NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

IκB-α基因转染HCC9204细胞对NF-κB和MMP-9表达的影响

目的观察高转移性人肝癌细胞系HCC9204转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;通过基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移能力。结果HCC9204细胞转染pcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB蛋白表达下降,同时伴随MMP-9mRNA表达水平和细胞侵袭、转移能力的明显下降。结论NF-κB活性被抑制后引起细胞侵袭、转移能力的下降可能是由于MMP-9表达下降所致。     

表皮生长因子介导的NF-κB促进胰腺癌细胞MMP-9表达及侵袭的实验研究

目的 观察表皮生长因子(EGF)对胰腺癌细胞增殖、黏附及侵袭力的影响及其对核因子-κB(NF-κB)和细胞基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,探讨EGF促进胰腺癌侵袭的相关机理.方法 通过细胞增殖、黏附及侵袭实验,观察在EGF影响下胰腺癌细胞黏附、增殖及侵袭能力变化;通过RT-PCR、MMPs明胶酶谱分析、Western blot及EMSA,检测胰腺癌细胞的MMP-2和MMP-9 mRNA及其蛋白表达以及NF-κB活性变化;并观察NF-κB抑制物吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对EGF诱导的胰腺癌细胞NF-κB活性、MMP-9 mRNA及其蛋白表达以及肿瘤细胞侵袭力的变化.结果 EGF能够增强胰腺癌细胞的侵袭能力,具有剂量依赖性(P＜0.05).EGF对胰腺癌细胞的黏附力及增殖力无明显影响.EGF处理后,肿瘤细胞的MMP-9蛋白和mRNA表达明显升高,EGF浓度为50 ng/ml时,肿瘤细胞的MMP-9表达最强,但对MMP-2蛋白和mRNA的表达则无影响.随着EGF浓度的增加,NF-κB活性增强,具有浓度依赖性(P＜0.05).与EGF单独处理相比,经PDTC和EGF共同处理后的胰腺癌细胞NF-κB活性与MMP-9蛋白和mRNA表达均降低;PDTC和EGF共同处理后的胰腺癌细胞侵袭力较EGF单独处理和对照均减弱(P＜0.05).结论 EGF通过激活NF-κB的活性,诱导MMP-9表达,促进胰腺癌细胞的侵袭,而这一过程可以被PDTC抑制.     

9型重组腺相关病毒介导抗核转录因子-κB核酶基因体外转染大鼠心肌细胞及对核转录因子-κB活性的影响

目的 观察9型重组腺相关病毒(rAAV9)介导抗核转录因子-κB(NF-κB)核酶基因(rAAV9-ECFP-R65)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对NF-κB活性的影响.方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数(MOI)1×106v.g./cell转染H9C2细胞,在倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性表达,采用流式细胞仪检测转染效率.Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP-R65对H9C2细胞增殖影响.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、rAAV9-EGFP-R65及PDTC处理H9C2细胞,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性.结果 转染后第1天EGFP开始表达,表达强度随着时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,此时流式细胞仪检测转染率为(32.27±3.19)%.Alamar Blue法检测表明转染组细胞增殖末受影响.常态下H9C2细胞NF-κB有一定活性,TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,而rAAV9-EGFP-R65、PDTC抑制NF-κB活性.结论 rAAV9-ECFP-R65能够有效地转染H9C2细胞,对细胞增殖无明显抑制,并能显著抑制H9C2细胞NF-κB活性.     

表皮生长因子促进胰腺癌细胞侵袭和转移的实验研究

目的 探讨表皮生长因子（epidermal growthfactor，EGF）促进胰腺癌细胞侵袭和转移的分子机理。方法 EGF对胰腺癌细胞系NOR—P1的增殖、黏附及侵袭能力的影响分别用WST-1细胞增殖实验、细胞黏附实验和Transwell体外侵袭实验检测；MMP-9和MMP-2的活性及表达分别用明胶酶谱分析和Western印迹、RT—PCR检测；NF-κB活性用凝胶电泳迁移实验检测。结果 EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力，但对胰腺癌细胞的黏附力及增殖并无明显影响；EGF明显上调胰腺癌细胞的NF-κB和MMP-9的活性及表达，但对MMP-2活性及表达无影响；NF-κB抑制物四氢化吡咯二硫代氨基甲酸盐（PDTC）能够明显抑制EGF所诱导的NF-κB活性，同时也抑制EGF所诱导的MMP-9表达及胰腺癌细胞的侵袭力。结论 EGF通过活化NF-κB促进胰腺癌细胞的MMP-9的表达和侵袭力，采用NF-κB抑制剂PDTC阻断NF-κB通路能够降低胰腺癌细胞的侵袭力。     

通过核转录因子-κB诱导基质金属蛋白酶的表皮生长因子对胆管癌细胞侵袭的影响

目的 探讨表皮生长因子通过核转录因子（NF）-κB诱导基质金属蛋白酶促进胆管癌细胞侵袭的机制。方法 检测胆管癌细胞株HuCCT1在表皮生长因子（EGF）同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况；采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot分析方法，检测基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9在不同EGF浓度下的基因和蛋白表达；采用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）检测NF-κB在不同EGF浓度下的活性。结果 随着EGF浓度的增加，胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加，具有明显的浓度依赖性。而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响。EGF明显上调HuCCT1细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平，MMP-2不受影响。EGF增强NF-κB的活性；PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力。结论 EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力，其增强的侵袭力可能是通过NF-κB信号传导路径，激活MMP-9而实现的。     

槲皮素对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响

目的探讨槲皮素对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)炎症因子和基质金属蛋白酶的表达的影响及可能机制。方法选用人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)为研究对象,TNF-α诱导MH7A细胞,用不同浓度的槲皮素干预,RT-PCR法检测对IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的变化的影响,Western blot法检测对NF-κB的影响。结果槲皮素浓度依赖性地降低TNF-α诱导的MH7A细胞IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达,对TNF-α诱导的MH7A细胞NF-κB的磷酸化有明显的抑制作用。结论槲皮素可有效地减轻类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子及基质金属蛋白酶的表达,其机制可能和抑制NF-κB的表达相关,槲皮素是治疗类风湿性关节炎的潜在有效药物。     

大黄素对胆管癌QBC939细胞生长及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的影响

目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用及其对磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的影响.方法 用大黄素作为干预因素,时间效应组以含大黄素的培养液分别培养QBC939细胞不同时间,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中B淋巴细胞/白血病-2 (bcl-2) mRNA表达,Western blot检测细胞中bcl-2、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、核因子(NF)-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白质的表达.结果 10、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为17.3％、28.6％、46.5％和66.4％ (P ＜0.05),bcl-2、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR表达明显下降,Akt表达无变化.结论 大黄素抑制QBC939细胞增殖,可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号转导途径.     

一氧化氮增加人软骨肉瘤细胞表达基质金属蛋白酶-13的机制研究

目的研究一氧化氮(NO)是否通过MAPK和NF-κB通路增加基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达,探讨骨关节炎(OA)发病机制中NO的作用。方法购买并传代人软骨肉瘤细胞(SW1353),用不同浓度的NO供体MAHMA-NONOate刺激后检测MMP-13以及MAPK和NF-κB通路中的蛋白激酶的表达水平。用不同浓度的MAPK和NF-κB通路中的蛋白激酶的抑制剂预先处理细胞后,再用MAHMA-NONOate刺激细胞,再次检测MMP-13以及MAPK和NF-κB通路中的蛋白激酶的表达水平。结果 MAHMA-NONOate增加了细胞MMP-13的表达水平,同时也增加了MAPK和NF-κB通路中的蛋白激酶的活性水平,MAPK家族中的JNK的抑制剂SP600125可以抑制MMP-13的表达水平,NF-κB的抑制剂SN5O也可以抑制MMP-13的表达水平。结论 NO可以通过MAPK家族中的JNK和NF-κB通路增加MMP-13的表达。     

FKBP5对前列腺癌C4-2细胞生长的影响及机制的初步研究

目的:观察抑制FK506结合蛋白5(FKBP5)基因表达和应用FKBP5的抑制剂FK506对前列腺癌细胞生长的影响,并初步探究其作用机制。方法:利用shRNA和FK506处理前列腺癌C4-2细胞,然后用MTT法检测细胞生长变化情况;通过Western blot检测处理过的C4-2细胞中NF-κB信号通路中相关蛋白的变化。结果:利用shRNA和FK506抑制C4-2细胞中的FKBP5的表达后,MTT法显示实验组细胞的增殖活性明显低于对照组(P0.05),FK506对细胞生长有明显的抑制作用,并且这种作用具有浓度依赖性。在C4-2细胞系中,降表达FKBP5后发现IκBα表达量增高,磷酸化的NF-κB表达升高,并且胞浆的NF-κB含量增多而细胞核中的NF-κB明显减少。结论:抑制FKBP5的表达可以抑制前列腺癌C4-2细胞系的生长,FKBP5的抑制剂FK506同样可以抑制细胞生长,FKBP5对细胞生长的影响可能是通过调节NF-κB信号通路来实现的,而FKBP5可能是去势抵抗性前列腺癌的一个新的治疗靶点。     

肿瘤坏死因子-α对肿瘤抑制基因RECK在HepG2细胞中表达的调节作用

目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α对人肝癌细胞HepG2肿瘤抑制基因RECK表达的影响，检测核转录因子（NF）-κB在RECK基因表达的调控中的作用。方法 将培养的细胞分为3组，A组用4种浓度的TNF-α（1、5、50、100μg／L）作用人肝癌细胞HepG2细胞株6h，B组用浓度为50μg／L的TNF-α分别作用HepG2细胞1、6、12、24h，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RECK mRNA的表达；C组将NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡硌烷（PDTC，10mol／L）与TNF-α（50μg／L）同时作用以及TNF-α（50μg／L）单独作用于HepG2细胞6h，凝胶滞留电泳实验（EMSA）DNA结合反应检测NF-κB出的活性，RT-PCR和Western blot分别检测RECK基因mRNA和蛋白的表达。明胶酶谱试验检测细胞MMP-9的活性。结果HepG2细胞中RECK基因无表达。TNF-α作用后RECK的表达显著增高，作用呈时间和剂量依赖关系（P〈0．01），TNF-α能激活NF-κB并能显著抑制HepG2细胞MMP-9的活性（P〈0．01），而PDTC能显著的抑制这种作用（P〈0．01）。结论TNF-α能上调RECK基因在肝癌细胞系HepG2中的表达同时抑制细胞MMP-9的活性。而NF-κB可能参与了这一过程。     

胃癌细胞中&beta|肾上腺能受体与NF-κB通路及其下游侵袭相关因子的关系

目的：探讨胃癌细胞中β肾上腺能受体（β-ARs）与NF-κB通路及下游侵袭相关因子的关系。 方法：分别用不同浓度普萘洛尔（10，30，100 μmol/L）和异丙肾上腺素（50，100，200 μmol/L）作用胃癌BGC-823和SGC-7901细胞株24 h后，用RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）,环氧化酶2（COX-2）,基质金属蛋白酶2（MMP-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达；用Western blot检测上述因子及NF-κB p65蛋白表达。 结果：与对照细胞比较，普萘洛尔呈浓度依赖性降低两种胃癌细胞VEGF，COX-2，MMP-2，MMP-9的mRNA表达，而异丙肾上腺素则呈浓度依赖性升高上述因子的mRNA表达（均P<0.05）；与对照组细胞比较，普萘洛尔作用后，两种胃癌细胞上述因子及NF-κB p65蛋白的表达明显下调，而异丙肾上腺素作用后则呈反向变化，且作用均呈浓度依赖性（均P<0.05）。 结论：β-ARs与胃癌侵袭、转移密切相关，且其作用机制可能与增加NF-κB通路活性及其下游侵袭相关分子的表达有关。     

丹参酮IIA对胃癌细胞的抑制作用及其与NF-κB信号通路的关系

目的：探讨丹参酮IIA（tanshinone IIA）体外对人胃癌SGC7901细胞的作用及其对NF-κB信号通路的影响。 方法：不同浓度丹参酮IIA（0.5、1、2、4 μg/mL）作用SGC7901细胞不同时间（24、48、72 h）后,用MTT法检测细胞增殖情况。丹参酮IIA（2 μg/mL）作用SGC7901细胞48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测NF-κB p65亚单位、IκB-α、磷酸化IκB-α、IKK-α/β、磷酸化IKK-α/β的水平;ELISA法检测p65亚单位的DNA结合活性。 结果：MTT结果显示,丹参酮IIA（1、2、4 μg/mL）明显抑制SGC7901细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性（均P<0.05）;凋亡分析显示,丹参酮IIA处理组细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.05）;NF-κB信号通路相关分子检测显示,与对照组比较,丹参酮IIA处理组细胞p65、IKK-β及其磷酸化蛋白水平明显下降（均P<0.05）,IκB-α水平无明显改变（P>0.05）,但其磷酸化蛋白水平明显降低（P<0.05）,而IKK-α及其磷酸化蛋白表达水平表达变化均不明显（均P>0.05）;NF-κB亚单位p65的DNA结合活性明显下降。 结论：丹参酮IIA可抑制人胃癌SGC7901细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是降低NF-κB信号通路的活性有关。     

核因子-κB参与人骨髓间充质干细胞的增殖上调研究

目的探讨核因子(NF)-κB在人类骨髓间充质干细胞增殖调节中的作用。方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞后:①蛋白免疫印迹法(Western-blot)观察脂多糖(LPS)作用下NF-κB活性亚型p65及其活性形式磷酸化p65的表达水平随时间变化的情况;②Western-blot法观察NF-κB活性抑制剂PDTC对磷酸化p65表达水平影响;③Western-blot法检测PDTC与LPS单独及共同作用下,细胞增殖标志物增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的变化;④MTT法检测PDTC与LPS作用下细胞增殖水平的变化。结果 LPS可显著上调p65及其磷酸化状态的表达水平,上调作用可被PDTC部分地抑制;NF-κB上调后可提高细胞增殖蛋白PCNA的表达水平,并促进细胞增殖。结论初步证实了NF-κB参与人骨髓间充质干细胞增殖的调节。     

通过核转录因子-кB诱导基质金属蛋白酶的表皮生长因子对胆管癌细胞侵袭的影响

目的探讨表皮生长因子通过核转录因子(NF)-кB诱导基质金属蛋白酶促进胆管癌细胞侵袭的机制。方法检测胆管癌细胞株HuCCT1在表皮生长因子(EGF)同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析方法,检测基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9在不同EGF浓度下的基因和蛋白表达；采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测NF-кB在不同EGF浓度下的活性。结果随着EGF浓度的增加,胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加,具有明显的浓度依赖性。而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响。EGF明显上调HuCCT1细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平,MMP-2不受影响。EGF增强NF-кB的活性；PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力。结论EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力,其增强的侵袭力可能是通过NF-кB信号传导路径,激活MMP-9而实现的。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

葛根素通过NF-κB通路抑制地塞米松诱导的 hFOB1. 19人成骨细胞凋亡

目的 探索葛根素抑制地塞米松诱导的hFOB1.19人成骨细胞凋亡机制的实验研究。方法 MTS检测葛根素对 hFOB1. 19细胞增殖活性影响,免疫荧光检测DEX诱导hFOB1. 19细胞凋亡及葛根素抑制DEX诱导的细胞凋亡的细胞核改变。Western blot检测p-p65、p-IκB的蛋白表达情况。Realtime PCR检测Caspase-3、Caspase-9的基因表达情况。ELISA检测加人NF-kB抑制PDTC后对凋亡的影响。结果 10-8 M和10-9M葛根素明显增加细胞的增殖活性,10-5 M和10-6 M浓度的 DEX作用72h后诱导细胞凋亡,加人10-8M葛根素后细胞凋亡受到抑制。Western blot结果显示,加人DEX后,p-NF-κB4,p- IkB的表达上调,DEX和PUE共同处理后,DEX诱导的NF-κB和IkB的磷酸化受到抑制。Realtime PCR显示DEX处理后 caspase3、caspase8的mRNA基因表达明上调,而DEX和PUE共同作用后,caspase3、caspase8的mRNA基因表达下调。ELISA 显示PUE抑制DEX诱导的细胞凋亡。PDTC、DEX、PUE共同处理后,PUE对DEX诱导的细胞的保护作用受到部分抑制。结论 葛根素抑制地塞米松诱导的hFOB1. 19细胞凋亡通过依赖于Caspase调节NF-κB通路。     

甘草次酸对光老化HaCaT细胞的保护作用及NF-κB信号通路影响

目的:研究甘草次酸对光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及NF-κB信号通路的影响。方法:用30m J/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用不同浓度(10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol·L~(-1))的甘草次酸处理光老化HaCaT细胞24h。MTT法检测甘草次酸对细胞活性的影响;试剂盒法检测各组细胞上清SOD、GSH活性及MDA含量;Western Blot法检测各组细胞NF-κBP50和NF-κBP65蛋白表达量。结果:模型组细胞与空白组细胞相比,模型组细胞增殖率显著降低(P0.01);GSH、SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达量显著升高(P0.01)。甘草次酸处理的HaCaT细胞与模型组细胞相比,甘草次酸组细胞增殖率显著升高(P0.01);GSH、SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(P0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达显著下降(P0.05,P0.01)。结论:甘草次酸能显著保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,阻断NF-κB信号通路,抑制NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达有关。     

阿司匹林体外抑制破骨细胞生成的分子机制研究

目的 探讨阿司匹林对破骨细胞生成的影响及其分子机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,以100 ng/ml核激活因子κB( NF-κB)受体配体(RANKL)诱导培养,并同时添加不同溶度的阿司匹林(0,0. 25,0. 5,1. 0,1. 5 mmol/L)培养5天。在不同时间点,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色的方法来观察破骨细胞诱导生成能力,用实时荧光PCR方法检测其破骨细胞系标志基因,包括组织蛋白酶K( CTSK)、TRAP、基质金属蛋白酶9( MMP-9)和降钙素受体(CTR) mRNA的表达。裂解不同培养条件的细胞并提取蛋白上样,行western印迹检测NF-κB通道蛋白的表达以及有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPKS)通道蛋白的表达,通过免疫荧光的方法分析确定NF-κB的P65的核易位。结果 阿司匹林抑制RANKL诱导的破骨细胞生成,随着阿司匹林浓度增加,破骨细胞形成数量明显减少;其标志性基因TRAP、CTSK、MMP9及CTR的mRNA表达均有所下调;磷酸化的P65、P50、IKB-a、P38以及氨基端激酶(C-JNK)和胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达均有所减少,而其非磷酸化的蛋 白表达水平无明显变化。阿司匹林同时对NF-κB P65的核易位也表现出抑制效果。结论 在RAW264. 7细胞系中,阿司匹林通过抑制NF-κB系统(P65、P50、IKB-a)和MAPKS系统(P38、C-JNK和ERK)通道的激活来抑制破骨细胞的生成,且在一定范围内和阿司匹林浓度呈正相关。阿司匹林可能具有临床预防及治疗骨质疏松的潜能。     

siRNA下调NF-κB p65 基因表达影响人胆管癌QBC939细胞凋亡

目的运用RNA干扰技术下调胆管癌细胞株QBC939中核转录因子κB(NF-κB)p65基因表达对其肿瘤细胞生长的抑制作用。方法以阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000作为转染试剂,将体外合成的人NF-κB p65的siRNA转染入胆管癌细胞QBC939。RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA的表达。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变。运用免疫组化、流式细胞仪、激光共聚焦法检测p65基因表达下调对QBC939细胞凋亡的影响。结果体外合成的人NF-κB p65 siRNA有效抑制了QBC939细胞中NF-κB p65 mRNA的表达(P0.01),同时ELISA结果显示,靶向NF-κB p65 siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P0.05),免疫组化DAPI核染色、流式细胞仪及激光共聚焦检测观察显示下调p65基因表达能够诱导QBC939细胞凋亡。结论 NF-κB p65的siRNA在胆管癌细胞QBC939调控方面起重要作用,通过沉默其表达可诱导胆管癌细胞凋亡抑制其生长增殖。