皮肤科学基础

诱导皮肤免疫抑制和表没食子儿茶素没食子酸酯光保护作用;中波紫外线对皮肤免疫系统影响的某些研究进展（综述）;全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线诱导的melan-α黑素细胞黑素合成的影响;人黑素瘤细胞A375MIA／CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定;过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究……[第一段]     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人表皮黑素细胞黑素合成的影响及机制

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对体外培养的人表皮黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶（TYR）活性以及TYR、酪氨酸酶相关蛋白（TRP）-1、TRP-2mRNA表达的影响,探讨EGCG对黑素合成的影响及其作用机制。方法：选择5．0、10．0、12．5、15．0、20．0μg／mL5个浓度的EGCG作用于体外培养的人表皮黑素细胞72h,分别测定细胞增殖活性、TYR活性、黑素含量;采用逆转录（RT）-PCR半定量检测EGCG对黑素细胞中TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达的影响。结果：EGCG显著抑制黑素合成和TYR活性,且呈浓度依赖性;EGCG可明显抑制黑素细胞中TYR mRNA和TRP-1 mRNA的表达,但对TRP-2mRNA的表达无明显影响。结论：EGCG可抑制黑素合成和TYR活性,这种作用可能与EGCG下调TYR和TRP-1的表达有关。     

皮肤科学基础

内皮素对黑素细胞的调控作用；与黑素结合的羟氯喹对长波紫外线诱导HaCaT细胞死亡的光保护机制研究；表没食子儿茶素没食子酸酯抑制长波紫外线诱导的HaCaT细胞氧化损伤和凋亡；p16^INK4a与HPV感染相关疾病；器官型筏式培养及其在HPV研究中的应用；HPV L1 C-末端保守序列短肽诱导HPV多型交叉抗体的初步研究。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外线诱导人原代表皮黑素细胞光损伤干预作用的研究

目的:观察中波紫外线(UVB)诱导人原代表皮黑素细胞光产物的形成和清除情况,以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法:选择10、20、40、80、100 mg/L 5种浓度EGCG作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,测定细胞增殖活性.采用免疫斑点印迹技术在30 mJ/cm2UVB照射及EGCG干预下.分别取照射后0.5 h和24 h检测环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)的产生和清除量.结果:低浓度(＜20 mg/L)EGCG能促进黑素细胞增殖.UVB照射后黑素细胞内光产物形成较快,但清除缓慢.EGCG对UVB诱导光产物的形成无明显影响,但能加速光产物的清除(P＜0.05).结论:EGCG能加速UVB照射后黑素细胞内光产物的清除.     

色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞的影响

目的 观察几种色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞形态及功能的影响.方法 体外培养正常表皮黑素细胞,分别加入合适浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、氢醌(HQ)、烟酰胺(NAA)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和维生素C磷酸酯镁(AP-Mg)干预细胞72h,测定酪氨酸酶活性和黑素生成量.用黑素体相关蛋白单克隆抗体(NKI-beteb)染色鉴定黑素细胞,观察并摄片.结果 3mmol/L EGCG,0.5mmol/L HQ,6mmol/L AP-Mg与黑素细胞共同孵育72h后,其细胞酪氨酸酶活性及黑素生成受到抑制,但只有EGCG组细胞形态发生变化;50nmol/L α-MSH干预后,细胞酪氨酸酶活性及黑素生成显著增加,形态改变较显著.1mg/mL NAA组细胞酪氨酸酶活性无改变,而黑素生成减少,细胞异形化.结论 EGCG,HQ,NAA,AP-Mg和α-MSH对黑素细胞都有显著的影响,虽然作用于黑素细胞的机制有所不同,但也有一些相似的地方,其具体机理有待于进一步研究.     

绿茶在皮肤美容中的应用研究进展

绿茶中含有大量的天然活性物质，其中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）具有多种重要的生理活性与药理作用，对防晒、抗氧化、抗衰老、防癌、抗癌、杀菌、消炎等均有特殊效果。绿茶的药效和美容功能受到了广泛地关注。文章对近十年来国内外对绿茶的药理作用的研究及其在美容方面的应用进展作一综述。     

表没食子儿茶精没食子酸酯皮肤光保护作用机制研究进展

流行病学研究提示,绿茶中的一些成分具有防癌的特性,绿茶抗癌能力归因于其多酚部分的生物活性。绿茶这一活性的主要成分是表没食子儿茶精没食子酸酯,其对中波紫外线皮肤光损伤的保护作用及其可能的保护机制的研究近年来进展较快,引起关注。     

表没食子儿茶素没食子酸酯联合TRAIL对黑素瘤A375细胞的凋亡作用

为探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合应用对人恶性黑色素瘤A375细胞的抑制作用,采用以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测TRAIL和EGCG作用组的抑制率,并以流式细胞仪检测各组凋亡率,流式检测EGCG单独作用后A375细胞表面死亡受体DR4、DR5的变化.亚毒剂量的TRAIL、EGCG及联合作用组致恶性黑素瘤细胞A375细胞凋亡率分别为12%、5.1%、60%.Caspase-3活性明显增强.单独应用组与联合应用组之间存在显著性差异(P<0.01).EGCG单独作用于A375细胞24 h后,死亡受体TRAIL-R1/DR4在细胞的表达明显(P<0.05).TRAIL-R2/DR5表达无明显变化.TRAIL和EGCG联合应用对A375细胞具有明显的协同杀伤效果,这一作用可能与EGCG上调DR4的表达及增强Caspase-3活性有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线诱导的角质形成细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的：研究绿茶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞HaCaT株（简称HaCaT细胞）分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：试验共设立空白对照组、单纯加药组、单纯照光组和加药照光组4组，以15mJ/cm^2 UVB的剂量照射细胞，酶联免疫吸附试验（EUSA）方法检测不同时间细胞上清液中VEGF含量。反转录（RT）-PCR测定VEGFmRNA表达。结果：UVB照射后，HaCaT细胞分泌的VEGF在照光后12h开始明显增加，随时间延长。VEGF水平逐渐增加。EGCG对UVB诱导的VEGF升高有明显抑制作用。在12、18、24h3个时间点．EGCG明显抑制VEGF水平的升高。结论：EGCG可以抑制紫外线诱导的HaCaT细胞分泌VEGF。     

皮肤科学基础

人肝细胞生长因子对体外培养的黑素细胞生物学活性的影响；308nm单频准分子光对人黑素细胞凋亡、周期和KIT蛋白表达的影响;益母草鲜汁对皮肤黑色素抑制作用的实验研究;表没食子儿茶素没食子酸酯对体外培养的人毛囊生长和毛乳头细胞增殖的影响;含额外拷贝ERG3B基因烟曲霉的表型分析     

皮肤科学基础

20071634表没食子儿茶酚没食子酸酯对紫外线辐射诱导角质形成细胞产生IL-6和NF-κB的影响/夏济平(南京医大一附院皮肤科),宋秀祖,孙蔚凌…∥中国皮肤性病学杂志.-2006,20(12).-705~707,729用ELISA法测定角质形成细胞培养上清液中IL-6水平,免疫组化和Western Blot法检测细胞中NF     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线辐射后小鼠表皮细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate，EGCG]脂质体对急、慢性中波紫外线（UVB）辐射后BALB／c小鼠表皮细胞凋亡的影响。方法：EGCG脂质体局部外用于BALB／c小鼠背部皮肤，将小鼠分为5组，分别给予中波紫外线180mJ／cm^2照射1次为急性损伤组：30mJ／cm^2每天照射1次，持续30d，为慢性损伤组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：急性损伤组中接受UVB照射的小鼠表皮中大部分细胞发生凋亡，EGCG脂质体未表现出对表皮细胞凋亡的影响；慢性损伤组中照光加药组的凋亡细胞多于其他组，EGCG脂质体表现为促凋亡作用（P〈0．05）。结论：EGCG脂质体不影响急性大剂量UVB辐射所致的表皮细胞凋亡；对慢性低剂量UVB辐射有促凋亡作用。     

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。     

表没食子儿茶酚没食子酸酯对UVA抑制真皮成纤维细胞胶原合成影响的研究

目的：探讨不同剂量长波紫外线（UVA）对体外培养的人真皮成纤维细胞胶原合成的影响,观察表没食子儿茶酚没食子酸酯（EGCG）对此影响的防护作用。方法：应用逆转录（RT）-PCR和光度检测法测定不同剂量UVA辐照及EGCG处理后,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平及培养液中可溶性胶原羟脯氨酸含量的变化;并检测了UVA（10J／cm^2）辐照后6、24、48h羟脯氨酸含量的变化。结果：不同剂量UVA（1、5、10J／cm^2）辐照降低成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达及培养液中羟脯氨酸的含量;UVA（10J／cm^2）辐照后6h羟脯氨酸量最低,而后逐渐增高,于48h恢复至正常水平。EGCG以剂量依赖方式提高UVA（10J／cm^2）辐照后成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达及培养液中羟脯氨酸的含量,EGCG浓度为0．100g／L时差异均有显著性（P〈0．05）。结论：UVA辐照可抑制体外培养真皮成纤维细胞的胶原合成,而EGCG可减轻这种抑制作用。     

外用表没食子儿茶素没食子酸酯抵抗中波紫外线对小鼠皮肤的慢性光损伤作用

目的：研究中波紫外线（UVB）慢性辐射BALB／C小鼠后皮肤的组织病理改变、表皮细胞凋亡情况及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对其的影响。方法：EGCG局部外用于小鼠耳、背部皮肤后分别给予不同强度的UVB辐射，每日1次．连续1个月，石蜡切片苏木精-伊红染色观察不同处理条件下皮肤组织病理变化，同时应用末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：UVB慢性辐射对BALB／C小鼠皮肤有明显影响，主要表现有表皮过度角化、棘层肥厚、海绵样水肿、晒斑细胞、真皮乳头层水肿、毛细血管扩张、炎性细胞浸润等。EGCG预处理能减轻UVB诱导的上述组织病理变化。另外，对慢性低剂量UVB辐射组，EGCG有一定的促细胞凋亡作用。结论：不同剂量UVB慢性辐射后小鼠皮肤组织病理改变明显，EGCG可保护UVB辐射诱导的光损伤作用，并对低剂量慢性UVB辐射后BALB／C小鼠皮肤细胞有促进凋亡作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯-补骨脂脂质体的制备及体外透皮性质研究

目的：制备表没食子儿茶素没食子酸酯-补骨脂脂质体（EGCG-PL）并检测其体外透皮性。方法：采用逆向蒸发法制备EGCG-PL，以激光粒度仪测定EGCG-PL的粒度及Zeta电位，超滤-HPLC法测定包封率，Franz 扩散装置比较EGCG-PL与EGCG-补骨脂醇溶液组（EGCG-PS）体外透皮性质的差异。结果：所制备的EGCG-PL粒径分布均匀，平均粒径为(118.1±17.0)nm，Zeta电位为-29.3 mV。EGCG-PL中EGCG、补骨脂素及异补骨脂素的包封率分别为(85.58±1.07)%、(55.49±2.82)%和(53.73±1.29)%。体外透皮试验结果显示，EGCG-PL中EGCG、补骨脂素及异补骨脂素24 h单位面积累积透过量及皮肤滞留量均明显高于EGCG-PS。结论：EGCG-PL制备简便、质量稳定。     

表没食子儿茶素没食子酸酯明胶纳米粒的制备及体外透皮性质研究

目的：制备表没食子儿茶素没食子酸酯-明胶纳米粒(EGCG-N)并研究其体外透皮性。方法：以激光粒度仪测定EGCG-N的粒度及Zeta电位,超滤-HPLC法测定EGCG-N的载药量及包封率,Franz扩散装置检测EGCG-N体外透皮性。结果：所制备的EGCG-N粒径分布均匀,平均粒径为(72.63±0.47)nm,Zeta电位为-28.0mV。EGCG-N中EGCG的载药量和包封率分别为(29.82±2.16)%和(83.91±0.93)%。EGCG-N中EGCG 24 h单位面积累积透过量及皮肤滞留量分别为(133.77±22.79)μg/cm²和(492.57±37.68)μg/g均明显高于EGCG溶液剂(53.30±21.12)μg/cm²和(165.88±17.96)μg/g(均P<0.01)。结论：EGCG-N制备简便,能够提高EGCG的经皮渗透能力。     

UVB诱导皮肤免疫抑制和表没食子儿茶素没食子酸酯光保护作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对不同剂量中波紫外线（UVB）慢性辐射BALB／c小鼠皮肤的保护作用。方法 EGCG局部外用于小鼠背部皮肤后予不同强度UVB辐射，每日1次，连续1个月，RT-PCR法检测IFN-γ和IL-10mRNA的表达水平变化。结果 不同剂量UVB慢性辐射后小鼠皮肤中IFN-γ mRNA表达水平较对照组降低（P〈0．01），IL-10mRNA表达水平较对照组升高（P〈0．01），并与UVB辐射强度呈一定剂量依赖关系。EGCG处理后可影响UVB辐射诱导上述细胞因子表达（P〈0．01）。结论 UVB辐射下调IFN-1和上调IL-10转录水平，可能与UVB辐射诱导局部免疫抑制有关。     

表没食子儿茶酚没食子酸酯对紫外线辐射诱导角质形成细胞产生IL-6和NF-κB的影响

目的研究绿茶中的主要活性成分表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对中、长波紫外线辐射诱导角质形成细胞产生IL-6和NF-κB的影响。方法用ELISA法测定角质形成细胞培养上清液中IL-6水平,免疫组化和WesternBlot法检测细胞中NF-κBp65的变化。结果UVB20、30mJ/cm2和UVA10、20J/cm2可以显著促进角质形成细胞分泌IL-6(P<0.05),且细胞内NF-κB的产生明显增加(P<0.05)。0.15mmol/L和0.3mmol/L的EGCG对紫外线诱导的IL-6分泌起到了抑制作用(P<0.05),其中0.3mmol/L的EGCG作用更为明显,对紫外线辐射诱导的角质形成细胞NF-κB产生有着显著的抑制作用(P<0.05)。结论中、长波紫外线辐射可以促进IL-6的分泌。EGCG能够抑制NF-κB易位入核,从而抑制IL-6的分泌。     

紫外线诱导角质形成细胞凋亡和表没食子儿茶酚没食子酸酯保护机理的探讨

目的探讨不同剂量的中波紫外线(UVB)辐射对体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞株)凋亡和死亡的影响,探讨表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用,以及与凋亡相关的bcl-2和Fas基因之间的关系。方法流式细胞仪检测不同剂量UVB辐照及EGCG处理后角质形成细胞凋亡和死亡数量以及bcl-2蛋白水平的变化,RT-PCR检测FasmRNA的表达水平。结果UVB辐照组凋亡细胞数和死亡细胞数显著高于对照组(P<0.01),bcl-2和FasmRNA量与对照组差异也有显著性(P<0.01)。UVB辐照126mJ/cm2组凋亡细胞数低于辐照42mJ/cm2组(t=2.39,P<0.05),但死亡细胞比例显著增加(t=4.82,P<0.01),两组bcl-2和FasmRNA表达量差异均无显著性(t=1.30,P>0.25;t=0.32,P>0.25)。UVB辐照42mJ/cm2立即加入EGCG组较辐照42mJ/cm2未加EGCG组凋亡和死亡细胞数降低(t=7.64,P<0.01;t=3.49,P<0.05),bcl-2增加(t=3.62,P<0.05),FasmRNA表达量减少(t=6.83,P<0.01)。结论小剂量UVB辐照可以诱导体外培养的角质形成细胞凋亡,大剂量UVB辐照则导致细胞死亡,EGCG通过与凋亡相关的bcl-2和Fas减少紫外线诱导的角质形成细胞凋亡。