大鼠脑缺血/再灌注后神经元凋亡及caspase-12 mRNA和蛋白表达的改变

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后caspase-12 mRNA及蛋白的表达,明确内质网信号通路在脑缺血后神经元凋亡调控中的作用。方法60只Wistar♂大鼠随机分为假手术组和缺血组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、RT-PCR技术检测脑缺血/再灌注后各组凋亡细胞数和caspase-12 mRNA及蛋白的表达。结果脑缺血/再灌注后,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数和caspase-12mRNA及蛋白的表达逐渐增高。在脑缺血/再灌注后24h达高峰。与假手术组相比,缺血组在各时间点凋亡细胞数、caspase-12 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论脑缺血/再灌注后神经元凋亡数明显增高,caspase-12 mRNA及蛋白的表达明显升高,提示内质网通路参与了脑缺血/再灌注后神经元凋亡的调控。     

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用四血管阻断法复制大鼠全脑缺血模型,动物随机分为非缺血对照组,缺血对照组,缺血预处理组和阿魏酸钠联合缺血预处理组,采用尼氏染色和TIIJNEL染色法观察阿魏酸钠联合脑缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CAl区神经元数及凋亡细胞效的影响。结果缺血对照组缺血6h大脑皮层及海马CAl区出现量凋亡细胞,缺血12h凋亡细胞逐渐增多,至2天时达高峰,缺血后7天神经元大量丢失;缺血预处理组各时点凋亡细胞数明显低于缺血对照组,缺血后7天神经元无明显丢失;阿魏酸钠联合缺血预处理组各个时点凋亡细胞数较缺血对照组及缺血预处理组均显著减少,缺血后7天神经元无明显丢失。结论阿魏酸钠联合缺血预处理可显著抑制缺血区神经细胞凋亡,加强脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

氨基胍对大鼠局灶性缺血—再灌流后脑内MPO活性的影响

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血后脑组织MPO活性变化规律、与脑缺血－再灌流损伤的关系以及氨基胍（AG）对其影响。方法：用线栓法制备大鼠脑中动脉缺血－再灌流模型，检测缺血3小时后再灌流不同时点脑组织中MPO活性、脑梗死体积及光镜病理学变化。结果：缺血组脑组织有MPO活性升高、中性粒细胞浸润，以再充后48、72小时最为明显，脑梗死体积、神经元变性程度随再灌流时间延长而加重，AG可以明显减轻缺血再灌流12小时后的脑组织中MPO活性、神经元变化，降低脑梗死体积，减轻脑损伤。结论：局灶性缺血脑组织中MPO活性与缺血－再灌流损伤间具有一定的关系，炎症反应是加重脑组织损伤的重要因素，AG可以减轻缺血区炎症反应，具有脑保护作用。     

亚低温对沙土鼠海马CA1区缺血后细胞凋亡的影响

目的 探讨亚低温对沙土鼠短暂性脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的影响。方法 阻断沙土鼠双侧颈总动脉15分钟造成前脑缺血模型。实验动物随机分为假手术组、缺血再灌注组、亚低温治疗组。用光镜观察海马CA1区的神经元死亡过程．采用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡的神经元。结果 脑缺血后．海马CA1区锥体神经元于再灌注后2～7天死亡,再灌注第3天神经元开始凋亡．第5天达高峰。亚低温治疗抑制了缺血后海马CA1区神经元的死亡及细胞凋亡。结论 亚低温治疗对脑缺血后的神经元具有保护作用．并可抑制神经细胞凋亡的发生。     

三七皂苷Rg1、Rb1对大鼠局灶性脑缺血后c-fos、c-jun表达的抑制作用分析

目的探讨三七皂苷Rg1、Rb1对大鼠局灶性脑缺血后c-fos、c-jun的表达与细胞凋亡的关系。方法将雄性Wistar大鼠60只随机分为单纯缺血30min再灌流0、0.5、1、3、6、12、24、48天8个时点组和正常对照组、假手术组,每组6只大鼠。用线栓法造成大鼠局灶性脑梗死模型。用Tunel法检测脑细胞凋亡,用免疫组化法测定转录因子c-fos、c-jun在肝内的表达。结果 Tunel法检测出细胞凋亡在缺血再灌后24～48h达高峰,c-fos在3h达高峰,c-jun持续增加,24h达高峰。三七皂苷Rg1、Rb1显著抑制c-fos、c-jun的表达。结论 c-fos、c-jun的表达与细胞凋亡有关,提示三七皂苷Rg1、Rb1可通过抑制c-fos、c-jun的表达降低脑细胞凋亡。     

急性有机磷中毒患者内皮素和降钙素基因相关肽动态变化及临床意义

目的研究血浆内皮素（ET）与降钙索基因相关肽（CGRP）在急性有机磷中毒（AOPP）患者病程中变化及其临床意义。方法41例AOPP患者（轻度患者不包括在内）分别在中毒后第1d、第2d、第5d及恢复期（12-14d）采集静脉血3ml和2ml，测定ET及CGRP。以50例健康着为对照。结果在41例治愈患者中，ET在中、重两组均于中毒后第1d达高峰，随后缓慢下降。CGRP在中、重两组于第1d降至最低．随后缓慢上升。两者均在恢复期恢复正常。结论（1）ET与CGRP水平与AOPP中毒程度及病情转归相关。（2）ET水平在治疗过程中稳定下降提示预后良好。而持续上升提示预后不良。CGRP水平在治疗过程中稳定上升提示预后良好．而持续下降提示预后不良。     

丹参对大鼠持续局灶性脑缺血后神经元 cyclin G1 蛋白表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白G1(cyclin G1)的蛋白表达与神经细胞凋亡的关系以及丹参对其的影响.方法:采用线栓法大鼠大脑中动脉持续栓塞模型,应用免疫组化和TUNEL染色方法观察缺血组、丹参组和对照组神经元阳性细胞染色数量和分布情况.结果:缺血组cyclin G1蛋白自缺血后1h开始表达增加,缺血后3h达高峰,72h恢复至对照组水平;凋亡细胞自缺血后12h开始表达,缺血后72h达高峰.丹参组仅在缺血12h时间点cyclin G1蛋白表达较缺血组明显增加(P＜0.01);凋亡细胞在缺血后12,24和48h均减少(P＜0.05),缺血后72h明显减少(P＜0.01).相邻切片可见cyclin G1蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同.结论:cyclin G1蛋白在缺血后神经元内表达增加与缺血性神经细胞的凋亡无关,而可能与缺血神经细胞的自我保护适应性和损伤修复有关;丹参可能通过增加cyclin G1的表达,增加神经细胞的缺血损伤适应性,从另一方面发挥其神经细胞的保护作用.     

内皮素、降钙素基因相关肽、内源性类洋地黄物质对HFRS患者心、肾功能的影响

目的：观察内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）、内源性类洋地黄物质（EDLS）对肾综合征出血热（HFRS）患者心、肾功能的影响。方法：用放免法（RIA）检测血浆ET、CGRP、EDLS,全自动生化仪检测血尿素氮（BUN）、肌酸磷酸激酶（CPK）,给12例患者作了多巴胺激发试验。结果：病程各期见血浆ET升高,CGRP降低,ET／CGRP比值显著上升,且ET／CGRP变化曲线与BUN、CPK之变化趋势大体一致。经多巴胺激发后血浆CGRP较基础值升高十余倍,而ET变化不大。血清EDLS于发热期稍有下降,低血压、少尿期则下降明显,重症组较轻症组下降更著。与此同时心电图大多呈现心肌损害的异常波型如心律失常、Q－T间期延长、低电压、Ⅰ°与Ⅱ°房室传导阻滞、ST－T波改变等;而轻症患者较少出现上述异常。结论：HFRS病程中血浆ET升高、CGRP与EDLS减低是引起心、肾功能损害的重要因素之一,表明体液因子的变化也参与HFRS的发病过程。     

心肺复苏期家兔血浆内分泌激素含量的变化

目的：研究血浆内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）、一氧化氮（NO）在心脏骤停缺血及再灌注损伤前后含量的变化规律及意义。方法：取家兔40只，随机分为对照组和实验组，制作心脏骤停缺血及再灌注模型，观察心肺复苏期各时相血浆ET、CGRP、NO、血压及心电变化。结果：在心脏骤停及复苏初始血浆ET未见明显升高（P〉0．05），心肺复苏5min血浆ET含量升高血浆CGRP、NO水平降低（P〈0．05），复苏后0．5h血浆ET明显升高（P〈0．01），复苏后2h血浆ET、CGRP、NO均较复苏前有明显上升（P〈0．05）。结论：在心脏骤停缺血及再灌注损伤期血浆ET变化是机体的应激过程和代偿反应，但持续高浓度对机体重要器官将造成进一步损伤，而CGRP、NO有明显拮抗ET异常升高所致的损伤作用．这可能是一种调节机制并在病理生理过程中起重要作用。     

米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱天冬酶12表达的影响

目的:探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带半胱天冬酶12(Caspase-12)表达的影响.方法:用大脑中动脉栓塞法建立大脑局灶性缺血再灌注模型.36只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(Sham组),缺血再灌注组(IR组)和米诺环素干预组(Minocycline组),每组12只.采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测神经元凋亡,免疫组织化学法检测组织Caspase-12蛋白的表达,反转录-聚合酶反应法(RT-PCR)检测Caspase-12mRNA表达水平.结果:与Sham组相比,IR组缺血半暗带凋亡神经元数增加(P＜0.05),Caspase-12表达增加(P＜0.05);米诺环素处理后显著缓解凋亡细胞数的增加,抑制Caspase-12的表达(P＜0.05),但仍高于Sham组(P＜0.05).结论:抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素缺血再灌注损伤细胞凋亡的机制之一.     

The early signal substances induced by heat stress in brains of mice

To study the effects of early signal substances induced by heat stress in brains of Kunming mice, six-month-old mice (n = 72) were pretreated with heat stress and subsequent ischemia/reperfusion by clipping of their bilateral cervical common arteries for 7 min. According to different treatments, animals were randomly divided into four groups: (1) normal control group; (2) heat stress pretreatment followed by ischemia and reperfusion group (HS/IR); (3) ischemia and reperfusion group (IR); (4) heat stress group (HS). Animals in the later three groups were subdivided into 3 subgroups (1 day, 4 days, 14 days), respectively. The changes in the expression of cAMP response element binding protein (CREB) and calcitonin gene-related peptide (CGRP) were detected by immunohistochemistry and computer image analysis methods. The results showed that compared with the normal group, the expressions of CREB in the hippocampal CA1 region increased significantly in the HS, HS/IR and IR groups (P < 0.05). Compared to the normal group, heat stress could result in CGRP excretion and redistribution in the cerebrum, with the highest level in the 4 d HS/IR group. Following heat stress, CGRP immunoreactivity was observed in varicose fibers and neuronal perikarya within the CA1 region. The results indicate that heat stress can induce CREB expression, which in turn stimulates CGRP secretion.     

急性脑血管病病人血浆内皮素及降钙素基因相关肽测定的临床意义

目的　探讨内皮素 (ET)及降钙素基因相关肽 (CGRP)水平的变化在急性脑血管病发生、发展中的意义。方法　选择发病在 4 8h内的急性脑血管病病人 ,其中脑梗死 4 0例、脑出血 2 2例 ,4 0例健康体检者作为对照组 ,采用放射免疫法测定血浆ET及CGRP。结果　急性脑梗死组ET显著高于对照组 (P <0 0 1) ,CGRP显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而脑出血组ET及CGRP均显著高于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。治疗 3周后 ,脑梗死组轻中型及恢复较好的重型病人ET降至接近正常水平 ,CGRP也升至接近正常水平 ,而重型及恢复较差的中型病人ET虽有下降 ,但仍显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,CGRP基本降至正常。脑出血组ET及CGRP均降至接近正常。结论　急性脑血管病发生、发展及预后与ET、CGRP的变化有关 ,监测ET及CGRP水平的变化对于急性脑血管病特别是脑梗死的病情演变及预后判断有重要意义。     

七叶皂苷钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤ET和CGRP的影响

目的：观察七叶皂苷钠对沙土鼠脑缺血再灌注模型脑组织匀浆中内皮素（ ET）和降钙素基因相关肽（ CGRP）含量的影响。方法：采用结扎双侧颈总动脉缺血10 min再灌注2 h,建立沙土鼠脑缺血再灌注模型。七叶皂苷钠（10,20,40 mg·kg-1）术前3 d开始腹腔注射给药,qd,术后1 h给药1次。再灌注2 h后,放射免疫法测定脑组织ET和CGRP含量。结果：七叶皂苷钠各剂量组可降低脑组织ET水平至28.69~37.03 ng·L-1,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05或0.01）,对脑组织CGRP水平则无明显影响（P〉0.05）。结论：七叶皂苷钠可能通过降低脑组织ET水平,实现对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

核转录因子-κB对鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响及机制

目的测定沙土鼠前脑缺血再灌注后核转录因子-κB(NF-κB)的活化水平、凋亡相关基因Bcl-2、p53的表达、以及神经细胞凋亡水平,探讨N F-κB对神经细胞凋亡的影响及可能机制。方法采用夹闭双侧颈总动脉60m in、再开放24h的方法,建立沙土鼠前脑缺血再灌注模型。以平行视交叉冠状平面为模板、取前脑切片。应用免疫组织化学方法,测定缺血再灌注组、缺血组及正常对照组NF-κB、Bcl-2、p53表达阳性细胞染色灰度值;应用原位缺口末端标记法(TUN EL),观察各组切片中神经细胞凋亡数。结果缺血再灌注后,N F-κB的活化水平明显增强,与缺血组及对照组比较差异显著;N F-κB活化水平与Bcl-2表达呈显著负相关,与p53表达及神经细胞凋亡数目呈显著正相关。结论缺血再灌注后24h,N F-κB的活化促进了神经细胞凋亡的发生;其可能的机制在于NF-κB通过调控凋亡相关基因,进而促进缺血再灌注后神经细胞的凋亡。     

急性有机磷中毒患者血浆内皮素和降钙素基因相关肽水平的变化

目的 通过观测正常人和有机磷中毒患者（AOPP）血浆内皮素（ET）和降钙素基因相关肽（CGRP）水平异常变化,探讨内皮素和CGRP在AOPP发病过程中的变化及意义。方法 用放射免疫法测定血浆内皮素和CGRP水平。结果 轻度、中度、重度中毒组的ET水平与对照组比较有明显增高（P〈0．01）．而CGRP水平与对照组比较有明显降低（P〈0．05或P〈0．01）;而中度、重度组的ET水平较轻度组有明显增高（P〈0．01）．而中度、重度组的CGRP水平较轻度组有明显有明显降低（P〈0．05）;同时发现ET与CGRP水平呈负相关（P〈0．05）。结论 AOPP患者血浆ET和CGRP含量的变化与中毒程度有关,可做为判断预后和中毒程度的指标．同时也为临床抢救提供新的思路。     

缺血预适应对沙土鼠脑缺血再灌注后纹状体多巴胺及其代谢产物的影响

目的　研究缺血预适应对沙士鼠脑缺再灌注后纹状体中多巴胺(DA)及其代谢产物的影响,以探讨其神经保护作用的可能机制。方法　应用沙土鼠脑缺血再灌注模型,脑缺血时间为 5min。96只沙土鼠随机分为假手术组 (S)、缺血组(I)、单纯预适应组 (Po)、缺血预适应组 (Ip)。在再灌注 0(即缺血末)、5、30、60min时,断头、分离纹状体,用高效液相-电化学检测器 (HPLC ECD)分别测定各组沙土鼠纹状体DA、3, 4双羟苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA)的含量。结果　与假手术组相比,短暂缺血组在缺血再灌注期间纹状体中DA、DOPAC和HVA含量均无显著性变化 (P>0 05)。再灌注期间,预适应、缺血再灌注组DA含量均显著低于假手术组,但在再灌注 0min和 30min时,预适应组DA含量及显著高于缺血再灌注组,分别增加了 28% (P<0 01)和 22% (P<0 05)。与假手术组相比,预适应组的DOPAC和HVA含量在再灌注期间均无显著变化 (P>0 05 );缺血再灌注组DOPAC含量在再灌注 5min时有明显增加;HVA含量在再灌注 30min时增加至峰值。结论　缺血预适应能部分抑制沙土鼠脑缺血再灌注期间纹状体DA的降低,显著减少DA氧化代谢产物的产生,从而在脑缺血再灌注损伤中起保护作用。     

[Gly14]-Humanin对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经保护作用及自由基代谢的影响

目的 观察[Gly14]-Humanin（HNG）预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠神经功能保护及自由基代谢的影响。方法 将96只健康♂ SD大鼠随机分为HNG组、生理盐水组、模型组及假手术组,每组24只。采用改良的Zea-longa线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,生理盐水组与假手术组大鼠术前连续5 d尾静脉注射5 μL生理盐水,每日1次;HNG组给予100 nmol·L^-1 HNG 5 μL,而模型组除正常饲养外,术前不接受任何处理。各组大鼠在缺血4.5 h再灌注24 h后进行神经功能缺损评分（NDS）,采用干湿质量法检测脑组织含水量、HE染色观察缺血区病理学改变,检测脑组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性、谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）的含量水平,原位末端标记染色观察凋亡细胞数,并进行统计学分析。结果 与假手术组相比,其余3组大鼠的NDS、脑组织含水量、SOD的活性及GSH含量水平均降低,而MDA含量水平及细胞凋亡数升高,差异均有统计学意义（P<0.01）。与生理盐水组及模型组相比,HNG组大鼠的NDS、脑组织含水量、SOD的活性及GSH含量水平均升高,而MDA含量水平及细胞凋亡数降低,差异均有显著性（P<0.05）。HNG组大鼠凋亡细胞数与GSH含量水平呈正相关（r=0.462,P<0.001）。结论 HNG预处理减轻脑缺血再灌注损伤过程中的脑水肿,增加脑组织抗氧化物质SOD的活性及GSH含量水平,减少神经细胞的凋亡,从而减轻临床神经功能缺损。     

后适应对大鼠脑缺血神经细胞凋亡和内皮型一氧化氮合酶与诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究缺血耐受（后适应和预适应）对脑缺血再灌注神经细胞凋亡及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达的影响。方法：50只雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、预适应组（MCAO＋preconditioning）、后适应组（MCAO＋postconditioning）和尼莫地平组（MCAO＋nimodipine），每组10只大鼠。预适应组大鼠在MCAO前24h，双侧颈总动脉夹闭2min，再灌注20min，循环两次。后适应组大鼠在脑缺血再灌注开始时，再灌注20s，栓塞20s，循环3次。大鼠大脑中动脉阻断1．5h，再灌注24h。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和iNOS、eNOS蛋白表达。结果：与MCAO组比较，后适应组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少，eNOS蛋白表达显著增加，iNOS蛋白表达显著减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：缺血后适应能诱导脑缺血耐受，对脑缺血／再灌注损伤产生保护作用，其保护作用与促进eNOS蛋白的表达，抑制iNOS蛋白的表达有关。