利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离小麦胚乳醇溶蛋白的研究

为了研究洗脱时间、柱温、流速、洗脱梯度、蛋白提取方法等色谱条件对反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离小麦胚乳醇溶蛋白的影响,对上述条件分别进行了对比试验.结果表明,利用RP-HPLC分离小麦胚乳醇溶蛋白的最佳实验方法为:通过0.05 mol/L NaCl→H2O→70%乙醇三步提取醇溶蛋白,在1.0mL/min的流速、60℃的柱温条件下,对上样醇溶蛋白进行洗脱,洗脱梯度为流动相B的体积比在55 min内由21%升至48%(V/V),最后通过210 nm紫外光检测洗脱组分的吸收值.重复三次的检验结果证实,本试验方法稳定可靠.     

反相高效液相色谱法测定西番莲中的有机酸

采用Waters Atlantis C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,以2％甲醇-98％ 0.01 mol/L K2HPO4溶液（用H3PO4调节pH2.8）作为流动相,流速为0.6 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为10 μL,检测波长为210 nm,建立高效液相色谱同时分析西番莲中10种有机酸的方法。结果表明：该方法相对标准偏差为0.22％~4.00％,平均回收率在88.0％~109.6％,各种酸的线性相关系数r＞0.999 2,检测限为0.001~0.22 μg/mL;采用外标法定量。在紫果和黄果西番莲中检测到7种有机酸,其含量趋势呈现为柠檬酸＞L-苹果酸＞L-乳酸＞琥珀酸＞L-抗坏血酸＞酒石酸＞富马酸。该方法具有灵敏度高、测试组分多、速度快等优点,适用于西番莲中多种有机酸的测定。     

采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸

采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究了杨梅果实中有机酸的成分和含量,在C18柱(4.6mmID×250mm,4μm)上,采用紫外检测器(波长214 nm)进行检测,其流动相为0.04 mol/L的KH2PO4-H3PO4缓冲液,pH2.4,流速0.8mL/min,柱温35℃。检测所得7种有机酸标准曲线相关系数达0.999 0以上,平均回收率在88%～101%之间;变异系数RSD<3.06%。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定香蕉中吡虫啉和高效氯氰菊酯

建立了香蕉中吡虫啉和高效氯氰菊酯多残留分析方法。样品经1%乙酸乙腈提取,N-丙基乙二胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)净化,以甲醇和2mmol/L乙酸铵水溶液为流动相,进行梯度洗脱分离,采用电喷雾正离子源模式(ESI+),多反应监测(MRM)采集数据,基质匹配外标法定量。吡虫啉和高效氯氰菊酯在0.001～0.1mg/L范围内线性关系良好,相关系数r> 0.9991,方法检出限(LOD)为1 pg,定量限(LOQ)为0.01 mg/kg。在0.01、0.05、0.10 mg/kg3个添加水平下,吡虫啉和高效氯氰菊酯在香蕉中的回收率为84.91%～104.78%,相对标准偏差(RSD)为1.23%～9.69%。该法操作简单、灵敏度高、重现性好,适用于香蕉中吡虫啉和高效氯氰菊酯的残留量测定。     

不同HMW麦谷蛋白亚基小麦品质对密度反应差异性的研究

本试验以具有不同ＨＭＷ麦谷蛋白亚基的四种组合类型小麦品种（系）为试材，分析了稀、密两种种植条件下的粉质仪和沉降值的变化。结果表明，（１）密植对具有７＋９、５＋１０谱带材料的稳定时间影响最大，７＋８、２＋１２、７＋８、５＋１０谱带的材料次之，７＋９、２＋１２谱带材料最小。密植可以使一些材料稳定时间增加，尤以具有７＋９、５＋１０和７＋８、２＋１２谱带两类材料为甚；（２）密植条件下沉降值呈下降趋势，具有     

小麦高分子量麦谷蛋白基因沉默研究进展

高分子量麦谷蛋白是小麦种子贮藏蛋白的重要组成部分,其数量和质量对小麦面筋含量及面粉烘烤品质有直接影响.因此,小麦高分子量麦谷蛋白基因的表达与沉默备受关注.本文主要介绍了高分子量麦谷蛋白基因沉默材料的发现及其沉默机理的研究现状,认为小麦高分子量麦谷蛋白基因沉默包括两种情况即在一个基因座位上所有编码基因均不表达和只有一个编码基因不表达.第一种情况可能是染色体部分缺失的结果,有时也被认为是由于调控元件发生了突变;而基因突变即DNA调控序列和/或编码区的微小缺失及其他变化则可能是第二种情况发生的机制.本文还简要介绍了离子束生物技术、转基因技术、化学诱变、组织培养等可以用于创制基因沉默材料的技术.     

多重PCR结合变性高效液相色谱技术转基因小麦检测方法的建立

为了满足对小麦转基因成分高通量快速检测的需要,建立了一种新的转基因小麦检测方法。通过对不同稀释倍数的转基因小麦品系B7361中的内源基因Wx012、外源基因ubiquitin、bar、nos、uidA进行单一PCR和多重PCR扩增,应用琼脂糖凝胶和变性高效液相色谱（DHPLC,denaturing high performance liquid chromatography）技术分离PCR 产物,进行灵敏度分析,并用非转基因小麦京花1号籽粒、大豆籽粒、麦片、转基因小麦B7361加工成的油炸制品为样本,对建立的检测体系进行检测。结果表明,样品经多重PCR扩增和DHPLC分离后,能够得到准确可靠的转基因图谱。与凝胶电泳方法比较,本研究所建立的多重PCRDHPLC具有更高的检测通量和灵敏度(能够同时检测5个基因,灵敏度达到1 ng·μL^-1),能够满足小麦转基因成分的高通量快速检测的要求,同时也为转基因产品检测提供了一种新的技术手段。     

基质固相分散-反相高效液相色谱测定茶叶中苯脲类除草剂残留

建立了基质固相分散萃取(matrix solid phase dispersion,MSPD)-反相高效液相色谱(reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测利谷隆、灭草隆、敌草隆和绿麦隆4种苯脲类除草剂的新方法。茶叶样品与C18填料混合碾磨后与中性氧化铝一起装柱,二氯甲烷为淋洗剂,使样品的萃取与净化一步完成。讨论了MSPD法和色谱分析的各种影响因素,最佳实验条件下灭草隆在0.01～10.00 mg/L范围内线性关系良好,检测限为5μg/L;绿麦隆、敌草隆和利谷隆在0.025～10.00 mg/L范围内线性关系良好,检测限为10μg/L。4种除草剂在茶叶样品中的回收率在83.5%～100.4%之间,相对标准偏差小于7.1%。该方法简单、快速、干扰少、回收率高,符合茶叶中除草剂残留分析要求。     

小麦磨粉品质的高分子量麦谷蛋白亚基评分系统研究

为了给优质小麦选育和栽培提供一定的参考，选用100个春小麦品种测定了其高分子量麦谷蛋白亚基（HMW—GS）以厦出粉率、降落数值、面粉白度和面粉黄度等4项磨粉品质，通过数量化理论及统计学鉴评方法研究了HMW—GS与小麦磨粉品质的关系，得到了4个多元回归方程（决定系数均在0．97以上），能准确预测4项小麦磨粉品质；建立了针对不同小麦磨粉品质的HMW-GS评分系统。总体来看，1、2^＊、7、5＋10亚基和10亚基对小麦磨粉品质而言，属于优质亚基。但对不同的品质指标，各亚基的贡献不尽相同：10亚基有利于出粉率的提高；1亚基除了能改善面粉黄度外，还可以提高降落数值；5＋10亚基是公认的优质亚基，2＋10、2＋12亚基是公认的劣质亚基，但对于面粉白度而言，2＋10和2＋12亚基评分较高，而5＋10亚基评分反而最低。因此，不能仪根据某一项指标对亚基进行评分。     

小麦谷蛋白亚基及其基因多态性研究进展

本文主要介绍了小麦高、低分子量谷蛋白亚基及其控制基因的研究进展情况,包括各种不同的研究技术以及相应的研究结果。除了传统的SDS-PAGE技术以外,分子标记技术以及免疫化学技术都在该领域中得到日益广泛的应用,并取得了关于亚基及基因的多态性和快速鉴别方法等一系列重要的研究进展。     

麦谷蛋白亚基对小麦品质特性的影响及其遗传转化

麦谷蛋白是小麦籽粒贮藏蛋白的重要组成部分,其亚基类型及组成与小麦品质密切相关,为了更进一步了解其与小麦蛋白质品质特性的关系,综合论述了小麦谷蛋白亚基的分类、结构及其不同亚基与小麦品质的关系,并对利用基因工程遗传转化方法改变小麦谷蛋白亚基组成从而提高小麦加工品质的现状及应用前景进行了讨论。     

从小麦谷蛋白大聚合体与HMW GS的关系

为了探索小麦谷蛋白大聚合体对小麦品质的影响,采用SDSPAGE方法,分析了166个来自不同地区的小麦品种高分子量谷蛋白亚基（HMWGS）的组成,并对不同亚基与小麦谷蛋白大聚合体（GMP）的关系进行了分析。结果表明,所用小麦材料HMWGS的变异类型丰富,但亚基组合仍以N/7+9/2+12为主。HMWGS对面粉GMP含量有显著影响,GluA1位点亚基1>N,GluB1位点亚基13+16>7+9或7+8或14+15或17+18,GluD1位点亚基5+10>2+12,其他亚基差异不显著。说明含亚基1、13+16和5+10的品种能形成较多的GMP。HMWGS评分与面粉GMP含量的相关系数为0.288,达到极显著水平。     

小麦谷蛋白聚合作用对增施氮肥的反应

通过小区试验,利用不同类型小麦品种研究了谷蛋白聚合作用对增施氮肥的反应。结果表明,N肥不仅能提高参试品种的籽粒产量、蛋白质含量、沉淀值、干(湿)面筋含量,而且能提高面粉中不溶性谷蛋白大聚合体(GMP)、可溶性谷蛋白聚合体(SGP)含量以及谷蛋白总量在总蛋白质中的比例((GMP SGP)／Pr),改善谷蛋白聚合体的粒度分布。并且与基肥一次性施N(NB处理)相比,分期施N(基肥N 挑旗期追N,即NB l处理)作用较大;不同类型小麦品种的谷蛋白聚合作用对增施N肥的反应差异很大。     

离子束介导大豆DNA转入普通小麦后代的麦谷蛋白和醇溶蛋白分析

为了研究离子束介导大豆DNA转入普通小麦的效果,应用SDS-PAGE和A-PAGE电泳分析了离子注入介导大豆DNA转入普通小麦后代中高蛋白含量植株的麦谷蛋白和醇溶蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明,与对照相比有8个高蛋白含量植株的HMW-GS谱带数目发生了变化或着色增强。A-PAGE电泳结果表明,与对照相比有9个高蛋白含量植株的醇溶蛋白谱带数目及着色强度发生了变化。说明离子束介导大豆DNA转入普通小麦后代中的高蛋白含量植株在醇溶蛋白和麦谷蛋白基因位点上可能出现了变异。     

小麦谷蛋白聚合体含量和粒度相对分布及其与品质性状的关系

为了给小麦早代品质筛选提供科学有效的生化指标,以黄淮麦区57个小麦品种为材料,对其籽粒品质性状、谷蛋白总聚合体(TGP)含量、大聚合体(GMP)含量及谷蛋白聚合体粒度相对分布(GMP/TGP)等进行了分析.结果表明:(1)供试品种的籽粒硬度、全麦粉蛋白质含量变化幅度较小,SDS-沉淀值变化幅度较大,按这三个品质指标可将57个品种聚为三大美;(2)供试品种的TGP和GMP含量变异较大,其变化幅度分别为3.63%～8.38%和0.95%～3.63%,变异系数分别为19.68%和26.94%,且多数强筋粉小麦品种的TGP和GMP含量都大于弱筋粉小麦品种;(3)对品质性状与生化性状的相关和回归分析结果表明,全麦粉GMP含量(X3)、蛋白质含量(X1)是影响其SDS-沉淀值(Y1)的关键生化性状,其回归方程为:Y1=6.396X1 6.430X3-47.276;全麦粉TGP含量(X2)是影响小麦籽粒硬度(Y2)的主要生化性状,其回归方程为:Y2=2.050X2 42.947.这些研究结果可为黄准麦区小麦品质育种的亲本选配及后代材料品质筛选提供一些重要信息.     

甘肃小麦品种(系)HMW-GS遗传变异分析

为了了解甘肃省小麦品种HMW-GS的遗传变异和组成，为甘肃优质专用小麦品种筛选和品种改良提供依据,采用SDS-PAGE法，分析了254份甘肃省小麦材料(育成品种(系)和农家品种)Glu-1位点的HMW-GS变异，共检测到22种HMW-GS变异，Glu-A1位点3种，Glu-B1位点11种，Glu-D1位点8种。其中110个育成品种(系)的15种HMW-GS有27种亚基组合类型。Glu-A1位点有2种亚基，47．3％的品种该位点具有优质亚基；Glu-B1位点有7种亚基，76．4％的品种具优质亚基；Glu-D1位点有6种亚基，32．7％的品种具优质亚基。14．5％的品种(n：15)Glu-1位点具优质亚基。144份农家品种的18种HMW-GS共有29种亚基组合形式，Glu-A1位点有3种亚基,Glu-B1位点有9种亚基，Glu-D1位点有6种亚基，无优质亚基组合。     

两种浊化剂在小麦谷蛋白大聚合体测定中的有效性

为比较两种浊化剂5-磺基水杨酸-无水硫酸钠（SSA-SS）和三氟乙酸（TCA）在比浊法测定小麦谷蛋白大聚合体（GMP）含量中的有效性,选用黄淮冬麦区有代表性的4个强筋小麦品种和4个中弱筋小麦品种组配的杂种F2代面粉为材料,采用1％DTT的50％正丙醇溶液提取GMP,分别用浊化剂SSA-SS和TCA浊化,再用酶标仪（波长540nm）连续（10～90min）测定不同基因型小麦的GMP提取液的吸光值。结果表明：（1）以SSA—SS为浊化剂时,牛血清蛋白浓度与吸光值的直线回归关系极其密切（r=0．9980）;以TCA为浊化剂时,牛血清蛋白浓度与吸光值的直线回归关系较差。（2）以SSA-SS为浊化荆时,各种基因型小麦GMP提取液的吸光值在30min内具有较好的稳定性;以TCA为浊化剂时,各种基因型小麦GMP提取液的吸光值随时间不断增加。说明比浊法测定小麦GMP含量时,以SSA-SS为浊化剂,加样振荡后10～30min内测定的结果最为稳定。     

杂交小麦F1与F2品质组配规律及高分子量谷蛋白亚基组成规律的研究初报

为了探明杂交小麦F1与F2代品质的组配规律及高分子量谷蛋白亚基组成规律,选取不同品质类型的14个亲本材料,以8种设计,按照强筋×强筋、强筋×中筋、强筋×弱筋、中筋×强筋、中筋×中筋、弱筋×强筋、弱筋×中筋、弱筋×弱筋等方式组配不同杂交组合,分别测定其中8种F2代的品质以及亲本、F1代、F2代的高分子量谷蛋白亚基组成,结果表明,以优质和含有优质亚基的品种作母本对杂交小麦F2品质改良有重要作用,同时在亚基中出现了5 10亚基,其对品质有重要的影响。F1代籽粒中出现了高分子量谷蛋白亚基共显现象和不完全表达或缺失现象。经观察发现,缺失的带基本都是父本的亚基带。     

高效液相色谱法测定鸡肉中的氟喹诺酮类药物

建立了鸡肉中4种喹诺酮类药物的HPLC-FLD检测方法。鸡肉样品经过无水硫酸钠脱水后用酸化乙腈提取，用乙腈饱和的正己烷除去杂质，下层乙腈液经氮气吹干后用流动相定容，再加入乙腈饱和的正己烷，混匀后在高速离心机上离心，下层液体用于高效液相色谱分析。采用Xbridge C18柱分离，以乙腈-磷酸二氢钠为流动相等度洗脱，荧光检测器检测，外标法定量。4种喹诺酮类药物标准曲线的线性回归系数均在0.999以上，线性范围为0.2～50 ug/L，环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星检出限为1.0 ug/kg，达氟沙星检出限为0.