拮抗物质的初步研究

通过室内筛选得到对白菜软腐病有较强拮抗作用的菌株M-14,对其拮抗机理、拮抗物质的稳定性及抗菌谱进行了初步研究.结果表明:拮抗菌M-14对白菜软腐病菌的拮抗作用源于代谢物质而不是菌体本身;M-14酸碱稳定性极强,在pH 3～11的范围内均表现出较强的抑茵效果;拮抗菌M-14产生的拮抗物质热稳定性较强,在40℃时抑菌活性最强,10～100℃范围内均表现较强的抑茵活性;经对5种供试菌的抑菌作用测试,表现出抗菌谱广的特点.     

解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽研究进展

解淀粉芽孢杆菌作为益生菌已被广泛应用于生物防治领域,其产生的抗菌脂肽在植物病害防控上发挥重要作用,具有绿色、安全、高效等优势。该研究从抗菌脂肽类型、抗菌脂肽合成酶相关基因、抗菌脂肽生防作用及抑菌机理、通过突变菌株的选育和发酵工艺提高抗菌脂肽产量等方面对解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽进行了综述,同时对其发展前景进行了展望,以期为植物病害的生物防控提供参考依据。