全反式维甲酸体外药理作用研究进展

<正> 全反式推甲酸(ATPA)是维生素A的一种衍生物.维甲酸能通过细胞核上多种受体产生多种生物学效应,包括细胞分化、细胞代谢、细胞间质代谢、有关调质的代谢等.现就近期其药理作用体外研究进展综述如下:     

全反式维甲酸的不良反应

我国首创应用全反式维甲酸（ATRA）治疗急性早幼粒细胞白血病（ARL），取得了较好的效果，完全缓解率高达80～gO％。在应用该药治疗APL过程中，人们逐渐发现了它的一些不良反应，现加以介绍以引起注意.1皮肤与粘膜病变1992年全国全反式维甲酸治疗白血病协作组统计[1]，皮肤与口唇干燥脱屑的发生率是副反应中最高的，占71．5％，坦患者一般都能耐受，不影响治疗。另外，皮疹发生率为4．11％，阴囊皮疹与溃疡占1．87％，如果出现明囊溃疡应停用该药。2头扬与商项压综合征头痛、头晕的发生率约46％［1］，头痛的程度轻重不等，多数患者经…     

全反式维甲酸毒副作用临床分析

用全反式维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病９８例，常见副作用有皮肤粘膜干燥，头痛，骨与关节疼痛，阴囊溃疡，恶心，呕吐等，并出现维甲酸综合征（ＲＡＳ）４例，高白细胞综合征８９例，高颅压综合征２６例。     

全反式维甲酸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿的抑制作用

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）是否对阿霉素肾病大鼠具有降低尿蛋白的作用。方法通过建立阿霉素肾病大鼠模型,随机分3组,即对照组、模型组和干预组。其中模型组、干预组一次性尾静脉注射阿霉素5mg/kg,对照组注射等量生理盐水,注射阿霉素后第2天干预组每天给予20 mg/kg ATRA灌胃,对照组、模型组各予等量花生油灌胃,每周检测24 h尿蛋白定量,4周后处死大鼠,检测尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯和白蛋白及ALT,电镜下观察大鼠肾组织。结果ATRA干预组与模型组相比大鼠尿蛋白明显减少（P〈0.01）,血白蛋白明显增加（P〈0.01）,干预组大鼠电镜下足突融合现象较模型组为轻。结论ATRA能够降低阿霉素肾病大鼠尿蛋白,对肾脏有保护作用。     

全反式维甲酸干预大鼠肺动脉高压的实验研究

目的：探讨全反式维甲酸（ａｌｌ－ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ,ａｔＲＮＡ）对主动脉段胶原含量和肺动脉高压肺血管重建的干预作用。方法：所有动物分成三组：对照组、模型组和ａｔＲＮＡ组。利用野百合碱（ｍｏｎｏｃｔｒｏｔａｌｉｎｅ ＭＣＴ）诱导大鼠肺动脉高压模型,同时给予ａｔＲＡ治疗。经导管介入测定平均肺动脉压力,比色法测定肺动脉段羟脯氨酸含量。结果：对照组大鼠平均肺动脉压于不同时间差异无显著性,而模型组平均肺动脉压于高２１天,并继续升高至本次实验的第２８天。肺动脉段羟脯氨基酸含量第１４天异常降低,以后随肺压力的升高而升高,ａｔＲＮＡ降低第２１天和２８天肺动脉段羟脯氨氨酸含量,明显降低肺动脉压,差异均有显著性。结论：ａｔＲＮＡ能抑制细胞外基质中胶原积聚,降低平均肺动脉压,阻止肺高压进展。     

全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾小管—间质中肌成纤维细胞的作用

目的观察全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾小管—间质中肌成纤维细胞的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型大鼠24只随机分为实验组(T)、模型组(D)各12只,正常组(N)健康大鼠12只,T组给予全反式维甲酸(20mg·kg-1.d-1)植物油溶液灌胃,D组和N组分别灌注相同等量的植物油。4、8周时每组各处死大鼠6只,测量24h尿微量白蛋白排泄率、肾重/体重、血肌酐、血糖(BS)。肾组织PAS、Masson’s染色,免疫组化检测肾小管—间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,肌成纤维细胞的标记)的表达。结果肾组织PAS、Masson’s染色可见T组肾小球系膜细胞和基质的增生明显低于D组,肾小管上皮细胞的肿胀、空泡变性以及肾间质的增生明显好于D组;4周时尿微量白蛋白的排泄率T组低于D组[(3.1±0.5)μg/minvs(3.4±0.6)μg/min,P<0.05],8周时更加明显[(2.5±0.4)μg/minvs(4.5±0.9)μg/min,P<0.01];4、8周血肌酐T组分别低于同期D组[(56±6)μmol/Lvs(65±4)μmol/L,P<0.05;(48±3)μmol/Lvs(69±6)μmol/L,P<0.01],肾重/体重T组分别低于同期D组(6.0±0.4vs6.7±0.6,P<0.05;5.1±0.6vs7.8±1.0),血糖差异无统计学意义[(30.1±3.2)mmol/Lvs(28.3±3.5)mmol/L,P>0.05;(28.8±5.3)mmol/Lvs(31.0±3.3)mmol/L,P>0.05];肾小管—间质α-SMA表达T组明显低于D组。结论全反式维甲酸可减轻糖尿病大鼠肾小管—间质的损害,减少蛋白尿、肾小管—间质肌成纤维细胞的数量,防止肾间质的纤维化。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响

目的:观察全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响,为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供实验依据.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,以不同浓度的ATRA处理HO8910细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况,倒置显微镜进行形态学观察,Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果:(1)ATRA浓度为10~(-7)～10~(-5)mol/L时,均明显抑制HO8910细胞的增殖(P<0.05),并具有时间-剂量依赖性.24、48、72 h ATRA抑制HO8910细胞增殖的IC_(50)值分别为2.331×10~(-5)、0.998×10~(-6)、0.891×10~(-7)mol/L.(2)倒置显微镜可观察到经10~(-6)mol/LATRA处理的HO8910细胞部分发生形态学的良性分化.(3)体外侵袭实验显示经10~(-6)mol/L ATRA处理的HO8910细胞,穿膜细胞数目明显减少(P<0.05).结论:ATRA能明显抑制人卵巢癌细胞株HO8910的增殖、侵袭能力,有望为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供新的有效的途径.     

ATO和ATRA联合化疗治疗急性早幼粒细胞白血病效果观察

目的观察亚砷酸(ATO)、全反式维甲酸(ATRA)和化疗联合治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的疗效和副作用。方法对53例初治APL患者分别采用ATO和ATRA联合化疗诱导缓解。结果完全缓解(CR)率为71.6%,部分缓解(PR)率为13.8%。3年复发率为10.5%。结论ATO联合ATRA与化疗治疗APL患者的缓解高,副作用低和复发率低,是临床上治疗急性早幼粒细胞白血病的首选方案。     

全反式维甲酸对5/6肾大部切除大鼠肾间质纤维化的影响及其作用机制

 目的  探讨全反式维甲酸 (all-trans retinoic acid,atRA)对5/6肾大部切除 (5/6 nephrectomy,5/6Nx) 大鼠肾小管间质纤维化的作用及其机制。方法  成年雄性SD 大鼠行5/6Nx后2周分为3组:5/6Nx组 (大豆油1 mL·kg-1·d-1,n=11)、 atRA1 组 (atRA 5 mg·kg-1·d-1,n=10)、atRA2组 (atRA 10 mg·kg-1·d-1,n=11),另设Sham组即假手术组 (大豆油1 mL·kg-1·d-1,n=7)。经灌胃给药,每日1次,连续给药12 周。测定24 h尿蛋白量和血肌酐浓度;肾脏病理切片采用VG染色,对肾小管间质纤维化进行评分;用Western blot检测肾皮质中α平滑肌肌动蛋白 (α-smooth muscle actin,α-SMA)和纤溶酶原激活物抑制剂1 (plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的蛋白表达。结果  术后14 周,atRA显著降低5/6Nx大鼠的24 h尿蛋白量和血肌酐浓度 (P均<0.05)。atRA显著降低该模型的肾小管间质纤维化 (P<0.01)。atRA显著下调该模型的肾皮质α-SMA和PAI-1表达 (P均<0.05),肾小管间质纤维化评分与α-SMA和PAI-1表达均呈显著正相关 (r分别为0.717 6和0.809 8,P均<0.01)。结论  atRA可减少5/6Nx大鼠的尿蛋白水平,抑制肾皮质α-SMA和PAI-1的蛋白表达,从而减轻肾间质纤维化。     

全反式维甲酸对卵巢上皮性癌细胞糖代谢的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对卵巢上皮性癌细胞株COC2干预后肿瘤细胞内糖代谢的变化及意义,进而从肿瘤能量代谢角度说明ATRA对卵巢上皮性癌的抑制及诱导分化作用产生的机制。方法以不同浓度及作用时间的ATRA对COC2细胞株进行干预,测定细胞质糖原、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)的含量。结果COC2经5μmol/L及10μmol/L ATRA作用后,细胞内糖原含量及SDH的含量增加,LDH含量下降,并与时间呈正比,但两浓度间差异无统计学意义;经1μmol/L ATRA作用后与对照组比较无差异。结论5μmol/L及10μmol/L ATRA作用于COC2癌细胞株后,可产生细胞内糖原及SDH含量增加、LDH含量下降的改变,减缓了肿瘤细胞内的能量代谢,从而达到诱导肿瘤分化、抑制肿瘤生长的作用。     

全反式维甲酸、三氧化二砷联合化疗治疗初治急性早幼粒细胞白血病的临床观察

目的观察以全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(ATO)双诱导,联合化疗治疗初治急性早幼粒细胞白血病(APL)的疗效。方法对初治APL患者35例以ATRA和ATO进行双诱导,联合DA(柔红霉素+阿糖胞苷)方案化疗,达完全缓解(CR)后,采用DA、MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)、MDAra-c(中剂量阿糖胞苷)、ATO序贯治疗,于每疗程化疗结束后连服ATRA 15 d,总治疗时间3年。结果35例初治APL患者中,1例早期死亡,未纳入评价,其余34例中,33例(97.1%)获得CR,1例(2.9%)未缓解(死于重症肺部感染)。2例(5.9%)发生维甲酸综合征(RAS)。随访至2009年5月,复发2例。3年总生存率、无病生存率分别为94.12%、91.18%。结论双诱导联合化疗治疗初治APL疗效可靠,患者可耐受治疗。     

柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸对白血病细胞系CYP3A5基因转录及活性的调控

目的 探讨化疗药对白血病细胞系CYP3A5基因转录及活性的调控。方法 采用RT-PCR、高压液相色谱法(HPLC)检测药物干预后白血病细胞系CYP3A5基因的转录及活性。结果 K562／A02细胞经柔红霉素作用后CYP3A5转录增强，HL-60／ADR细胞则经诱导后出现CYP3A5转录。Jurkat细胞经地塞米松作用24h后出现微弱的CYP3A5转录，48h后转录明显增强。NB4细胞经全反式维甲酸作用24～96h均诱导出现CYP3A5转录。K562细胞的CYP3A5活性显著高于HL-60、NB4和Jurkat细胞。柔红霉素作用24h后K562细胞的CYP3A5活性增高，48h后活性显著增高；而NB4和Jurkat细胞在柔红霉素作用24h后CYP3A5活性无改变。地塞米松作用Jurkat细胞、全反式维甲酸作用NB4细胞均能诱导CYP3A5活性显著增高，并呈时间依赖性。结论 柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸的应用可诱导某些白血病细胞株CYP3A5基因的转录及活性。     

Notch1在全反式维甲酸诱导的神经干细胞分化中的作用

目的 探究Notch1在全反式维甲酸诱导的神经干细胞分化中的作用,揭示其对神经管发育的影响。 方法 免疫荧光检测神经干细胞标记物——巢蛋白(Nestin)、神经元标记物——神经丝蛋白(NF)、星型胶质细胞标记物——神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞标记物——半乳糖脑苷脂(GALC)及Notch1在上述细胞中的分布。Western blotting检测神经干细胞中Notch1、NF、GFAP、GALC分别在普通分化培养基和全反式维甲酸培养基(ATRA)中1、3、5、7 d的含量。神经干细胞分为4组:将普通分化培养基设为A组,普通分化培养基+DMSO组设为B组,普通分化培养基+DMSO+25 μmol/L γ-内分泌酶抑制剂(γSI)组设为C组,普通分化培养基+DMSO+50 μmol/L γSI设为D组,Western blotting检测各组细胞中Notch1含量。 结果 免疫荧光鉴定Nestin、NF、GFAP、GALC呈阳性,且在上述细胞胞膜上及胞质中有Notch1存在。普通分化培养基中Notch1在第5天较第1天明显增加,NF在第5天较第3天明显降低,GFAP与GALC含量在第5天较第1天明显下降。加入ATRA的普通分化培养基中,Notch1在第7天较第1天明显减少,而NF、GFAP、GALC在第7天较第1天明显增加。加入γSI后,Notch1胞内段NICD含量明显降低。 结论 Notch1信号通路抑制神经干细胞分化,ATRA通过抑制Notch1促进神经干细胞的分化。     

全反式视黄酸预防性给药可减轻类风湿关节炎模型大鼠的炎症

目的 探索全反式视黄酸(ATRA)对Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的类风湿关节炎模型(CIA)大鼠关节炎形成期关节组织结构、血清中相关炎性细胞因子表达水平,以及软骨损伤相关蛋白表达水平的影响.方法 将6～8周龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、ATRA各剂量组,给予溶剂对照组和ATRA各剂量组大鼠尾部皮内注射CⅡ和不完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎,空白对照组大鼠以相同方式给予等量生理盐水.自初次免疫第2天起,ATRA各剂量组大鼠腹腔注射不同剂量(0.05、0.5、5 mg/kg)的ATRA油剂,溶剂对照组腹腔注射等体积玉米油,空白对照组腹腔注射等体积生理盐水,每周3次,连续3周.观察ATRA对大鼠关节炎指数(AI)评分、膝踝关节组织病理形态学、血清中相关炎性细胞因子的表达水平及软骨损伤相关蛋白表达水平的影响.结果 自初次免疫第15天起,ATRA各剂量组和溶剂对照组AI值均显著高于空白对照组(P＜0.05),溶剂对照组AI值趋于平稳,ATRA各剂量组AI值呈上升趋势,且低于溶剂对照组(P＜0.05);膝踝关节病理切片可见,ATRA各剂量组和溶剂对照组踝关节结构出现严重紊乱,但组间关节损伤的半定量评分差异无统计学意义(P＞0.05);此外,与溶剂对照组相比,ATRA各剂量组白介素-17A(IL-17A)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌减少(P＜0.05),白介素-10(IL-10)分泌增多(P＜0.05);膝关节中解整链蛋白金属蛋白酶(ADAMTS-4)和基质金属蛋白酶(MMP-3)表达下调(P＜0.05),其余软骨损伤相关蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在胶原诱导关节炎形成期,ATRA可抑制TNF-α、IL-17A等促炎因子的分泌,促进IL-10的分泌,从而减轻CIA大鼠关节炎形成期的炎症反应.说明ATRA在关节炎形成期可延缓疾病的进展,其作用机制可能与纠正Th1/Th2及Th17/Treg失衡有关.     

维甲酸对肝硬化患者肝癌发生的干预作用初步观察

目的观察全反式维甲酸对肝硬化门脉高压行断流术后患者肝癌发生的干预作用。方法41例肝硬化门脉高压手术后患者，随机分为治疗组22例，对照组19例。治疗组口服全反式维甲酸20mg／次，2次／日，连续用药四周以上。进行长期随访，定期检测肝功能、血清γ—GT、AFP，及预后情况。结果实验组疗效好于对照组，但不具有统计学意义（P〉0．05）。服药4周时治疗组γ-GT、AFP水平低于对照组，有显著性差异（P〈0．05）。结论全反式维甲酸有改善肝硬化患者病情的作用，可能对预防肝硬化患者发生肝癌有一定作用。