MBP刺激下小鼠DC的定向分化对Th细胞亚型的诱导

目的 探讨不同亚群树突状细胞(DC)对初始型T辅助细胞(ThO)分化的影响.方法 分离实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)易感性BALB/c小鼠脾脏的DC前体细胞,与髓鞘碱性蛋白(MBP)及重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-3共培养,然后取上述培养的DC与单个核细胞(mononuclear cell,MC)培养,测定培养液上清液中干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4水平.结果 DC与MC共培养经IL-4刺激后其上清液中IFN-γ水平[(23.8561±3.2675)pg/mL]较IL-3刺激组[(20.8422±3.5225)pg/mL]及对照组[(20.2845±3.1043)pg/mL]明显增高(P＜0.05);经IL-3刺激后其上清液中IL-4水平[(10.9457±1.9180)pg/mL]较IL-4刺激组[(9.1826±1.5361)pg/mL]及对照组[(9.2046±1.3261)pg/mL]明显增高(P(0.05).结论 不同亚群DC对ThO细胞分化的影响不同,提示可通过调控DC的分化方向调控ThO细胞的分化.     

淫羊藿苷对脂多糖+γ-干扰素复合诱导的BV2小胶质细胞的调节作用

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)复合诱导小鼠小胶质细胞系BV2细胞炎性反应模型的调节作用。方法采用LPS+IFN-γ复合诱导小鼠小胶质细胞系BV2细胞,构建拟神经炎性反应的小胶质细胞活化的体外细胞模型。将传代培养的BV2细胞分为对照组、LPS+IFN-γ模型组(模型组)以及不同浓度ICA 1、2、4、8、16、32、64、128、256μmol/L干预组。采用CCK8法检测各组细胞存活率,采用ELISA法检测各组细胞培养上清中NO水平,采用免疫荧光染色技术观察BV2细胞CD16/32蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组BV2细胞培养上清中NO水平明显高[(16.46±0.73)μmol/L vs.(2.55±0.41)μmol/L;t=16.59,P0.01],与模型组比较,ICA 16、32、64μmol/L干预组其NO表达水平明显降低[分别为(13.76±0.55)、(12.66±0.51)、(10.60±0.46)μmol/L;P0.05,P0.01,P0.01)]。与对照组比较,模型组CD16/32表达增加[(5823.00±109.99)vs.(118.60±89.04);t=48.77,P0.01];与模型组比较,ICA 32、64μmol/L干预组小胶质细胞CD16/32蛋白表达均明显降低(分别为3327.67±126.73、2725.00±139.37,均P0.01)。结论 ICA能够显著抑制活化的小胶质细胞释放NO,抑制小胶质细胞CD16/32表达,对LPS+IFN-γ复合诱导BV2小胶质细胞具有调节作用。     

实验性自身免疫性重症肌无力大鼠T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路的研究

目的 探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞干扰素-γ(IFN-γ)-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)通路的表达水平.方法 将大鼠随机分为EAMG组、正常对照组、完全弗氏佐剂(CFA)对照组.EAMG组大鼠分别于足垫、腹部及背部皮下多点注射丁氏双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白乳剂共1 ml,第4周再次注射上述乳剂;CFA对照组在相应时间、用相同的方法注射等量CFA;初次注射7周后,分离各组大鼠脾脏T淋巴细胞,体外培养48 h后取上清液分别应用酶联免疫吸附试验和Griess试剂法,检测IFN-γ和NO水平.结果 IFN-γ含量EAMG组为(81.68±10.23)pg/ml,正常对照组为(29.20±5.41)pg/ml,CFA对照组为(31.54±6.12)pg/ml;NO含量EAMG组为(23.68±7.13)μmol/L,正常对照组为(9.05±2.11)μmol/L,CFA对照组为(10.21±2.67)μmol/L;EAMG组IFN-γ和NO水平显著高于正常对照组和CFA对照组(均P＜0.01);正常对照组和CFA对照组间差异无统计学意义.结论 EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ和NO分泌明显提高;T淋巴细胞IFN-γ-iNOS-NO通路异常可能与MG发病有关.     

AM1241预处理对脂多糖所致小胶质细胞活化及损伤的影响

目的 探讨大麻素CB2受体激动剂AM1241预处理对联用脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)所致小胶质细胞活化和损伤的影响.方法 选择小鼠小胶质细胞进行实验,细胞分为对照组、AM1241组、LPS/IFN-γ组和AM1241+LPS/IFN-γ组.对照组细胞正常培养;AM1241组细胞经AM1241预处理2 h后正常培养;LPS/IFN-γ组细胞用含1 μg/mL LPS和50 U/mL,IFN-γ的培养基培养24 h;AM1241+LPS/IFN-γ组细胞经AM1241预处理2 h后,更换正常培养基培养2 h,最后用含1 μg/mL LPS和50 U/mL IFN-γ的培养基培养24 h.采用MTT法检测细胞代谢率,NO检测试剂盒检测细胞培养液中NO释放量,倒置相差显微镜观察细胞形态.结果 AM1241+LPS/IFN-γ组细胞代谢率为92.55%±8.37%,明显高于LPS/IFN-γ组(75.04%±3.01%),差异有统计学意义(P<0.05).AM1241+LPS/IFN-γ组细胞培养基中NO浓度为(43.44±5.52) μmol/L,明显低于LPS/IFN-γ组[(90.87±4.28)μmol/L],差异有统计学意义(P<0.05).LPS/IFN-γ组大量细胞结构被破坏,胞体增大,伪足增粗、变短或消失;AM1241+LPS/IFN-γ组少量细胞结构被破坏,胞体稍增大,伪足较明显.结论 大麻素CB2受体激动剂AM1241预处理可减轻联用LPS和IFN-γ所致的小胶质细胞活化和损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of preconditioning with cannabinoid CB2 receptor agonist AM1241 on microglial activation and injury induced by lipopolysaccharide ( LPS) and interferon-γ (IFN-γ). Methods The microglial cells were chosen and assigned to control group,AM1241 treatment group, LPS/IFN-γ inducement group and AM1241+LPS/IFN-γ treatment group. Cells of control group were cultured in normal medium;cells of AM1241 treatment group were preconditioned with AM 1241 for 2 h, and then the medium was changed with normal medium;cells of LPS/IFN-γ inducement group were exposed to the medium containing 1 μg/mL LPS plus 50 U/mL IFN-γ for 24 h;cells of AM1241+LPS/IFN-γ treatment group were preconditioned with AM1241, then the medium were changed with normal medium for 2 h, and at last, cells of this group were exposed to 1 μg/mL LPS plus 50 U/mL IFN-γ for 24 h. Microglial metabolism was assessed by MTT assay;NO release was measured by Reagent Kit;microglial shapes were observed through microscope. Results CB2 receptor agonist preconditioning can up-regulate the microglial CB2 receptor expression markedly;cell metabolism of AM1241+LPS/IFN-γ treatment group (92.55 ±8.37%) was obviously higher than that of LPS/IFN-γ inducement group (75.04±3.01%, P<0.05);AM1241+LPS/IFN-γ treatment group (43.44±5.52 μmol/L) released significantly less NO than LPS/IFN-γ inducement group (90.87±4.28 (μmol/L, P<0.05). Cells of the LPS/IFN-γ inducement group were destroyed seriously with enlarged soma and thickened and shortened pseudopodium;cells of the AM1241+LPS/IFN-γ treatment group were destroyed slightly with slightly enlarged soma and thickened and shortened pseudopodium. Conclusion Preconditioning with cannabinoid CB2 receptor agonist AM1241 reduces microglial activation and injury induced by LPS plus IFN-γ.     

多发性硬化患者血清、脑脊液IL-12、TNF-α、IFN-γ及cICAM-1水平变化

目的 观察多发性硬化(MS)患者血清、脑脊液(CSF)中可溶性细胞间黏附分子(cICAM-1) 、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)的水平,以及经白细胞介素-12(IL-12)刺激后上述因子水平的变化.方法 采用ELISA法检测MS及其他疾病组(OND)患者血清、CSF中TNF-α、IFN-γ及cICAM-1水平并观察IL-12刺激前后TNF-α、IFN-γ及cICAM-1水平变化.结果 MS组CSF及血清中TNF-α水平[(313.8±65.5)pg/mL,(127.9±57.3)pg/mL]较OND组[(21.9±3.3)pg/mL,(30.8±10.1)pg/mL]高,差异有统计学意义(分别为P＜0.01, P＜0.05);MS组CSF及血清中IFN-γ水平[(231.4±57.3)pg/mL,(189.4±69.3)pg/mL]均较OND组[(87.4±21.3)pg/mL,(98.4±23.2)pg/mL]高,差异有统计学意义(分别为P＜0.01, P＜0.05);MS组血清中cICAM-1水平[(105.9±56.2)U/mL]明显高于OND组[(50.9±20.3)U/mL],差异有统计学意义(P＜0.05).经IL-12刺激后MS组上清液中TNF-α[(252.8±69.7)pg/mL]、IFN-γ[(459.8±69.3)pg/mL]及cICAM-1[(207.6±75.4)U/mL]水平较OND组[(132.4±46.3)pg/mL,(221.8±55.6)pg/mL,(87.5±44.2)U/mL]明显增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 TNF-α、IFN-γ及cICAM-1在MS发病机制中起一定作用,IL-12、IFN-γ及cICAM-1间可能存在协同作用.     

急性一氧化碳中毒后迟发性脑病患者血清NO与NOS水平及其临床意义

目的 探讨血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthsae,NOS)的水平及其动态变化与急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)患者病情变化的关系.方法 应用比色法(colorimetric method)动态测定31例DEACMP患者血清NO及NOS水平,并与30例急性一氧化碳中毒(acute carbon monoxide poisoning,ACMP)后未发生迟发脑病患者和30 例正常对照进行比较.结果 DEACMP患者急性期血清NO及NOS水平[(62.67 ± 14.39)μmol/L,(27.68 ± 6.14)U/mL]明显高于正常对照组[(50.18 ± 9.95) μmol/L,(20.88 ± 6.32)U/mL] (均P ＜ 0.05),与ACMP组急性期[(62.00 ± 16.46)μmol/L,(28.13 ± 5.23)U/mL]比较无统计学差异(均P ＞ 0.05);DEACMP患者恢复期血清NO及NOS水平[(54.66 ± 11.73)μmol/L,(21.74 ± 5.88)U/mL]明显低于急性期(均P ＜ 0.05),与ACMP组随访期[(52.79 ± 11.22)μmol/L,(20.64 ± 5.92)U/mL]比较无统计学差异(均P ＞ 0.05).结论 NO-NOS系统参与了DEACMP的发病机制,NO-NOS水平变化与病情变化基本一致.     

急性期Guillain-Barr(e)综合征患者人类肿瘤坏死因子样分子1A表达与T细胞分泌γ-干扰素水平的关系

目的 探讨人类肿瘤坏死因子样分子1A(hTL1A)在急性期Guillain-Barre综合征(GBS)中表达及其与T细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)水平的关系.方法 ①重组人可溶性hTL1A(rhsTL1A)免疫6周龄雌性Bal b/c小鼠,用人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)以免疫荧光染色法鉴定rhsTL1A抗血清.②鉴定rhsTL1A的生物学活性:健康捐赠者外周血单个核细胞(PBMCs)接种于96孔板,设2 μg/ml植物血凝素(PHA)、2 μg/ml PHA+25 ng/ml rhsTL1A、2 μg/ml PHA+100 ng/mlrhsTL1A、2 μg/ml PHA+400 ng/ml rhsTL1A组,~3H-TdR掺入法检测T细胞增殖.③酶联免疫吸附(ELISA)法检测急性期GBS患儿血清中IFN-γ水平.④流式细胞术检测急性期GBS患儿外周血中CD_3~+ hTL1A~+ T/CD_3~+ T细胞的百分比.⑤分离急性期GBS患儿PBMCs,给予2 μg/ml PHA和400ng/ml rhsTL1 A,培养72 h后ELISA法检测IFN-γ水平.结果 ① rhsTL1A抗血清能够识别真核细胞HUVECs表达hTL1A.②T细胞增殖实验结果显示各组刺激指数(SI)均较对照组升高,400 ng/mlrhsTL1A组的SI最大(2.65).③急性期GBS患儿血清IFN9-γ水平[(102.25±22.17)pg/ml]较对照组[(28.75±1.31)pg/ml]显著升高(t=3.309,P<0.05).④急性期GBS患儿外周血中CD_3~+TL1A~+T/CD_3~+ T细胞比例(18.22%±1.83%)较健康对照组(5.17%±0.48%)显著增高(t=6.884,P<0.01).⑤健康对照组和急性期GBS组PBMCs经2 μmg/ml PHA和400 ng/ml rhsTL1A孵育后,IFN-γ分泌量[(43.56±4.41)pg/ml、(180.64±38.39)pg/ml]均显著增高(t=4.523、2.600,P<0.01、0.05),并且急性期GBS组的IFN-γ水平显著高于健康对照组(t=3.545,P<0.05).结论 ①400 ng/ml rhsTL1A能有效促进2μg/ml PHA活化的T细胞增殖,rhsTL1A具有生物学活性.②急性期GBS患儿外周血中活化T细胞表达hTL1A增加,可通过与其受体DR_3相互结合,促进IFN-γ的分泌.     

瞿麦治疗小鼠实验性自身免疫性神经炎的疗效及机制研究

目的观察瞿麦对实验性自身免疫性神经炎(EAN)小鼠临床症状、辅助性T淋巴细胞(Th)亚群、炎性细胞因子的影响,并探讨其改善EAN小鼠临床症状的可能机制。方法利用人工合成的P0180-199肽段混以完全福氏佐剂主动免疫C57BL/6小鼠建立EAN模型。将小鼠随机分为瞿麦治疗组和对照组,利用行为学评分进行疗效评估,流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞水平及Th1/Th2、Th17/Treg比值变化,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和γ干扰素(IFN-γ)水平变化。结果与对照组比较,瞿麦治疗组EAN达峰时间明显延迟,对照组小鼠行为学评分在免疫后第17天达高峰,瞿麦治疗组为免疫后第19天,瞿麦治疗组小鼠达峰时行为学评分低于对照组(3.75±0.88 vs.4.75±0.46,t=2.828,P=0.013)。免疫后第28天瞿麦治疗组小鼠行为学评分仍低于对照组(0.44±0.41 vs.1.06±0.68;t=2.220,P=0.043)。与对照组相比,瞿麦治疗组外周血单个核细胞Th1/Th2比值(1.50±0.62 vs.1.61±0.09)和Th17/Treg细胞比值(0.21±0.04 vs.1.20±0.13)降低(P0.01或P0.05),血清TNF-α[(211.00±10.77)pg/mL vs.(244.29±21.52)pg/mL]、IL-1β[(109.29±4.74)pg/mL vs.(120.29±11.90)pg/mL]和IFN-γ[(707.71±4.23)pg/mL vs.(723.00±15.00)pg/mL]水平明显下降(P0.01或P0.05)。结论瞿麦可显著改善EAN小鼠模型的临床症状,其机制可能与影响Th细胞亚群比例、炎性细胞因子的表达有关,有望成为临床治疗吉兰-巴雷综合征/EAN的新策略。     

地塞米松对MS的IFN-γ-10分泌性T细胞的影响

目的检测多发性硬化(MS)患者外周血单个核细胞在地塞米松(Dex)影响下的IFN-γ和IL-10的分泌细胞水平.方法采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测体外培养的外周血单个核细胞(MNC)在CNS髓鞘素抗原MBP刺激下的地塞米松对照试验,检测IFN-γ和IL-10分泌性T细胞水平,并与其他神经疾病(OND)组及健康对照组的检测结果进行对比.结果显示MS患者IFN-γ分泌细胞水平高于对照组,Dex使MS患者IFN-γ分泌细胞减少,对IL-10分泌细胞无明显影响.结论MS患者存在Th1/Th2细胞因子的失衡,Dex能抑制MSTh1类细胞因子IFN-γ,其治疗作用可能与此有关.     

胚胎神经干细胞对巨噬细胞分泌炎性反应因子的影响

目的探讨小鼠胚胎皮质来源的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性因子和一氧化氮(nitric oxide,NO)表达的影响。方法体外分离、培养NSCs与巨噬细胞。实验分组为NSCs组、小鼠骨髓来源巨噬细胞组(简称为巨噬细胞组)、小鼠骨髓来源巨噬细胞+NSCs非接触型共培养组(简称为非接触型共培养组)和小鼠骨髓来源巨噬细胞+NSCs接触型共培养组(简称为接触型共培养组)。培养24h后添加10ng/mL干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)再孵育24h后收集各组上清液,利用ELISA检测上清液炎性反应因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-10的表达,采用Griess法测量NO的表达水平。结果成功体外分离、培养原代NSCs和巨噬细胞。与巨噬细胞组相比,非接触型共培养组和接触型共培养组巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β明显下降,而IL-10明显增加(均P0.01)。与非接触型共培养组比较,接触型共培养组TNF-α降低〔(65.68±7.15)pg/mL比(90.99±5.57)pg/mL〕,IL-10升高〔(531.38±60.11)pg/mL比(324.32±45.41)pg/mL〕(均P0.01),而IL-1β和NO表达无统计学差异(P0.05)。结论 NSCs能够明显降低活化巨噬细胞NO和促炎性因子TNF-α、IL-1β的释放,增加抗炎性因子IL-10的分泌,减轻炎性反应程度,其机制可能主要通过NSCs分泌可溶性因子起作用。     

对多发性硬化的再认识

中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病特指一组病因不明确,通常认为与免疫相关的CNS炎症性疾病,多发性硬化(MS)是最典型的代表.既往研究认为,该疾病病理上主要累及CNS的白质,由髓鞘蛋白致敏的自身活化的CD4+T细胞导致髓鞘脱失和(或)髓鞘形成细胞的破坏,产生脱髓鞘斑块,而神经元和轴索相对保留.     

Th17/Treg细胞及相关细胞因子在复发缓解型多发性硬化中的作用及机制

目的探讨辅助性T细胞(Th17)、调节性T细胞(Treg)和相关细胞因子在复发缓解型多发性硬化(RRMS)患者发病机制中的作用与机制。方法收集急性期RRMS患者(RRMS组)31例,以神经系统非炎性疾病29例为对照组。RRMS患者入院后给予静脉滴注甲泼尼龙1000 mg/d冲击治疗,后续每3 d剂量减半。对RRMS组患者治疗前和甲泼尼龙治疗2周后(治疗后)分别进行残疾状况拓展性量表(EDSS)评分;采用流式细胞术(FCM)检测RRMS组患者治疗前后及对照组患者外周血Th17(CD4~+IL-17~+)细胞和Treg(CD4~+FOXP3~+)细胞百分率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RRMS组患者治疗前后及对照组患者外周血血浆中白细胞介素(IL)-17A、IL-23、IL-6、IL-10、IL-35和转化生长因子-β(TGF-β)水平;采用Spearman相关分析对RRMS组患者治疗前外周血Th17细胞数量与IL-17A、IL-23、IL-35、IL-6、IL-10及TGF-β水平进行相关性分析。结果 (1)RRMS组治疗前EDSS评分高于治疗后[分别(6.31±1.54)分vs.(4.02±0.68)分,t=0.75,P0.05];(2)FCM分析结果显示,与对照组[(3.12±1.27)%]比较,RRMS组患者治疗前Th17细胞百分率[(15.24±2.54)%]明显升高(P0.05),而对照组Treg细胞百分率[(35.04±4.21)%]明显高于RRMS组治疗前[(11.12±3.13)%,P0.05];与对照组(0.10±0.02)相比,RRMS组治疗前Th17/Treg(1.51±0.62)也明显升高(P0.01);与RRMS组治疗前[(11.12±3.13)%]比较,甲泼尼龙治疗后Treg细胞比例[(23.14±2.86)%]明显升高(P0.01);与RRMS组治疗前Th17细胞百分率[(15.24±2.54)%]相比,甲泼尼龙治疗后Th17细胞百分率[(4.24±1.14)%]明显降低(t=0.88,P0.05);与RRMS组治疗前(1.51±0.62)相比,甲泼尼龙治疗后Th17/Treg比值(0.19±0.07)降低(t=0.95,P0.01);(3)ELISA法检测结果显示,RRMS组治疗前IL-17A[分别(17.26±1.21)pg/mL vs.(3.23±0.81)pg/mL,t=0.72,P0.05]、IL-23[(分别(64.38±7.51)pg/mL vs.(21.14±1.82)pg/mL,t=0.75,P0.05]、IL-6[分别(70.14±8.17)pg/mL vs.(7.28±0.75)pg/mL,t=0.95,P0.01]和IL-10水平[分别(21.12±2.74)pg/mL vs(2.39±0.34)pg/mL,t=0.91,P0.01]均明显高于对照组,而IL-35[分别(0.31±0.06)pg/mL vs.(1.55±0.16)pg/mL,t=-0.89,P0.01]和TGF-β水平[分别(5.13±0.34)pg vs.(18.25±0.74)pg/mL,t=-0.83,P0.05]显著低于对照组;与RRMS组治疗前比较,治疗后IL-17A[分别(17.26±1.21)pg/mL vs.(4.23±0.90)pg/mL,t=0.82,P0.05]、IL-23[分别(64.38±7.51)pg/mL vs.(29.73±2.51)pg/mL,t=0.77,P0.05]和IL-6[分别(70.14±8.17)vs.(15.23±1.86),t=0.89,P0.01]水平明显降低,IL-35(分别(0.31±0.06)pg vs.(1.41±0.18)pg,t=-0.88,P0.01)和TGF-β水平[分别(5.13±0.34)pg vs.(16.91±0.59)pg,t=-0.72,P0.05]明显升高;(4)RRMS组患者Th17细胞与IL-17A(r=0.89,P0.01)、IL-23(r=0.71,P0.05)和IL-6(r=0.83,P0.05)水平呈正相关,与IL-35和TGF-β水平呈负相关[分别r=-0.82,P0.01;r=-0.74,P0.05]。结论 RRMS的发生可能与Th17细胞上调,Treg细胞下调,Th17/Treg表达失衡,相关细胞因子IL-17A、 IL-23、IL-6水平升高,IL-35和TGF-β水平降低有着密切关系。     

补体C3d-p28对阿尔茨海默病DNA疫苗的免疫增强作用

目的探讨补体C3d-p28作为分子佐剂,在阿尔茨海默病DNA疫苗基因免疫中的作用。方法在第1、8、22、43、64、85、106、127天,将重组质粒p(Aβ3-10)10、p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3和pcDNA3.1(+)肌肉注射于APP/PS1双转基因鼠后腿股四头肌内。疫苗接种前、自第2次注射开始每次接种后7天取鼠眶静脉血共8次,以ELISA法检测抗Aβ抗体的滴度和分型;第8次(最后1次)眶静脉取血后进行6d的Morris水迷宫实验,通过定位航行和空间探索实验评估小鼠空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后处死小鼠,以ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)水平,免疫组化染色法检测小鼠脑内Aβ斑的表达。结果 p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗Aβ抗体水平高于p(Aβ3-10)10组[(55.03±8.93)μg/mLvs.(27.32±7.69)μg/mL,t=-4.455,P0.05],p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗体类型主要是IgG1型[(50.64±6.96)μg/mL],明显高于p(Aβ3-10)10组[(14.15±3.16)μg/mL,P0.05]。与p(Aβ3-10)10组比较,p(Aβ3-10)10-C3dp28.3组Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期变短、穿越平台次数和穿越平台所在象限停留的时间比例明显增多(均P0.05);脾细胞培养上清液中IL-4水平增高[(110.22±18.12)pg/mL vs.(170.12±22.16)pg/mL,P0.05]、IFN-γ水平减低[(800.12±80.11)pg/mL vs.(640.12±70.53)pg/mL,F=6.152,P0.05];脑内沉积的Aβ斑块明显减少(P0.05)。结论补体C3d-p28分子佐剂使p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3抗Aβ抗体的产生增加、Th2型免疫反应增强,转基因鼠空间学习记忆能力提高。     

轻度认知障碍和阿尔茨海默病患者血清中兴奋性氨基酸的含量

目的 研究遗忘型轻度认知障碍(amnestic mild cognitive impairment,aMCI)及阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者血清中兴奋性氨基酸(EAAs)含量的变化,探讨EAAs在二者发病中的作用.方法 使用高效液相法对30例aMCI、32例AD患者以及34名健康对照者血清中EAAs[谷氨酸、天门冬氨酸(Asp)]及EAAs N-甲基-D-Asp(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的协同激动剂甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸含量进行测定和比较.结果 aMCI组血清中的谷氨酸[(39.6±22.1)μmol/L]和丙氨酸[(282.5±71.3)μmol/L]含量高于健康对照组[(30.0±11.6)μmol/L,P=0.044;(240.7±46.3)μmol/L,P=0.007].而AD组血清中谷氨酸[(42.2±21.8)μmol/L]、甘氨酸[(464.2±142.6)μmol/L]明显高于健康对照组[P=0.010;(395.6±88.8)μmol/L,P=0.010];但aMCI组和AD组之间差异无统计学意义.AD组血清中Asp(P=0.011)和谷氨酸(P=0.017)的含量与MMSE得分呈正相关,轻度AD患者血清中这两种氨基酸含量[(42.1±21.3)、(55.0±29.0)μmol/L]要高于中重度AD患者[(25.4±9.2)μmol/L,P=0.023;(34.6±11.1)μmol/L,P=0.036].结论 EAAs可能参与AD的发病,并且与AD的严重程度存在一定的相关性;aMCI患者也存在着EAAs代谢的紊乱,提示其可能和AD有着类似的发病机制.     

氟西汀对大鼠星形胶质细胞分泌的胶质源性神经营养因子的影响

目的 探讨氟西汀对大鼠星形胶质细胞分泌的胶质源性神经营养因子(GDNF)的影响.方法 以氟西汀干预体外培养的大鼠海马星形胶质细胞,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度氟西汀对细胞活力的影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养液GDNF浓度及Real-time PCR法检测GDNFmRNA的表达.结果 (1)氟西汀浓度超过35 μmol/L浓度时,可降低细胞活性,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(2)10 μmol/L氟西汀干预星形胶质细胞不同时间后,48 h组细胞培养液GDNF浓度[(68±13)fg/L]高于0 h组[(32±11)fg/L]、6 h组[(34±12)fg/L]、12 h组[(41±17)fg/L]、24 h组[(45±13)fg/L],差异均有统计学意义(P均<0.01);(3)不同浓度氟西汀作用星形胶质细胞48 h后,10 μmol/L浓度组的细胞培养液GDNF浓度[(64±17)fg/L]高于0 μmol/L[(39±15)fg/L]和1 μmoVL浓度组[(39±18)fg/L],差异均有统计学意义(P均<0.05);(4)氟西汀作用星形胶质细胞48 h后,撤离氟西汀24 h后星形胶质细胞仍明显分泌GDNF,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(5)不同浓度氟西汀作用星形胶质细胞24 h后,10 μmol/L和20 μmol/L浓度组细胞GDNFmRNA表达量[分别为(0.008 1±0.001 1)和(0.006 3±0.000 3)]高于0 μmol/L、1 μmol/L及5 μmol/L浓度组[分别为(0.003 1±0.000 7)、(0.003 9±0.000 3)和(0.004 1±0.000 2)],差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 氟西汀可能通过促进星形胶质细胞GDNF的分泌来发挥其神经保护作用.     

首次躁狂发作未服药患者血清尿酸水平的研究

目的:探讨首次躁狂发作未用药患者血清尿酸(UA)水平及其临床影响因素。方法:检测105例首次躁狂发作未用药患者(患者组)和105名健康对照者(对照组)血清UA水平,同时采用杨氏躁狂量表(YMRS)评估躁狂症状严重程度。结果:患者组血清UA水平[(371.17±103.63)μmol/L]显著高于对照组[(301.10±78.40)μmol/L](P0.01);高尿酸血症(HUA)发生率(35.2%,37例)显著高于对照组(8.5%,9例)(P0.01);患者组男性[(399.20±99.35)μmol/L]和对照组男性[(329.62±76.34)μmol/L]之间、患者组女性[(333.80±100.71)μmol/L]与对照组女性[(263.06±64.23)μmol/L]之间血清UA水平差异有统计学意义(均P0.01)。相关分析显示血清UA水平与YMRS评分无相关(P0.05)。结论:首次躁狂发作未用药患者血清UA水平升高,但其与躁狂病情无关。     

首发精神分裂症患者血液中神经元特异性烯醇化酶和髓鞘碱性蛋白的改变

目的 通过测定首发精神分裂症患者髓鞘碱性蛋白(MBP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE),探讨是否有神经系统损伤。方法 选择88例首发精神分裂症患者(患者组)和30例对照(对照组)测定血液中MBP和NSE,采用双抗体夹心酶标免疫分析法检测。并在入组第1天及第8周后分别评定阳性和阴性症状量表(PANSS)量表。结果 患者组MBP[(7.9±4.5)μg/L]和NSE[(19.4±6.9)μg/L]含量明显高于对照组[(4.3±0.4)μg/L,(8.0±2.8)μg/L],t:12.70,P<0.01;t=7.20,P<0.01。患者组MBP和NSE与PANSS总分减分率呈负相关(r=-0.236,P=0.025:r=-0.298,P=0.005)。结论 精神分裂症患者可能存在神经系统损伤,且受损程度可能与疗效有关。     

地塞米松对MS的IFN-γ及IL-10分泌性T细胞的影响

目的　检测多发性硬化 (MS)患者外周血单个核细胞在地塞米松 (Dex)影响下的 IFN- γ和 IL- 10的分泌细胞水平。方法　采用酶联免疫斑点技术 (EL ISPOT)检测体外培养的外周血单个核细胞 (MNC)在 CNS髓鞘素抗原 MBP刺激下的地塞米松对照试验 ,检测 IFN -γ和 IL - 10分泌性 T细胞水平 ,并与其他神经疾病 (OND)组及健康对照组的检测结果进行对比。结果　显示 MS患者 IFN- γ分泌细胞水平高于对照组 ,Dex使 MS患者 IFN- γ分泌细胞减少 ,对 IL- 10分泌细胞无明显影响。结论　MS患者存在 Th1/ Th2细胞因子的失衡 ,Dex能抑制 MS Th1类细胞因子 IFN- γ,其治疗作用可能与此有关。     

急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD137的表达特点及其临床意义

目的探讨急性动脉粥样硬化性脑梗死(atherosclerotic cerebral infarction,ACI)患者外周血肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor super family,TNFRSF)成员CD137的表达特点及其临床意义。方法入选发病72h以内住院患者共46例,其中ACI组27例,无症状性颈动脉狭窄(asymptomatic carotid stenosis,ACS)组19例,另选择同期健康体检者20名为正常对照组(normal control,NC)。采用流式细胞术和流式细胞磁珠微阵列法(CBA)检测各组观察对象外周血CD4~+T细胞及其CD4~+CD28-T细胞亚群表面CD137的表达和血浆可溶性CD137水平。结果 ACI组外周血CD4~+CD28-T细胞比例[(14.13±4.42)%]、CD4~+CD28-T细胞CD137的表达[(2.60±2.14)%]、血浆sCD137[(3.43±2.48)pg/mL]水平显著高于ACS组[(9.03±4.60)%、(0.70±0.66)%、(2.07±0.814)pg/mL]和NC组[(8.08±3.30)%、(0.45±0.31)%、(1.26±0.70)pg/mL](P0.01),且ACI组CD4~+T细胞的CD137表达及血浆sCD137水平与NIHSS评分(P0.05)和梗死体积(P0.01)呈正相关。结论 ACI患者发病早期CD4~+CD28-T细胞、CD4~+T细胞及其CD4~+CD28-T细胞表面CD137、血浆sCD137水平升高,且CD4~+T细胞的CD137表达及血浆sCD137水平与NIHSS评分呈正相关,提示其可能作为评估脑梗死临床严重程度的外周生物学标志。