缺氧对视网膜Müller细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的探讨缺氧对体外培养的大鼠视网膜M櫣ller细胞血管内皮生长因子(vas-cular endothelial growthfactor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived fac-tor,PEDF)表达的影响。方法采用RT-PCR和Western印迹分析方法分别对不同缺氧时间视网膜M櫣ller细胞VEGF和PEDF的mRNA及蛋白水平进行测定。结果M櫣ller细胞VEGF mRNA及蛋白表达在缺氧12h后明显升高,缺氧24h更为显著,24h时2者分别为对照组的2.12倍(P<0.05)和1.70倍(P<0.05)。PEDF mRNA及蛋白表达在缺氧6h后明显下降(P<0.05),缺氧24h下降更为显著,24h时2者分别为对照组的0·11倍(P<0.01)和0.54倍(P<0.05)。结论缺氧条件下,体外培养的大鼠M櫣ller细胞VEGF和PEDF表达失衡,PEDF表达下降,同时VEGF表达增加,2者的表达失衡可能在视网膜病理性新生血管形成过程中起一定作用。     

缺氧和高糖对视网膜胶质细胞色素上皮衍生因子表达的影响

目的 探讨缺氧和高糖对体外培养的大鼠视网膜胶质细胞色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 采用RT-PCR和Wesern blot法分别对缺氧和高糖条件下大鼠视网膜胶质细胞PEDF mRNA及蛋白表达水平进行测定.结果 缺氧1 h、3 h,PEDF表达无明显变化.缺氧6 h后PEDF mRNA及蛋白表达明显下降,缺氧24 h下降最明显(P＜0.01).不同浓度葡萄糖(30、40、50 mmol/L)培养48 h后,PEDF的表达水平均明显下降(P＜0.05).结论 体外培养的大鼠视网膜胶质细胞在缺氧和高糖环境下PEDF表达明显下降.PEDF表达水平的下调可能参与了糖尿病视网膜病变新生血管的形成过程.     

雌激素对缺氧视网膜Müller细胞PEDF和VEGF表达的影响

目的：探讨雌激素对缺氧视网膜Müller细胞色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western-blot印迹分析方法分别测定不同浓度雌二醇（E2）作用于缺氧Müller细胞后,细胞内PEDF mRNA,VEGF mRNA及相应的蛋白表达水平。结果：缺氧24h后PEDFmRNA及蛋白表达明显降低,10-5mmol/L和10-6mmol/LE2作用于Müller细胞后可明显缓解由于缺氧引起的细胞内PEDF mRNA及蛋白表达的降低,并与E2的浓度有关。缺氧24h后VEGF mRNA及蛋白表达明显升高,10-5mmol/L和10-6mmol/LE2作用于Müller细胞后可以明显降低细胞内VEGF mRNA及蛋白表达水平,并与E2的浓度有关。结论：雌激素可以调控缺氧条件下视网膜Müller细胞内PEDF和VEGF的表达,对视网膜病理性新生血管的形成具有保护作用。     

CCR7和VEGF在缺氧时视网膜血管内皮细胞中的表达及意义

目的：探讨CC族趋化因子受体7（ CC chemokine receptor7, CCR7）和血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor,VEGF）在缺氧状态下视网膜血管内皮细胞（ retinal endothelial cell,REC）中的表达及意义。
　　方法：恒河猴脉络膜－视网膜内皮细胞（ RF／6A）分别在常氧和低氧环境中培养,分为正常对照组、低氧对照组和治疗组。低氧对照组和治疗组分别采用脂质体LipofectamineTM 2000（ LF2000）介导转染空载体质粒和CCR7siRNA表达质粒。 CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot和RT－PCR法检测三组RF／6A内CCR7、VEGF蛋白及mRNA的表达情况。结果：低氧对照组较正常对照组比较及治疗组较正常对照组和低氧对照组比较细胞生长速度明显减慢,增殖能力减弱,细胞凋亡率显著增加（均为P＜0．05）;低氧对照组与正常对照组比较, RF／6 A内CCR7、VEGF蛋白及mRNA表达显著增高,均有统计学意义（ tCCR7蛋白＝3．38,tVEGF蛋白＝4．75,tCCR7mRNA＝4．27,tVEGFmRNA＝5．34,均为P＜0．05）,且二者表达呈正相关（ r蛋白＝0．71, rmRNA ＝0．83,均为 P＜0．05）。治疗组CCR7和VEGF的蛋白及mRNA表达较正常对照组和低氧对照组明显下降（均为P＜0．05）。
　　结论：缺氧时REC中CCR7可上调VEGF的表达,CCR7－VEGF信号途径在视网膜新生血管（ retinal neovascularization, RNV）形成的过程中可能具有潜在功能,CCR7siRNA有望成为防治RNV的一种有效方法。     

shRNA抑制人RPE细胞HIF-1 α基因表达对VEGF及PEDF表达的影响

目的利用小发卡环RNA（shRNA）使缺氧培养条件下的人视网膜色素上皮（RPE）细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因沉默，观察对血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮衍生因子（PEDF）的影响。方法体外转录法合成对HIF-1αmRNA序列的两个靶点的shRNA，对缺氧（150μmol／LCoCl2模拟）培养条件下人RPE细胞的HIF-1α进行干扰，使用RT—PCR检测HIF-1α、VEGF和PEDFmRNA的表达及Western印迹分析检测HIF-1α、VEGF和PEDF蛋白水平。结果HIF-1αmRNA的两种shRNA均能有效地抑制RPE细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达，同时也有效地抑制VEGFmRNA和蛋白表达，并促进PEDF蛋白表达，但对PEDFmRNA的表达无影响。结论HIF-1αmRNA的shRNA能有效地使缺氧条件下RPE细胞HIF-1α基因沉默，进而有效地抑制缺氧对VEGF的上调作用，同时也促进PEDF表达。揭示了HIF-1与缺氧条件下PEDF翻译后的下调机制有关，是促进视网膜新生血管形成最为关键的细胞因子之一。     

缺氧对视网膜Muller细胞上水通道蛋白-4表达的影响

目的利用体外培养的视网膜Muller细胞，研究在缺氧条件下视网膜Muller细胞上水通道蛋白-4（AQP-4）表达的变化。方法采用组织块培养法从新西兰大白兔视网膜中获取Mullerr细胞，在含20％胎牛血清的DMEM培养液中原代培养，培养的细胞通过胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学染色及透射电子显微镜进行鉴定。取第2代细胞进行实验，将化学缺氧诱导剂CoCl，联合DMEM培养液培养24h的细胞作为缺氧组；将DMEM培养液单独培养24h的细胞作为对照组。采用免疫细胞化学法及半定量RT．PCR法分别检测2组Muller细胞上AQP-4蛋白及AQP-4mRNA的表达。结果Muller细胞（第2代）上GFAP的阳性率为90％以上，细胞质染色呈棕色。细胞内含特征性的中间丝，细胞表面有微绒毛，细胞质内含丰富的细胞器。CoCl，联合DMEM培养液培养24h后Muller细胞上AQP-4蛋白的表达较对照组明显增加（t=6．74，P〈0．05）；AQP-4mRNA的表达亦明显增加（t=21．79，P〈0．05）。结论缺氧能增强Muller细胞上AQP-4的表达，进而使视网膜内液体的积聚增加。提示Muller细胞在糖尿病视网膜病变（DR）或增生性视网膜病变的视网膜水肿形成过程中起重要作用。     

Müller细胞内色素上皮衍生因子与血管内皮生长因子的相互作用

目的 研究Müller细胞内色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的相互作用,为临床上治疗新生血管提供新的思路.方法 大鼠Müller细胞原代培养,取第3代细胞用于实验.实验按以下操作进行:(1)观察VEGF对PEDF的作用:VEGF处理组细胞培养液中加入不同浓度VEGF(100nmol·L-1、500 nmol·L-1、1 000 nmol·L-1、5 000 nmol·L-1),24 h后收集细胞分别用RT-PCR和Western-blot法分析Müller细胞内PEDF mRNA和蛋白的表达.(2)观察PEDF对VEGF的作用:PEDF处理组细胞培养液中加入不同浓度PEDF(10 nmol·L-1、40 nmol·L-1、160 nmol·L-1、640 nmol·L-1),24 h后收集细胞分别用RT-PCR和Western-blot法分析Müller细胞内VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 VEGF处理组中,VEGF浓度为1 000 nmol·L-1、5 000 nmol·L-1时,PEDF mRNA分别为正常对照组的0.69倍(P<0.05)和0.44倍(P<0.01),PEDF蛋白分别为正常对照组的0.54倍(P<0.05)和0.52倍(P<0.05).随VEGF浓度的升高,PEDF mRNA及蛋白表达均有逐渐减弱趋势.PEDF处理组中,PEDF浓度为40 nmol·L-1和160 nmol·L-1时,VEGF mRNA分别为正常对照组的0.61倍(P<0.05)和0.42倍(P<0.01),VEGF蛋白分别为对照组的0.70倍(P<0.05)、0.63倍(P<0.05).随PEDF浓度的升高,VEGF mRNA及蛋白表达亦有逐渐减弱趋势.结论 在Müller细胞内,VEGF对PEDF表达具有抑制作用,PEDF对VEGF也具有抑制作用,二者的负反馈调节作用可能在视网膜病理性新生血管中起重要作用.     

色素上皮源性生长因子在低压性缺氧成年大鼠视网膜的表达

目的探讨成年大鼠在低压性缺氧后,色素上皮源性生长因子在其视网膜的表达情况。方法成年Wistar大鼠48只随机分成6组,每组8只,其中正常对照组8只,其余5组在暴露于低氧环境（氧气体积分数为7％～9％）2h后,分别于3h、24h、3d、7d和14d,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,蛋白免疫印迹法和免疫组化的方法检测色素上皮源性生长因子（PEDF）在视网膜的表达情况。结果免疫组化显示PEDF在正常及缺氧组大鼠视网膜神经节细胞层、内网层、外网层、内核层和光感受器层有表达;在暴露于低氧性环境后的3h、24h、3d、7d和14d,成年大鼠视网膜PEDF mRNA水平与正常对照组相比,分别减少17．3％、28％、44％、46％和51％（P值均〈0．05）;PEDF蛋白质水平较正常对照组分别减少了21．6％、37．3％、39．8％、42．6％、43．9％（P值均〈0．05）。结论：这次实验结果表明缺氧可以使成年大鼠视网膜PEDF的表达下调。     

PEDF和VEGF mRNA在实验性脉络膜新生血管组织中的表达

目的 研究血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor，PEDF)在实验性小鼠脉络膜新生血管(choroidal neowascularization,CNV)组织中的表达情况。探讨二者在CNV形成过程中所起的作用。方法 用半导体激光诱导小鼠CNV模型。分别于激光后1、3、7d、2和3周时取出眼球，采用原位杂交方法检测CNV组织中VEGF和PEDF mRNA的表达情况。结果 VEGF和PEDF mRNA在激光诱导的小鼠CNV组织形成过程中均有显著表达。激光光凝早期二者的表达均增高，但VEGF mRNA的表达升高更显著。激光照射后3和7d时．VEGF mRNA的表达即达到高峰，阳性率分别为26．05％和27．92％，而PEDF mRNA的阳性表达率分别为21．13％和23．55％．2周时，VEGF mRNA表达开始下降，约为23．95％，而PEDF mRNA的表达则达到高峰,为29．19％,光凝后3周时，二者的表达均下降，但PEDF mRNA的表达仍高于VEGF mRNA的表达，分别为24．87％和21．93％．结论 VEGF和PEDF mRNA明显表达于实验性小鼠CNV组织中。2者表达失衡可能在CNV的形成过程中起到调控作用。     

缺氧对人视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导调节子5表达的影响及其可能机制

目的探讨缺氧环境下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中G蛋白信号转导调节子5（RGS5）表达的可能机制。方法实验研究。在正常培养的人RPE细胞培养基中加入终浓度为200／μmol／L的CoCl：建立细胞化学缺氧模型。按缺氧时间分为0、1、3、6、12和24h6组,观察RGS5和血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化;另选取12和24h作观察点,按处理因素分为缺氧对照组和VEGF抑制剂Bevacizumab处理组,Bevacizumab包括25、100和250肛咖l3种浓度,观察特异性抑制VEGF表达对RGS5表达产生的影响。应用免疫荧光染色法、Western blot和RT-PCR分别检测RGS5及其mRNA和VEGF蛋白及其mRNA的表达。采用Student’s t检验进行统计学分析。结果正常条件下,RGS5主要在人RPE细胞胞浆中表达。与VEGF存在相同表达区域。随着缺氧时间的延长,RPE细胞中RGS5蛋白及其mRNA表达逐渐上调,24h时达高峰（0．932±0．104,t=3．106,P=-0．01l;0．742±0．083,t=2．852,P=-0．017）;VEGF蛋白及其mRNA表达12h达高峰（1．022±0．141,t=4．144,P=0．002;0．491_＋0．063,t=5．707,P〈0．01）,24h时有所下降,但仍高于无缺氧的RPE细胞（0．942±0．125,t=3．306,P=0．008;0．425±0．080,t=3．239,P=0．011）。浓度为100和250μg／ml的Bevacizumab有效抑制VEGF蛋白（￡=2．794,P=0．019;t=3．396,P=0．007）和其mRNA（t=2．823,P=0．018;t=9．584,P〈0．01）表达后,RGS5蛋白（t=2．953,P=0．014;t=2．913,P=0．015）和其mRNA（t=3．009,P=-O．013;t=4．243,P=-0．002）表达也随之受到抑制。结论缺氧条件下人RPE细胞RGS5表达上调,并与VEGF表达具有时相关系;抑制VEGF表达后,RGS5表达随之降低。提示RGS5位于VEGF信号通路下游,可能参与缺血缺氧性RPE相关眼病发生的调控。     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。     

玻璃体内注射康柏西普治疗早产儿视网膜病变的血管化过程

目的：评价玻璃体内注射康柏西普在治疗I型(阈值期和阈值前期)和A-ROP(急进性ROP)的早产儿视网膜病变(ROP)的一系列病例中引起的视网膜血管化过程。方法：回顾性研究2017-07/2020-03在厦门市儿童医院眼科通过玻璃体腔注射康柏西普(IVC)治疗的ROP患者34例67眼。再活化是指急性期特征的复发，发生在疾病的任何阶段，无论是否存在其他疾病。结果：患儿34例的平均胎龄为28.82±2.32wk。平均出生体质量为1155.18±398.22g。19例37眼的病变区域为Ⅰ区。10例20眼的病变位于Ⅱ区，5例10眼的病变位于Ⅱ区后部。一次IVC治疗的ROP患儿疾病控制总有效率为73.1%(49/67)，且Ⅱ区血管化均完成。患者在Ⅲ区的血管化完成率出现差异。在接受过一次治疗且未再复发的患者中，Ⅰ型ROP血管化时间平均为9.11±2.49wk，A-ROP为13.40±4.04wk。A-ROP的血管化完成时间明显比Ⅰ型ROP的时间长，且结果有统计学差异。结论：IVC治疗后的病变为Ⅱ区的患儿均具有较高的血管完成率。     

眼睑分裂痣的手术方式探讨

目的 探讨不同部位和大小眼睑分裂痣的手术方式及效果.方法 回顾性系列病例研究.收集本中心1997年7月至2006年11月的眼睑分裂痣病例共30例(30只眼),按不同部位,侵犯范围的大小分别采取了不同的手术方法.包括:分裂痣切除后直接缝合3例;分裂痣切除后Ⅰ期行游离皮肤移植术5例;分裂痣切除后皮瓣转移术,手术分两期进行,Ⅰ期行上睑或下睑手术,3个月后Ⅱ期行另一眼睑手术,共22例,其中对侵及泪小点的分裂痣将色素痣和受侵犯的泪小点一起切除后行泪小管口再造和睑成形术8例.结果 30例患者随访2～11年,平均随访时间60个月.有1例术后2年复发,随诊5年再次手术,术后病理发现有恶变,经再次行Mohs眼睑恶性肿瘤组织学控制性切除术,术后未见复发.其余病例未见复发和恶变.结论 眼睑分裂痣切除术采用分期手术转移皮瓣法修复眼睑比游离植皮法疗效更满意.对分裂痣切除术后的病例需密切观察,以便早期发现恶变.     

玻璃体腔注射康柏西普治疗早产儿视网膜病变的临床疗效

目的：观察玻璃体腔注射康柏西普治疗早产儿视网膜病变（ROP）的安全性和有效性。方法：回顾性病例研究。选择2015年2月至2016年5月郑州市第二人民医院和登封市妇幼保健院ROP筛查并诊断为 急进性后极部早产儿视网膜病变（AP-ROP）、阈值期ROP或阈值前期1型ROP的患儿26例（52眼）。其中Ⅰ区病变17例,Ⅱ区病变9例。所有患儿在确诊后24 h内玻璃体腔注射10 mg/ml康柏西普0.025 ml （含康柏西普0.25 mg）。随访时间为21～49（31.2±12.5）周。病情复发或对康柏西普治疗无反应者,给予重复康柏西普注射或激光光凝治疗。随访期间观察患儿视网膜血管变化情况以及眼部或全身不良反应发生情况。结果：52眼中,经单次康柏西普治疗有效为46眼（88%）,病变完全消退,视网膜血管发育至Ⅲ区。重复康柏西普注射治疗2眼,占4%;经补充激光光凝治疗4眼,占8%,其中3眼病变复发行玻璃体切割术,占所有患眼的6%,纤维增生膜持续加重,发生视网膜脱离,2眼术后视网膜完全复位,1眼术后视网膜部分复位,包括AP-ROP 1眼,阈值期ROP 2眼,均为Ⅱ区病变,复发时间为10～17（13.2±1.8）周。所有患儿随访期间均未发生局部及全身不良反应。结论：康柏西普注射治疗ROP患儿安全有效。部分治疗无反应者,需手术联合激光光凝治疗。     

早产儿视网膜病变阈值病变的相关因素分析

目的 对早产儿视网膜病变(ROP)不同转归一自然退行与阈值病变各相关因素进行分析,以探讨与ROP阈值病变有关的因素.方法 回顾性分析2008年5月至2009年7月在吉林大学第一医院新生儿科收治的83例确诊ROP的早产儿相关临床数据,并进行统计学分析.结果 在83例不同程度ROP患儿中(166只眼),自然退行51例(102只眼,占ROP患儿61.45％),阈值病变32例(64只眼,占ROP患儿38.55％).使用t检验和logistic回归分析,结果表明ROP阈值病变组的胎龄较ROP自然退行组小,产次较ROP自然退行组次数多,差异均有统计学意义(P＜0.05);排除其他因素干扰后,男性、机械呼吸及发生败血症与ROP阈值病变有关,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小胎龄、多产次,男性、使用机械呼吸、发生败血症与ROP不能自然退行有关.     

艾滋病眼部并发症的资料分析

目的:通过调查分析,了解艾滋病眼部并发症的临床表现、治疗及预后。方法:收集赞比亚卡布韦总医院眼科2008-08/2009-08就诊患者。结果:艾滋病眼部并发症症状重,病程长,致盲率高。结论:充分认识、掌握艾滋病眼部并发症的临床表现,提高艾滋病的检出率,早发现、早治疗,提高艾滋病患者的生活质量。同时应强调预防是降低艾滋病发生率的关键。     

重症早产儿视网膜病变的高危因素分析

目的探讨重症早产儿视网膜病变(ROP)的发生率及高危因素分析对临床筛查的指导意义。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月756例早产儿临床资料,记录其孕周、出生体重、吸氧时间、吸氧浓度、APgar评分(1分钟in)、APgar评分(5 min)、败血症、呼吸暂停、机械通气、输血等。应用t检验、卡方检验以及Logistic回归分析分析重症ROP与孕周(GA)、出生体重(BW)、吸氧时间、吸氧浓度、APgar评分(1 min)、APgar评分(5 min)、败血症、呼吸暂停、机械通气、输血等因素之间的关系。结果 756例早产儿,严重ROP发生3.3%。各因素中,孕周较少、低出生体重、长时间吸氧、高浓度吸氧、APgar评分(5 min)<4分,机械通气、输血是重症ROP的高危因素,统计学有显著差异。结论严重ROP的发生受孕周较少、低出生体重、长时间吸氧、高浓度吸氧、APgar评分(5 min)<4分,机械通气、输血影响。特别是GA≤28周或BW≤1000 g早产儿患严重ROP的危险性显著增加,建议重点对此类早产儿进行及时筛查。     

两种不同截囊方法的后房型人工晶状体植入术比较

目的比较白内障囊外摘出及后房型人工晶状体植入术中2种不同的截囊方法的术后效果。方法将70例患者随机分为A、B2组，A组38例41眼，采用开罐式截囊后房型人工晶状体植入术．B组32例37眼采用信封式截囊囊袋内人工晶状体植入术。随访3mo～2a，比较2组视力恢复情况和并发症。结果术后ld视力＞0．1者，A组70．7％，B组81％，术后3mo～2a视力≥0．5者，A组90．24％．B组94．6％，2组比较无显著性差异（P＞0．05）。A、B2组并发症发生率分别为53．6％和13．5％组比较有显著性差异（P＜0．01）。结论信封式截囊囊袋内植入人工晶状体优于开罐式截囊后房型人工晶状体植入。     

泪囊鼻腔吻合术后复发的原因分析和再次手术探讨

目的分析泪囊鼻腔吻合术术后复发的原因并探讨再次手术的可行性。方法对11例泪囊鼻腔吻合术术后复发的患者予以再手术治疗,随访半年至一年。结果复发原因：泪囊未完全切开2例,骨孔过小或位置错误4例,吻合腔或骨孔内肉芽组织增生堵塞5例;10例术后流泪消失,泪道冲洗通畅,占90.91%,1例流泪减轻,泪道冲洗基本畅通,占9.09%。结论泪囊鼻腔吻合术术后复发患者可以通过再次手术重建泪道,是治疗泪囊鼻腔吻合术术后复发的有效方法之一。