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相似文献
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1.
目的对聚乙二醇(PEG)衍生物化学修饰重组人干扰素-α1b(rhIFN-α1b)的条件进行优化。方法以3种不同的第2代PEG衍生物对rhIFN-α1b进行修饰,SDS-PAGE分析PEG及修饰产物的表观相对分子质量。对反应pH值、温度、时间、修饰剂用量等修饰条件进行优化,并对修饰产物进行初步分离纯化和活性检测。结果PEG的电泳表观相对分子质量大于其理论值;PEG20000的修饰率(92.1%)高于PEG5000和PEG10000;修饰剂用量和pH值是主要影响因素,最佳pH为9.0,rhIFN-αlb与PEG20000的最佳摩尔比为1∶10,时间和温度影响甚微。单点修饰产物保留了14.4%的体外活性,多点修饰产物无活性。结论选择了合适的PEG衍生物并优化了修饰条件,为进一步深入研究奠定了基础。  相似文献   

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不同分子量聚乙二醇单修饰重组人干扰素a-2a   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用N-羟基琥珀酰亚胺活化制备不同分子量的聚乙二醇修饰剂(NHS-mPEG,分子量5000, 10000, 20000),考察三者水解动力学性质的差异,结合正交实验确定了不同分子量修饰剂制备单条PEG链修饰重组人干扰素a-2a(rhIFN-a-2a)的最佳反应条件,用离子交换法对产物进行分离纯化. 研究了不同分子量聚乙二醇干扰素结合物的体外活性,比较其蛋白收率. 实验结果表明,修饰剂分子量增大,应选择蛋白与修饰剂的反应活性高的修饰反应条件,体外活性虽然降低,但同时单修饰聚乙二醇干扰素结合物收率更高,产品质量更易控制.  相似文献   

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目的制备聚乙二醇(PEG)修饰的重组人干扰素α1b(rhIFNα1b),并分析其部分性质。方法采用PEG修饰rhIFNα1b,通过离子交换层析分离纯化修饰混合物,单点修饰产物经超滤浓缩后,经Lowry法检测蛋白的浓度,SDS-PAGE和RP-HPLC检测蛋白的纯度,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点,质谱法检测蛋白的相对分子质量,细胞病变抑制法检测蛋白的体外活性,ELISA法检测蛋白的抗原性。结果单点修饰产物的蛋白得率为33%;SDS-PAGE分析纯度为96.1%,RP-HPLC分析纯度为98.1%;等电点为6.22;相对分子质量为39946;比活为1.28×106IU/mg,活性保留率为14.4%;抗原性至少降至原来的1/625。结论制备的单点修饰rhIFNα1b药学性质获得改善,有望开发为安全、长效的新型干扰素。  相似文献   

6.
干扰素(Interferon,IFN)是一类具有抗病毒、免疫调节、抑制细胞增殖等多种生物活性的细胞因子,而体内循环半衰期短限制了其在临床上的应用。聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)修饰可以有效地改善干扰素的理化性质和生物学特性,延长体内循环半衰期。本文综述了聚乙二醇修饰干扰素的研究进展,着重介绍了聚乙二醇修饰化学的发展,α、β、γ干扰素各自不同的聚乙二醇化学修饰方法,并对聚乙二醇化干扰素的发展趋势进行了展望。  相似文献   

7.
聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的 建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG rhIFNα2b)的质量检测方法。方法 采用Wish细胞 VSV病毒系统 ,以CPE法测定干扰素的生物学活性 ,基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法测定相对分子质量 ,反向高效液相法 (RP HPLC)测定纯度 ,溴化氰裂解 SDS PAGE法测定肽图 ,等电聚焦电泳法测定等电点 ,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱。结果 聚乙二醇化重组人干扰素α2b的比活为 6 . 0× 10 6~ 10 . 0× 10 6IU/mg蛋白 ,相对分子质量约为 6 2 6 0 0 ,等电点在 5 . 2 0~ 6. 5 5之间 ,紫外最大吸收峰约在 2 78nm波长处。结论 所建立的检测方法可控制聚乙二醇化重组人干扰素α2b质量。  相似文献   

8.
目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂。方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和生物学稳定性,筛选最佳保护剂配比。结果通过6~12个月的试验,证实该冻干制剂外观、pH无明显改变,但再溶解速度略慢于以人血白蛋白作保护剂的冻干制剂;采用15mmol/L精氨酸+10mmol/L谷氨酸+4%甘露醇+1%蔗糖/海藻糖的冻干保护剂配方,在4℃和25℃放置12个月后,抗病毒活性仍较好,相当于人血白蛋白的冻干保护效果。结论已筛选出不含人血白蛋白的PEG-rhIFNα2b结合物的冻干保护剂。  相似文献   

9.
目的建立测定聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人干扰素α2b(Peg-IFNα2b)注射液中游离PEG含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测方法,并进行方法的验证。方法以Sepax Bio-C18为固定相,流动相A为0. 1%三氟乙酸-水溶液,流动相B为0. 1%三氟乙酸-90%乙腈-10%水溶液,梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测不同浓度PEG对照品及Peg-IFNα2b注射液样品,建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法,并对方法进行专属性、线性范围、检测限及加样回收率验证。结果高效液相色谱显示,PEG对照品与混有PEG对照品的Peg-IFNα2b注射液色谱峰分离度良好,且无其他色谱峰干扰;PEG对照品在6. 25~100. 00μg/mL范围内线性良好,R2=0. 990 3;最低检测限约为1. 56μg/mL;低、中、高3个浓度的PEG对照品加样回收率分别为107. 51%、103. 52%和95. 99%。结论建立的方法简单、准确、快速,可用于测定Peg-IFNα2b注射液中游离PEG含量。  相似文献   

10.
重组人干扰素(Recombinant human interferon,rhuIFN)是一类抗病毒、抗肿瘤和多发性硬化调节免疫的重要生物制品。自1957年发现干扰素以来,人们不断采用新技术对干扰素分子结构进行改造,先后研发了原型干扰素、保守干扰素、聚乙二醇修饰干扰素等几十个品种,目前已批准十余个一类新药干扰素上市。本文在回顾干扰素药物历史的基础上,对化学修饰改型干扰素、融合干扰素、杂合干扰素等的研究进展作一综述。  相似文献   

11.
In the present investigation, we have shown a single step purification of IFN-γ from the fermentation broth of recombinant Kluyveromyces lactis (K. lactis) strain, using cationic surfactant based reverse micellar extraction (RME) system. The forward and back extraction processes were optimized in order to improve the overall extraction process. 78%, 93% and 98% forward extraction efficiencies (FEE) were obtained after the process by using aqueous phase pH 12, 150 mM CTAB and 0.2 M NaCl respectively. Afterwards, back extraction efficiency (BEE) was maximized by the optimization of stripping phase pH, isopropyl alcohol (IPA) and potassium chloride (KCl) concentration by employing Taguchi’s method of orthogonal array. Stripping phase pH 7, 15% IPA & 0.8 M KCl were found to be the best possible parameters producing 83% BEE. The usage of IPA has proven to reduce the effect of micellar-micellar based interaction, which was reflected as an improvement in BEE. This study demonstrates that the reverse micellar system is a highly promising and efficient tool for the direct extraction of recombinant proteins from fermentation broth. Moreover, this system holds a high potential to be an integral part of the downstream process used in biopharmaceutical industry.  相似文献   

12.
目的将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点。通过基因工程方法获得cIFN_(m76)工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFN_(m76)的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEX~(TM)Ⅲ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFN_(m76)与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描。结果 cIFN_(m76)以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯度大于95%,比活性约为1.08×10~8IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联。结论成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFN_(m76),解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题。  相似文献   

13.
针对气辅成型工艺设定及控制的复杂性,使用Kriging代理模型近似拟合气辅成型工艺参数与气体穿透长度之间的非线性函数关系,建立起Kriging代理模型与APSO算法相结合的优化策略。应用所建立的优化方案,以气体的穿透深度为优化的目标,模拟了某汽车后视镜的气辅成型工艺优化过程。算例表明,基于Kriging代理模型与APSO算法耦合的优化策略可以在小样本情况下获取较高的求解精度和较快的收敛速度。  相似文献   

14.
目的探讨重组人干扰素α1b(recombinant human interferonα1b,rhIFNα1b)含片对大鼠免疫功能的调节作用。方法将大鼠按体重随机分为模型组(空白基质片干粉)、阳性对照组(匹多莫德)及rhIFNα1b含片低(1 000 IU/片)、中(10 000 IU/片)、高(50 000 IU/片)剂量组,每组14只,给予相应药物,每日1次,连续给药3周,于首次给药第7、9天经腹腔注射环磷酰胺,60 mg/kg,同时设正常对照组(10只),末次给药8 h后开始禁食,24 h后称量大鼠体重,计算胸腺及脾脏系数,检测血清及脾脏细胞中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IFNα水平,同时检测血清、唾液中IgG及IgA水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体重及胸腺系数均明显降低(P 0. 05),血清中IL-2、IL-4、TNF-α、IFNα、IgG及IgA水平均明显下降(P 0. 01),脾脏中IL-4、TNF-α及IFNα水平均明显下降(P 0. 01),唾液中IgG及IgA水平均明显下降(P 0.01)。与模型组比较,各剂量rhIFNα1b含片组大鼠的体重、胸腺及脾脏系数差异均无统计学意义(P 0. 05);血清及脾脏中IL-2、IL-4、TNF-α及IFNα水平有不同程度的升高;血液及唾液中IgA水平明显升高(P 0. 05)。结论中、高剂量的rhIFNα1b含片对大鼠免疫功能具有明显的改善作用。  相似文献   

15.
Incorporation of unnatural amino acids into recombinant proteins represents a powerful tool for protein engineering and protein therapeutic development. While the processing of the N-terminal methionine (Met) residues in proteins is well studied, the processing of unnatural amino acids used for replacing the N-terminal Met remains largely unknown. Here we report the effects of the penultimate residue (the residue after the initiator Met) on the processing of two unnatural amino acids, L-azidohomoalanine (AHA) and L-homopropargylglycine (HPG), at the N terminus of recombinant human interferon-beta in E. coli. We have identified specific amino acids at the penultimate position that can be used to efficiently retain or remove N-terminal AHA or HPG. Retention of N-terminal AHA or HPG can be achieved by choosing amino acids with large side chains (such as Gln, Glu, and His) at the penultimate position, while Ala can be selected for the removal of N-terminal AHA or HPG. Incomplete processing of N-terminal AHA and HPG (in terms of both deformylation and cleavage) was observed with Gly or Ser at the penultimate position.  相似文献   

16.
王梦寒  李雁召  夏知姿  陈明亮  杨海 《化工学报》2014,65(12):5054-5060
为了提高高光无痕注塑成型(rapid heat cycle molding,RHCM)制品综合品质,提出了一种基于Kriging模型与遗传算法(genetic algorithm,GA)结合的工艺参数优化策略.将该策略应用于某空调柜机出风面板成型,以正交实验法规划实验,通过CAE分析获取实验样本数据,借助数据归一化法、线性加权法、直观分析法等数据处理方法,得到了对RHCM成型影响显著的工艺参数依次为保压时间、冷却时间、熔体温度、加热时间.然后引入Kriging建模理论,建立了RHCM成型制品综合品质与主要成型工艺参数的近似模型,采用GA对建立的近似模型在可行解空间搜寻最优解.得到的最优工艺参数为:加热时间36.9 s,熔体温度182.9℃,保压压力88.5 MPa,冷却时间51.3 s.最后,通过CAE分析和生产试制分别验证了该优化策略的可行性和合理性.  相似文献   

17.
目的建立重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b)注射液中间甲酚含量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并对方法进行验证。方法采用RP-HPLC法,选用ZORBAX 300SB-C18(4. 6 mm×250 mm 5-Micron)色谱柱,流动相为水∶甲醇(50∶50),柱温45℃,上样量20μL,流速0. 5 mL/min,检测波长270 nm。对方法进行线性、专属性、准确性、精密性、定量限及耐用性验证。分别采用建立的方法及《中国药典》四部(2015版)4-氨基安替比林分光光度法测定3批rhIFNα2b注射液中的间甲酚含量,比较两种方法的测定结果。结果该方法在间甲酚含量为1 000~0. 1μg/mL范围内线性良好,R~2为0. 999 3;药用辅料与IFN蛋白对间甲酚含量检测无干扰;该方法检测高、中、低3种浓度样品的平均回收率分别为97. 10%、99. 00%和103. 94%,总的平均回收率为100. 01%;重复性验证中RSD为0. 105%,中间精密性验证中RSD为0. 26%;该方法的定量限为0. 1μg/mL;同一色谱柱条件下,不同设备与不同时间配制的流动相对检测结果无明显影响;而使用不同程度色谱柱理论塔板数有明显差异。结论建立的HPLC检测方法专属性、精密性、耐用性良好,准确性高,可用于检测rhIFNα2b注射液中的间甲酚含量。  相似文献   

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系统研究了如何追求篦冷机最佳的热效率、尽量降低出篦冷机熟料温度、提高二次风温度,从篦冷机供风平衡、风机风压、篦板密封优化等方面做出详细分析。  相似文献   

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目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定重组人干扰素α1b(recombi-nant human interferonα1b,rhIFNα1b)滴眼液中苯扎氯铵(benzalkonium chloride)的含量。方法采用HPLC法测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵含量,色谱条件:流动相:乙腈:5 mmol/L醋酸铵[含1%三乙胺,用冰醋酸调节pH值至(5.0±0.2)]体积比为65∶35;流速:1.0 ml/min;检测波长:262 nm;进样量20μl;柱温:室温。对该方法进行验证,并应用该方法检测3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。结果该方法检测苯扎氯铵专属性和系统适应性良好;最低检测限和定量限分别为0.53μg/ml和1.48μg/ml;苯扎氯铵在10~50μg/ml浓度范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 1;连续6次进样,峰面积的RSD=1.78%;苯扎氯铵理论浓度为22、24、26μg/ml的加样回收率平均为97.90%,RSD=0.96%。3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的相对含量分别为19.27、19.89和19.76μg/ml,分别为标示量的96.34%、94.46%和98.80%。结论 HPLC法简便、灵敏、准确,可用于测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。  相似文献   

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