17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜问质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-立群雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48h；此后选用10^-10mol／L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blotting）检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182，780（10μmol／L）对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达，并呈剂量和时间依赖性，于10^-10mol／L作用48h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182，780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt／β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

雌激素活化LIM矿化蛋白-1的mRNA表达与雌激素受体的关系

目的探讨雌激素受体信号转导与LIM矿化蛋白-1（LIM mineralization protein-1,LMP-1）基因转录的关系。方法将卵巢切除5个月后小鼠的骨髓间充质干细胞经7d成骨诱导后,用10μmol／L的ICI-182,780（ICI）和／或100nmol／L 17β-雌二醇（17β-E2）处理24h,通过RT—PCR法扩增LMP-1的mRNA,测定扩增条带的吸光度值,并与β-aetin的吸光度值相比,比值来表示产物mRNA的相对含量。结果ICI处理组LMP-1的mRNA表达明显低于17β-E2处理组（P〈0．01）。结论雌激素刺激问充质于细胞LMP-1的mRNA表达是雌激素受体依赖性的。     

子宫内膜异位症中上皮型钙粘蛋白表达及其意义

目的探讨上皮型钙粘蛋白（E-cad）与子宫内膜异位症发病的关系。方法采用双抗体夹心ABC—ELISA法检测30例子宫内膜异位症（内异症组）患者血清E—cad的表达量,免疫组化法检测异位内膜、在位内膜E-cad的表达量,分别与同期30例卵巢成熟性畸胎瘤患者（对照组）血清、子宫内膜进行比较。结果内异症组血清E—cad表达量显著高于对照组（P〈0．001）;内异症组在位及异位内膜E—cad表达均低于对照组内膜（P=0．004）,尤以异位内膜表达量更低。结论Bcad在内异症患者血清、在位和异位内膜中的异常表达,可能与内异症的发生、发展有关。     

orexin-1受体抑制剂通过Wnt通路促进骨髓间充质干 细胞的成骨分化

目的研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-5mol/L、10-6mol/L质量浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,于成骨诱导第5天免疫印迹法和实时荧光定量PCR法观察Wnt/β-catenin信号通路关键靶点蛋白Dickkopf-1、Gsk3β、β-catenin以及基因Gsk3β、β-catenin mRNA表达,以观察Wnt信号通路对orexin-1受体抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。结果 10~(-5)mol/L、10~(-6)mol/L的orexin-1受体抑制剂处理BMSCs5天后,Dickkopf-1、β-catenin和GSK3β蛋白表达升高,β-catenin和GSK3βmRNA表达升高。结论 orexin-1受体抑制剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化的作用可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

β-catenin蛋白在子宫内膜腺癌的表达及临床意义的Meta分析

目的系统评价β-catenin蛋白表达水平与子宫内膜腺癌及其临床病理特征的关系。方法检索国内外公开发表的关于子宫内膜腺癌组织中β-catenin蛋白的表达量及其与临床病理特征关系的文献,按照纳入和排除标准筛选文献,应用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入11篇文献,共1 051例受试者。Meta分析结果显示:子宫内膜腺癌组中β-catenin蛋白的表达显著高于健康对照组,差异有显著性(P=0.001);子宫内膜腺癌组中β-catenin蛋白的表达显著高于子宫内膜良性病变组,差异有显著性(P<0.05);β-catenin蛋白表达量与子宫内膜腺癌的临床分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.000 4)及肌层浸润深度(P=0.04)有关,与分化程度(P=0.76)无关。结论β-catenin在子宫内膜腺癌中呈高表达,提示其可能与子宫内膜腺癌发生密切相关。     

促性腺激素释放激素受体在子宫内膜异位症患者在位与不同部位异位子宫内膜的表达及其临床意义

本研究采用免疫组织化学的方法比较促性腺激素释放激素受体(GnRHR)在子宫内膜异位症(内异症)患者的在位内膜和不同部位的异位内膜的表达,进一步探讨GnRHR在内异症发病机制中的作用,为更有效地运用促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)制剂治疗内异症提供参考。一、材料与方法1.研究对象及标本选择:选择2000年3月至2003年12月在浙江大学医学院附属妇产科医院行手术治疗的内异症患者40例,收集其在位内膜和不同部位的异位内膜组织标本共83份。按发生内异的不同部位分组:I组(在位内膜组)25份;II组(卵巢内异组)23份;III组(阴道直肠隔内异组)11…     

姜黄素拮抗瘦素损伤小鼠足细胞的实验研究

目的：探讨瘦素对小鼠足细胞的损伤效应,及姜黄素拮抗这一效应的可能.方法：小鼠足细胞分为四组,分别为空白对照组,瘦素刺激组,姜黄素加瘦素组,及姜黄素对照组.mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白检测采用免疫印迹法.结果：瘦素（15 ng/ml）能显著抑制足细胞nephrin,podocin,podoplanin,podocalyxin表达,与对照组比较,mRNA表达的抑制率分别为31％、28％、33％及29％;蛋白质表达的抑制率分别为26％、30％、24％及32％,P均＜0.05.加入姜黄素（5μmol/L）后,上述足细胞标志蛋白均被上调,与瘦素组比较,mRNA表达分别上调1.25、1.15、1.34及1.20倍;蛋白质表达分别上调1.15、1.31、1.14及1.32,P均＜0.05.瘦素（15 ng/ml）能显著活化Wnt/β-catenin信号通路,与对照组比较,Wnt1、Wnt2b和Wnt6及其下游蛋白β-catenin的mRNA表达分别上调1.54、1.29、1.52及1.25倍,P均＜0.05.β-catenin的蛋白磷酸化水平抑制率为17％,P＜0.05.加入姜黄素（5μmol/L）后,上述信号通路分子均被抑制,与瘦素组比较,Wnt1、Wnt2b和Wnt6及β-catenin的mRNA表达抑制率分别为12％、12％、22％及10％,P＜均0.05.磷酸化的β-catenin上调1.13倍.结论：瘦素能通过Wnt/β-catenin信号通路损伤足细胞,而姜黄素能逆转这一反应.     

印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中的异常表达及其意义

目的研究印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症(内异症)患者子宫内膜的表达及临床意义。方法选择2011年1月至2012年8月至北京大学深圳医院生殖中心行试管助孕并已行宫腹腔镜检查的患者,其中证实为内异症的患者31例作为实验组,因男方因素不孕、女方因素完全正常的妇女33例作为对照组,收集分泌中期子宫内膜组织,采用实时定量聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定两组子宫内膜组织H19和Igf2 mRNA表达水平。结果 H19和Igf2 mRNA在内异症患者子宫内膜组织中的平均表达量分别为49.909±46.970和8.747±5.451,在对照组中的平均表达量分别为19.728±23.990和0.513±0.973,H19和Igf2在内异症患者与正常女性子宫内膜组织中的表达差异均具有统计学意义(P=0.006和0.00)。结论印迹基因H19和Igf2可能与内异症性不孕有关。     

17-β雌二醇对人成骨样细胞系MG 63 Cbfa 1表达的影响

目的 研究17-β雌二醇对人成骨肉瘤MG 63细胞株Cbfa 1表达的影响,了解雌激素预防骨质疏松的机制中有无Cbfa 1 的参加.方法 17-β雌二醇10-mol/L、10-8mol/L、10-10 mol/L浓度干预人成骨肉瘤MG 63细胞株,24、48 h后抽提RNA、蛋白,半定量RT-PCR,Westem blot检测Cbfa 1 mRNA、蛋白表达的变化.结果 人成骨肉瘤MG 63细胞中有Cbfa 1 mRNA和蛋白的表达.17-β雌二醇10-6mol/L、10-8 mol/ L、10-10 mol/L浓度作用24或48 h,对MG 63细胞的Cbfa 1 mRNA和蛋白表达无影响.结论 人成骨肉瘤MG 63细胞株中有Cbfa 1表达,17-β雌二醇对MG 63细胞Cbfa 1基因的表达无影响.     

GCM1通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路改善绝经后骨质疏松症

目的 探究GCM1对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化及矿化的影响。方法 实验设置control组、BMP2诱导组、BMP2+ov-NC组、MP2+ov-GCM1组、BMP2+sh-NC组、BMP2+sh-GCM1组,BMP2用于诱导细胞成骨分化。通过碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测GCM1对MC3T3-E1成骨分化及矿化的影响;通过Western blot检测成骨分化相关蛋白及Wnt3a/β-catenin蛋白的表达变化。结果 GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达。过表达GCM1能够促进BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化,而抑制GCM1表达则抑制了BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化。此外,过表达GCM1增加了Wnt3a/β-catenin蛋白表达,激活Wnt3a/β-catenin信号通路,抑制GCM1表达则与上述结果相反。结论 GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达,过表达GCM1则可能通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路、促进MC3T3-E1成骨分化及矿化,进而改善绝经后骨质疏松症。     

子宫内膜异位症患者在位内膜Stathmin的表达研究

目的探讨Stathmin在子宫内膜异位症在位内膜及正常妇女子宫内膜中的表达。方法收集子宫内膜异位症患者在位子宫内膜36例和对照妇女的子宫内膜组织20例。通过免疫组化和免疫蛋白印迹法(Western-blotting)检测Stathmin的表达。结果 Stathmin在子宫内膜的腺体和基质中均有表达,且在增殖期和分泌期的表达无显著性差异(P>0.05)。Stathmin在子宫内膜异位症在位内膜的表达明显高于在对照组妇女子宫内膜中的表达(P<0.05)。结论 Stathmin在子宫内膜异位症在位内膜的表达增高,可能参与子宫内膜异位症的发病。     

17β-雌二醇联合5-氮胞苷上调前列腺癌22RV1细胞p75NTR表达并促进凋亡的研究

目的 探讨17β-雌二醇(E2)联合DNA去甲基化试剂5-氮胞苷(5-AzaC)对雄激素非依赖性前列腺癌22RV1细胞生长抑制和凋亡的影响及作用机制. 方法 应用17β-E2和/或5-AzaC 处理前列腺癌22RV1细胞,并检测细胞生长抑制率、凋亡率以及雌激素受体2(ESR2)和p75神经生长因子受体(p75NTR)的表达情况. 结果 17β-E2或5-AzaC呈时间及浓度依赖性抑制22RV1细胞增殖,17β-E2和5-AzaC 48 h IC50分别是0.2 μmol/L和4.0 μmol/L.17β-E2(0.2 μmol/L)+5-AzaC(4.0 μmol/L)对22RV1细胞的增殖抑制及凋亡表现出协同作用,17β-E2或5-AzaC均能上调ESR2和p75NTR的mRNA及蛋白的表达,且联合应用时效果更明显. 结论 联合应用 17β-E2和5-AzaC上调ESR2和p75NTR的表达可能是雄激素非依赖性前列腺癌治疗的一个潜在的治疗策略.     

缺氧对肝癌细胞内β-链蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧对肝癌细胞内β-链蛋白(β-catenin)表达的影响及机制.方法 分别利用100 μmol/L氯化钴和肝癌原位移植+肝动脉结扎建立肝癌细胞体内、外缺氧模型.实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、免疫荧光和免疫组织化学法分析缺氧对PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2和MHCC97 4种肝癌细胞内β-catenin mRNA和蛋白表达的影响.结果 缺氧不影响肝癌细胞β-catenin mRNA表达,但增加HepG2和PLC/PRF/5细胞内β-catenin总蛋白水平(＞2.3倍),促进MHCC97及Hep3B细胞β-catenin的细胞内易位(胞质和/或胞核,＞1.7倍).这与缺氧诱导的肝癌细胞内糖原合成酶3β下调,β-catenin蛋白降解抑制有关.结论 缺氧促进肝癌细胞内β-catenin蛋白表达和细胞内转移,增加细胞恶性潜能.     

子宫内膜异位症和腺肌症患者子宫内膜雌激素受体的时空表达

目的　研究子宫内膜异位症和子宫腺肌症子宫内膜各种细胞中雌激素α和 β受体的表达模式 ,为探索子宫内膜异位症和子宫腺肌症的致病机理提供依据。　方法　 10 8例患有内膜异位症、腺肌症、两症并发组和对照组子宫内膜组织 ,常规光镜下按Noyes分期标准行形态学分期。采用免疫组织化学的方法观察不同月经周期时相子宫内膜腺上皮、基质和血管内皮细胞中雌激素受体ERα和ERβ的表达。　 结果　与对照组相比 ,ERα信号强度在各组相应的细胞类型、相应的时相无显著差异 ,但子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞中显示阳性信号的细胞比例增大 ,且腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号。子宫内膜异位症和腺肌症的血管内皮细胞中ERα阳性细胞数显著增加。ERβ在各组的表达模式与对照组相比无明显差异 ,甚至略呈下降趋势。　结论　人子宫内膜中ERα为雌激素效应的主要受体亚型 ,表达ERα的腺上皮、基质和血管内皮细胞数量的增多以及腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号可能与这两种疾病的发病密切相关 ;ERβ并不参与这一过程。     

孕激素对子宫内膜腺癌细胞RL95-2中骨桥蛋白表达的影响

目的探讨孕酮对人子宫内膜细胞RL95-2骨桥蛋白(OPN)表达的调节作用及其临床意义。方法利用免疫荧光方法观察OPN在RL95-2细胞的表达定位。将不同浓度的孕酮(1×10-9 mol/L、1×10-7 mol/L、1×10-5 mol/L)处理RL95-2细胞24h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫印迹检测(Western blot)技术检测各组OPN mRNA和蛋白的表达水平,以不加孕酮的实验组为空白对照组。结果 OPN定位表达于RL95-2细胞膜表面;与对照组相比,高浓度孕酮(1×10-5 mol/L)组的OPN mRNA和蛋白的表达显著增加(P0.05),低浓度孕酮(1×10-9 mol/L)组则显著抑制OPN mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论在一定浓度范围内,孕酮可双向调节子宫内膜表面骨桥蛋白的表达。     

17β雌二醇对人皮肤成纤维细胞胶原和弹性蛋白合成的影响

目的探讨不同浓度17β雌二醇（17β-estrogen,17β-E2）在不同时间点对体外培养的人皮肤成纤维细胞（Human skin fibroblast,h SFB）合成胶原及弹性蛋白的影响。方法体外培养hSFB,分别加入不同浓度的17β-E2(10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11mol/L),继续培养24 h、48 h、72 h,在不同时间点分别提取相应的RNA,RT-PCR检测经17β-E2处理后的hSFB的Ⅰ、Ⅲ型前胶原及原弹性蛋白mRNA的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,17β-E2处理组较空白对照组前胶原及原弹性蛋白表达水平在24 h没有变化,48 h时明显上调,72 h时呈现下降;在48 h时,17β-E2对前胶原与原弹性蛋白的影响,10^-10 mol/L组上调作用较其他浓度组明显;在48 h时,同一浓度17β-E2对前胶原蛋白的促进作用较原弹性蛋白明显,尤其是对Ⅲ型的促进作用更强。结论 17β-E2对胶原及弹性蛋白的合成有一定的促进作用,不同时间、不同浓度对其影响不同,在10^-10 mol/l、48 h时作用最强。     

黄芪多糖对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响

目的 分析黄芪多糖（AP）对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的成骨分化作用机制。 方法 MC3T3-E1细胞经成骨诱导后分别加入浓度为0、5、10 μmol/L 的AP进行干预,持续1、3、5、7 d后使用MTT法观察AP对细胞增殖的影响;干预14 d后,通过ALP及茜素红染色观察AP的促成骨分化作用;成骨相关mRNA表达水平经实时荧光定量PCR测定,其中包括Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素（osteocalcin）、I型胶原蛋白（collagen I）;并使用Western blot法检测β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达水平,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况。 结果 加入5、10 μmol/L 的AP后可有效促进MC3T3-E1增殖,且药物浓度越高效果越明显;同时AP亦可提高ALP、茜素红染色的阳性率,以及β-catenin、osteocalcin、Runx2、collagen I mRNA的表达水平（P<0.05）;Western blot结果也显示AP可有效促进β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达（P<0.05）,以及促进β-catenin入核。 结论 AP可促进MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化,机制可能涉及促进相关成骨标志物表达以及β-catenin入核。     

子宫内膜异位症患者雌、孕激素受体和Bcl-2、Bax表达的研究

目的探讨子宫内膜异位症雌孕激素受体、细胞凋亡相关基因的表达。方法用免疫组织化学方法及图像分析技术检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）、Bcl相关的X蛋白（Bax）在子宫内膜异位症患者异位及在位内膜细胞中的表达情况。结果异位内膜ER、PR、Bcl-2表达明显低于在位内膜（P〈0．05）,异位内膜ER、Bcl-2表达明显高于正常内膜（P〈0．05）,异位内膜Bax表达明显低于正常内膜（P〈0．05）,Bax在异位内膜与在位内膜表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论无论是增殖期还是分泌期,在位内膜ER、PR表达均高于异位内膜及正常内膜,在位内膜细胞持续低水平增殖。在位内膜及异位内膜中Bcl-2和Bax的表达均与子宫内膜周期性改变无关,不受卵巢激素调节。     

雌二醇介导SIRT1-FOXO3a对成骨细胞自噬的作用和机制研究

目的 探讨雌激素是否能通过增强SIRTl的活性进而对成骨细胞及其通路产生作用。方法 17β-雌二醇（17β-E2）作用于hFOB1.19成骨细胞24 h,应用荧光自噬检测试剂盒（MDC）检测成骨细胞自噬情况;应用蛋白免疫印迹技术检测自噬相关蛋白LC3的表达含量;应用蛋白免疫印迹技术检测AMPK、磷酸化的AMPK、SIRTl蛋白活性的影响;在17β-E2环境中,增强或抑制SIRTl的活性,通过电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和关键蛋白质的改变;应用免疫印迹技术及实时定量PCR检测17β-E2/SIRT1/AMPK/FOXO3a对细胞自噬相关蛋白BCL-2、Bnip3、mTOR及凋亡相关蛋白caspase-3的影响。结果 17β-E2（10-8 mmol/L,10-6 mmol/L）增加成骨细胞的自噬,成骨细胞内LC3II蛋白活性增加;随着17β-E2浓度的增加,SIRTl蛋白表达量增加,且活性增强;17β-E2增加磷酸化AMPK的水平,且AMPK可以增加成骨细胞内SIRTl的活性;SIRTl激动剂SRT1720及抑制剂Ex527可以干预17β-E2/SIRTl对成骨细胞细胞凋亡的负调节作用;应用激光共聚焦显微镜和透视电镜观察成骨细胞内17β-E2/SIRTl调节LC3蛋白,并发现SRT1720可增强成骨细胞内的双层膜结构的线粒体自噬小体的数量;介导SIRTl蛋白,17β-E2可以增加自噬相关蛋白Bcl-2和Bnip3的表达,减低mTOR的活性,增加FOXO3a活性。结论 SIRT1在17β-E2介导的成骨细胞自噬作用中起到关键作用;17β-E2可能通过AMPK/SIRT1/FOXO3a/mTOR通路介导成骨细胞自噬。     

雌激素对人皮肤成纤维细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨雌激素(17β-estrogen,17β-E2)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFB)增殖与迁移的影响.方法 分离培养HSFB,传至第4代;(1)四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度17β-E2和17β-E2+雌激素β受体(estrogen β receptor,ER-β)拮抗剂ICI-182780干预24、48、72、96h后HSFB增殖活力;(2)流式细胞仪检测17β-E2和ICI-182780对HSFB周期分布的影响;(3)建立细胞划痕(Scratch-Wound)模型,24、48、72 h后观察HSFB在不同浓度17β-E2和17β-E2+ ICI-182780干预下的迁移情况.结果 (1)MTT显示,48、72、96 h时,10-8、10-9、10-10、10-11、10-12mol/L浓度范围内,均以10-10 mol/L 17β-E2促增殖效应最强;并且10-10mol/L 17β-E2组(A组)细胞增殖效应强于ICI-182780+ 10-10 mol/L 17β-E2组(B组)与空白组(C组,P＜0.01);(2)A组处于S期的细胞比例多于B、C组(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例则少于B、C组(P＜0.01);(3)48 h时,10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L浓度范围内,10-8 mol/L 17β-E2促细胞迁移效应最强(P＜0.01);24、48、72 h时,10-8 mol/L 17β-E2组(D组)细胞迁移距离均大于10-8 mol/L 17β-E2+ ICI-182780组(E组)及空白组(F组)(P＜0.01).结论 10-10 mol/L浓度雌激素促HSFB增殖效应最强;10-8 mol/L浓度促HSFB迁移效应最强;ICI-182780有效减弱上述2种效应.