小鼠艾氏腹水癌血清MDA与癌细胞腺苷酸环化酶及cAMP变化的相关研究

本文利用BALB/C纯种小鼠复制艾氏腹水癌(EAC),分别检测EAC荷瘤鼠早期,中期和晚期血消丙二醛(MDA),血浆、癌细胞内cAMP和癌细胞膜腺苷酸环化酶(AC)活力,并与正常鼠比较,在寻找各自变化规律的基础上,探讨其相互关系。结果发现,EAC荷瘤鼠血清MDA比正常鼠明显增高,且随病情的发展而不断增高,而EAC荷瘤鼠血浆cAMP比正常鼠明显降低,随病情发展不断下降。两者呈高度负相关(P<0.01)。癌细胞cAMP和AC活力的变化规律及与血清MDA关系与血浆cAMP相似。提示自由基可能通过损伤-SH,降低AC活力和使能量代谢障碍而致癌细胞内的cAMP下降。     

中华眼镜蛇毒对荷人鼻咽癌裸鼠血过氧化氢酶和GSH-PX活性的影响

目的:探讨中华眼镜蛇毒(NNAV)对荷人鼻咽癌(NPC)裸鼠血中过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。方法:采用比色法检测经腹腔注射低、中或高浓度NNAV(1mg／L、5mg／L或10mg／L)的荷人NPC裸鼠血中CAT和GSH-PX活性。结果:荷人NPC裸鼠组血中CAT活性(16450U/L)低于正常裸鼠组(20680U/L)(P＜0.05),而荷瘤裸鼠组血中GSH-PX活性(27670U/L)与正常裸鼠组(28790U/L)相比P＞0.05。低、中和高浓度NNAV治疗后的荷瘤鼠组血中CAT活性(20570U/L、23090U/L、21280U/L)均高于荷瘤鼠组(16450U/L)(P＜0.05),并接近正常水平(20680U/L)(P＞0.05)。同时低、中和高浓度用药组血中GSH-PX活性均不同程度地高于荷瘤鼠组(27670U/L)(P＜0.05),其中高浓度组(37810U/L)明显高于低或中浓度组(29940U/L、30610U/L)(P＜0.05),其血中GSH-PX活性明显高于正常裸鼠组(28790U/L)(P＜0.05)。结论:NNAV的抑瘤作用可能与其提高荷瘤鼠血中CAT和GSH-PX活性有关。     

荷人鼻咽癌裸鼠血浆MDA,cAMP／cGMP水平及PSP的影响

本实验利用ＢＡＬＢ／Ｃ裸小鼠，复制荷人鼻咽癌裸鼠模型，检测荷瘤鼠血浆丙二醛，ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值，观察云芝糖肽对荷人ＮＰＣ裸鼠的抑瘤作用及对荷瘤鼠血浆ＭＤＡ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ等的影响。结果发现荷瘤鼠血浆ＭＤＡ升高，ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ降低，ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值升高，高你低浓度ＰＳＰ对荷人ＮＰＣ裸鼠均有明显抗癌作用（Ｐ＜０．０１），抑瘤率５９．５８－９５．５３％；并可降低荷瘤     

鼻咽癌病人血浆脂质过氧化物,IL—2及IL—2受体活性的研究

本文对不同病期鼻咽癌(NPC)病人血浆中脂质过氧化物—丙二醛(MDA)、外周血淋巴细胞产生IL-2的能力、IL-2受体活性进行初步探讨。结果显示NPC病人血浆中MDA含量较正常人明显增高(P<0.01),晚期病人比早期病人增高更明显(P<0.01);患者外周血淋巴细胞分泌IL-2的能力及IL-2受体活性较正常人明显下降(P<0.01)。这提示了NPC患者血浆中MDA的增高和肿瘤的发生发展有关,NPC患者免疫功能的下降可能与MDA的升高有关。     

荷人鼻咽癌裸鼠全血GSH—PX和CAT活性的检测

用ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠复制鼻咽癌模型，检测不同病期荷人ＮＰＣＮＭ全血谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性，结果发现早期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性明显高于正常裸鼠，然后随着病情发展有所下降，但中或晚期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性仍高于正常水平。     

中华眼镜蛇毒C组分对荷人胶质细胞瘤株U-251裸鼠血清抗氧化酶活性的影响

目的探讨中华眼镜蛇毒C组分对荷人胶质细胞瘤株U-251裸鼠血清抗氧化酶活性的影响。方法取荷人胶质细胞瘤株U-251的Balb/c裸鼠,经腹腔注射低、中、高浓度的FCNNAV1mg/L、5mg/L、10mg/L,采用比色法检测裸鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果荷人胶质细胞瘤株U-251裸鼠血清SOD、GSH-PX、CAT活性显著高于正常裸鼠组(P<0.05),MDA含量显著低于正常裸鼠组(P<0.05)。结论中华眼镜蛇毒C组分的抑瘤作用可能与其提高荷瘤鼠血血清抗氧化酶活性的影响有关。     

鼻咽癌病人血浆中超氧化物歧化酶活性变化的初步探讨

本文用亚硝酸盐形成法检测了不同病期鼻咽癌(NPC)患者血浆中SOD活性以及鼻咽癌低分化细胞株培养上清(CNE-2s)对SOD活性的影响。结果发现:NPC病人血浆中总SOD、Mn-SOD及CuZn-SOD活性较正常人明显降低(P<0.01;将NPC按TNM分期,发现晚期(Ⅲ+Ⅳ)病人比早期(Ⅰ+Ⅱ)病人下降更明显。其中Mn-SOD活性在疾病早期即已降低(P<0.01)而CuZn-SOD活性则于晚期才降低(P<0.01)。CNE-2s对SOD活性有明显的抑制作用(P<0.01)。本文结果提示SOD活性的改变与NPC的发生发展有关。肿瘤组织的代谢物能抑制SOD活性。     

荷人鼻咽癌裸鼠血内皮抑素的水平变化

目的:探讨不同病期荷人鼻咽癌裸鼠血内皮抑素水平的变化,及其与肿瘤发展的关系。方法:采用BALB/C裸小鼠复制荷人鼻咽癌裸鼠模型,通过EIA方法测定不同病期荷人鼻咽癌裸鼠血内皮抑素的浓度,称取瘤重。结果:荷瘤鼠血中内皮抑素含量在种瘤5d组[(137.61±53.41)μg/L]或10d组[(103.06±17.33)μg/L]与正常裸鼠[(113.56±21.74)μg/L]比较未见明显差异(P>0.05),而种瘤20d组、30d组、40d组[(212.80±85.91)μg/L、(293.63±62.53)μg/L、(271.57±32.45)μg/L]显著高于正常裸鼠(P<0.05)。随着荷瘤时间的延长,瘤宿主血内皮抑素含量逐渐升高,种瘤20d组明显增高,并持续维持在高水平。瘤重与血中内皮抑素含量呈正相关关系(r=0.687)。结论:提示肿瘤的发展与血内皮抑素含量的变化可能有关。     

免疫重建荷卵巢癌SKOV3 SCID鼠腹腔移植中IL-7的免疫学作用

目的　建立荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠和免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植等模型 ,观察IL 7在免疫重建荷卵巢癌SCID鼠体内的作用。方法　用SKOV3 IL 7细胞株建立荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠模型 ,用PBL与SKOV3 IL 7细胞建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植模型 ,观察其生物学特性及免疫反应 ;采用HE染色、ELISA法和免疫组化等方法观察肿瘤组织IL 7合成和肿瘤浸润淋巴细胞情况。结果　在未人化水平下 ,IL 7基因转染组有明显的体内抑瘤作用 ,肿瘤局部有IL 7分泌。在人化水平下 ,观察到所有免疫重建组小鼠血浆人IgG水平随时间延长而逐渐上升 ,终末血IgG水平荷SKOV3 IL 7瘤组显著高于单独免疫重建组 (P <0 .0 5 ) ,荷SKOV3瘤组显著高于单独免疫重建组 (P <0 .0 5 ) ;IL 7有无转染 ,荷瘤鼠体内荷瘤状况相似 ,外周血IL 7水平差异无显著性。但镜下IL 7转染组肿瘤细胞内有更多TIL浸润 ,肿瘤细胞局部有IL 7阳性表达。结论　 (1)成功建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植模型。 (2 )转IL 7基因SKOV3可在荷卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠的肿瘤细胞中表达IL 7,IL 7在荷瘤鼠体内有成瘤下降现象 ,这一现象可能主要是局部作用的结果。     

没食子酸通过活化线粒体通路诱导CNE-2鼻咽癌移植瘤细胞的凋亡

目的:观察不同浓度的没食子酸(gallic acid,GA)对鼻咽癌移植荷瘤裸鼠的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:建立人鼻咽癌CNE-2细胞株荷瘤裸鼠移植性肿瘤模型,随机分为6组:正常对照组(control,con组),模型组(nasopharynx cancer,NPC组),没食子酸10,20,40 μg/kg组(GA-10μg/kg,GA-20 μg/kg,GA-40 μg/kg)和阳性对照组(顺铂,DDP组);经相应处理后,处死裸鼠,测量瘤体积,称量瘤体重量并计算抑瘤率;流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率;Western印迹检测肿瘤细胞中cytochrome C(Cyt C)、cleaved-cas 9,cleaved-cas 3与cleaved-PARP的蛋白表达水平.结果:与NPC组相比,给予GA后瘤体体积与重量随其浓度升高而减小,抑瘤率与肿瘤细胞凋亡率增大;与NPC组相比,肿瘤细胞线粒体中Cyt C的蛋白表达随GA浓度增加而减少,胞质中Cyt C的蛋白表达则相反,细胞中cleaved-cas 9,cleaved-cas 3与cleaved-PARP的蛋白水平显著增加,与GA浓度呈正相关.结论:没食子酸可能通过调控线粒体通路诱导鼻咽癌移植瘤细胞的凋亡.     

荷人鼻咽癌裸鼠全血GSH－PX和CAT活性的检测

用ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠（ｎｕｄｅｍｉｃｅ，ＮＭ）复制鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）模型，检测不同病期荷人ＮＰＣＮＭ全血谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－ＰＸ）和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）活性，结果发现早期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性明显高于正常裸鼠（Ｐ＜０．０１），然后随着病情发展有所下降，但中或晚期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性仍高于正常水平（Ｐ＜０．０１）．而荷瘤鼠在潜伏、早和中期全血ＣＡＴ活性与正常裸鼠比较未见明显差异（Ｐ＞０．０５），仅在晚期荷瘤鼠全血ＣＡＴ活性明显低于正常裸鼠（Ｐ＜０．０１）．结果提示ＧＳＨ－ＰＸ和ＣＡＴ活性的改变与ＮＰＣ的发生和发展有关。     

受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展

目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞,CCK-8实验检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞周期的分布,q PCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达,Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果:Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关,与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达,在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性,2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应,能阻滞细胞周期于G0期,在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论:Axl高表达可促进NPC的临床进展;TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖,提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。     

稳定表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1基因的鼻咽癌细胞系的建立

目的:建立稳定表达鼻咽癌(NPC)来源潜伏膜蛋白1(LMP1)的鼻咽癌细胞系。方法:利用基因重组技术构建NPC来源LMP1的一般性真核表达载体及上皮特异性表达载体,并将其转染鼻咽癌细胞系CNE-2,用PCR、RT-PCR及蛋白印迹等检测N-LMP1在CNE-2中的整合和表达。结果:①成功构建了N-LMP1的一般性和上皮特异性表达载体。②N-LMP1基因在CNE-2细胞中获得了正确表达。结论:成功建立了稳定表达NPC来源LMP1的鼻咽癌细胞系,为进一步研究LMP1在鼻咽癌细胞中的作用机制奠定基础。     

HMG-CoA2裂解酶在鼻咽癌组织中表达及其对鼻咽癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的探讨HMG-CoA2裂解酶(HMGCL)在鼻咽癌(NPC)组织中表达及其过表达对鼻咽癌细胞行为学的影响。方法 Western blot检测64例鼻咽癌组织和42例正常鼻咽上皮组织(NNE)及5个NPC细胞系(HK-1、CNE1、CNE2、HONE1和HNE-1)和正常鼻咽上皮细胞NP69中HMGCL表达水平;以HK-1细胞为研究对象,构建过表达HMGCL的细胞株;MTT法、集落形成实验、Transwell实验分别检测过表达HMGCL后HK-1细胞增殖、集落形成和迁移侵袭能力。结果 HMGCL在NPC和NPC细胞系中普遍低表达(P0.05),在NNE和NP69细胞中普遍高表达(P0.05);成功构建了过表达HMGCL的HK-1细胞株,过表达HMGCL后HK-1细胞增殖、集落形成和迁移侵袭能力均显著降低(P0.05)。结论 HMGCL在鼻咽癌组织中低表达可能与鼻咽癌细胞恶性表型有关,为将来寻找抑制鼻咽癌发生进展提供了新的靶标。     

Maspin在鼻咽癌癌变和转移中的作用研究

目的：研究Maspin(mammary serine protease inhibitor)在鼻咽上皮癌变和鼻咽癌转移中的作用。方法：用免疫组织化学染色检测30例正常鼻咽黏膜上皮组织,24例鼻咽上皮鳞状化生组织、14例非典型增生鼻咽上皮、10例原位鼻咽癌和50例浸润性鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中表达水平变化;同时检测了189例不同转移潜能NPC组织中Maspin的表达,分析其表达水平与NPC临床病理特征和患者预后的关系。结果：Maspin在原位癌和浸润性NPC组织中的表达分别显著低于正常鼻咽黏膜上皮组织、鼻咽上皮鳞状化生组织(P<0.05)。在有转移NPC组织中的表达明显低于无转移NPC组织(P<0.001),在颈部淋巴结转移癌组织中的表达明显低于原发癌(P<0.05)。Maspin表达水平与NPC的淋巴结转移、远处转移、临床分期以及NPC患者的总生存期负相关,是一个NPC预后判断的独立因素。结论：Maspin可能是一个与NPC发生、发展和转移相关的抑制蛋白,Maspin低表达的NPC患者预后差。     

抗鼻咽癌单克隆抗体FIO的制备

单克隆抗体技术为寻找鼻咽癌相关抗原提供了新的途径。尽管专一性的抗鼻咽癌单抗迄今尚未获得,但在基础及临床研究方面有应用价值的抗体己有不少报道。最近,我们用CNE_2细胞和鼻咽癌组织匀浆为免疫原经脾脏加强免疫后利用单克隆抗体技术获得的F 10单抗,用ABC免疫组化方法检测52例鼻咽癌组织冰冻切片,阳性率为100％,检测鼻咽癌外的其他组     

miR-141-3p通过促进波形蛋白表达增强CNE-2人鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨微小RNA 141-3p(miR-141-3p)能否通过调节波形蛋白(vimentin)促进CNE-2人鼻咽癌(NPC)细胞的迁移。方法 实时定量PCR检测NPC组织和癌旁组织miR-141-3p表达，免疫组织化学染色法和Western blot法检测vimentin的表达水平。采用实时定量PCR和Western blot法分别筛选5-8F、CNE-2、HNE1人NPC细胞中miR-141-3p相对表达量最高的细胞株，实时定量PCR和Western blot法共同验证miR-141-3p与vimentin表达关系；采用小干涉RNA(si-miR-141-3p)下调CNE-2细胞miR-141-3p、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率、Transwell^TM小室法检测细胞侵袭和迁移、Western blot法检测vimentin表达量。结果 与癌旁组织相比，NPC组织中miR-141-3p和vimentin表达量均显著增加，与NP69细胞相比，miR-141-3p和vimentin在CNE-2细胞中表达均显著增加；下调CNE-2细胞中miR-141-3p...     

细胞周期蛋白E2在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:研究细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织Cyclin E2蛋白和mRNA的表达。结果:Cyclin E2蛋白在NPC和鼻咽非肿瘤组织中的表达率分别为75%(45/60)和9.5%(2/21),两者相比有统计学意义(P<0.01);鼻咽癌组织中Cyclin E2蛋白的过表达对同年龄、性别的患者无统计学差异(P>0.05),但与淋巴结转移、分期和5年生存率有相关性(P<0.01)。鼻咽癌组与对照组相比,Cyclin E2 mRNA表达亦有统计学差异(P<0.01)。结论:Cyclin E2表达对判断鼻咽癌病变进展、生存率及转移有重要参考价值。     

Periostin过表达对鼻咽癌6-10B细胞侵袭和迁移的影响及机制

目的探讨外源表达periostin蛋白对鼻咽癌(NPC)6-10B细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。方法采用脂质体转染技术建立稳定高表达periostin的6-10B细胞,RT-PCR结合Western blotting检测转染效率,Tanswell分析periostin高表达后6-10B细胞侵袭和迁移能力的改变,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMPs)活性的变化;免疫组织化学检测整合素(integrin)αvβ5在转染periostin前后6-10B细胞中的表达以及其与periostin在鼻咽癌和正常鼻咽黏膜组织中的表达,image-pro Plus 6.0软件进行图像分析及吸光度测定,统计学分析鼻咽癌组织中periostin和integrinαvβ5表达强度的相关性。结果 Periostin过表达的6-10B细胞侵袭、迁移能力明显增强,细胞培养上清中MMP-2、MMP-9活性增加,integrinαvβ5在periostin过表达的6-10B细胞及NPC组织的表达明显强于对照组,Spearman相关性分析显示,integrinαvβ5和periostin在NPC组织中的表达强度成正相关(r=0.682,P=0.000)。结论外源表达periostin能促进NPC的侵袭和转移,其机制可能是通过与NPC细胞膜上integrinαvβ5受体结合而提高MMPs的活性。     

荷S_(180)小鼠血浆ET、NO水平与瘤重变化及相关研究

目的和方法 :复制荷S180 小鼠模型 ,采用放射免疫均相竞争法和硝酸还原酶法测定不同病期 (荷瘤 5d、10d和 15d)的小鼠血浆中ET和NO-2 /NO-3 水平 ,称取瘤重 ,在观察三者的变化规律基础上 ,探讨不同病期荷S180 小鼠血浆ET、NO水平的变化 ,及其与肿瘤发展的关系。结果 :不同病期荷瘤鼠血浆ET、NO-2 /NO-3 均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。随病期延长 ,瘤重及NO-2 /NO-3 水平逐渐升高 (P <0 0 5 ) ,ET水平也有上升趋势。NO-2 /NO-3 水平与瘤重呈正相关 (r =0 95 5 ,P <0 0 5 )。NO-2 /NO-3 与ET的比值呈先下降后上升的变化。结论 :ET、NO与S180 肉瘤的发生发展有关 ,二者在肿瘤发展中可能有相互促进作用