聚乙二醇修饰的精氨酸脱亚胺酶临床研究

精氨酸脱亚胺酶（ADI）是一种具有重要应用前景的抗肿瘤药物。聚乙二醇（PEG）修饰的ADI（ADI-PEG20）,免疫原性低,药物半衰期长。本文简要综述ADI-PEG20的抗肿瘤临床应用开发进展。     

氨基酰化酶高产菌株的选育与发酵

本实验以赭曲霉F449为出发菌株，发酵产生氨基酰化酶，其野生型菌株产酶单位为12.2u/ml发酵液,我们首先以紫外线诱变处理2min,得到其变异株F9,产酶16u/ml发酵液,然后对F9菌株的原生质生质体进行亚硝基胍诱变处理15min,得F28菌株,产酶24.7u/ml发酵液,将F28菌株在优化培养基中发酵培养,其产酰化酶单位提高到32.4u/ml发酵液,与此同时,提取到粗品酰化酶,其酶活为15,000u/g.     

肝素酶的发酵工艺研究

优化了发酵培养肝素黄杆菌生产肝素酶的半合成培养基配方，种子液种龄48h，接种量10％，装量90ml／（750ml摇瓶），25℃培养32h。采用该优化方案，肝素酶的发酵水平可达1768u／L，较合成发酵培养基提高52％。     

溶媒耐受性绿脓假单胞菌PseA产生耐溶媒蛋白酶的培养条件优化及产物鉴定

据报道，从源自Pseudomonas aeruginosa的溶媒耐受性绿脓假单胞菌株（PseA）中可获得耐溶媒蛋白酶。本研究所获得产生该酶的优化培养条件：以0．7％甘油为碳源，0．4％酪蛋白和0．6％酵母抽提物作为氮源，pH7．0；种子液培养36h后以2．5％的接种量接种；30℃振荡（250r／min）培养24h。在该条件下，菌体生长最好，酶活力最高（160lu／ml）。该蛋白酶的最适pH与温度为9．0和55℃。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶类型的研究

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其它抗菌药物的耐药性及其产金属β-内酰胺酶的类型。方法收集同济医院2004年1月-9月耐亚胺培南铜绿假单胞菌29株，琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）；通过改良Hodge试验、双纸片协同试验（DDST）、聚合酶链反应（PCR）、序列分析等方法分析金属β-内酰胺酶类型，紫外分光光度法测定金属β-内酰胺酶的活性。结果29株细菌均为多重耐药株。11种常用抗菌药物中，仅对哌拉西林／三唑巴坦和阿米卡星敏感率较高，分别为69．7％和60．6％。29株菌中有2株产VIM-2金属β内酰胺酶（6．9％）。结论本院耐亚胺培南铜绿假单胞菌流行主要为医院感染所致，且里多重耐药，有2株发现产VIM-2型金属β-内酰胺酶．     

产溶葡球菌酶工程菌的发酵工艺

对溶葡球菌酶生产菌Bacillus Subtilis-0044的发酵条件和工艺作了进一步研究和改进，该菌的摇瓶产酶呆达550u/ml，在5L自动发酵罐上达680u/ml，且发酵周期大大缩短，仅5-6小时，发酵产率比原工艺提高一倍以上，该工艺全部使用国产常用原料，为产业化生产提供便利，在研究中发现溶解氧对培养过程非常重要；pH对产酶没有明显影响。发酵中期流加葡萄糖可抑制蛋白酶对产物酶的降解作用。     

假单胞菌胆固醇酯酶的生产Ⅰ.菌种筛选和发酵条件的研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从371株菌中筛得一株有工业生产价值的胆固醇酯酶产生菌,并对它进行了发酵条件的研究。用所获得的胆固醇酯酶配制的三酶试剂具有良好的稳定性,适用于临床检测。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及其耐药表型与外膜蛋白OprD2的关系

目的 了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）临床分离株对几种常用抗铜绿假单胞菌药物的敏感性；探索铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南和美罗培南耐药性差异与其膜孔蛋白0prD2变化的关系。方法琼脂对倍稀释法测定142株Pa对亚胺培南、美罗培南等8种常用抗假单胞菌药物的最低抑菌浓度，从中筛出32株对亚胺培南和美罗培南不同耐药表型的Pa，提取外膜蛋白并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法分离，检测OprD2相对含量。结果耐药率最高的是亚胺培南（54．23％），其次是环丙沙星（45．07％）、美罗培南（28，87％）、氨曲南（19．72％）、阿米卡星（17.61％）、哌拉西林／三唑巴坦（14．08％）和头孢他啶（11．97％），头孢哌酮／舒巴坦耐药率最低（9．86％）。呈现多重耐药的菌株占38．73％（55／142），交叉耐药率高达40．84％（58／142）。在对亚胺培南耐药的菌株中，合并有其他肛内酰胺类抗生素耐药的菌株达到62．34％（48／77）。32株Pa外膜蛋白电泳结果显示OprD2相对含量在耐药组为0～3．5％（其中有一株为8.70％），敏感组为6．20％～10.20％。在碳青霉烯类耐药组与敏感组之间统计分析P〈0．05，耐碳青霉烯类组低于敏感组，但是在亚胺培南耐药、美罗培南敏感组与亚胺培南、美罗培南均耐药组之间差异无统计学意义。结论铜绿假单胞菌耐药菌株常见，且常呈多重耐药和交叉耐药。亚胺培南耐药率高于美罗培南。膜孔蛋白OprD2减少或缺失是我院Pa对亚胺培南耐药的主要原因之一。但在美罗培南耐药中所起的作用，有待进一步研究。     

地衣芽孢杆lw-72合成纤溶酶的摇瓶发酵工艺优化

通过单因素试验和正交试验确定地农芽孢杆菌lw-72摇瓶发酵合成纤溶酶的最佳条件,最佳培养基组成为:玉米粉0.5%、黄豆饼粉2.0%、Na_2HPO_4 0.4%、NaH_2PO_4 0.2%、CaCl_2·2H_2O 0.01%、KCI 0.01%;培养摹初始pH为7.0;最佳培养条件:装液量30 ml/250 ml摇瓶,接种量10%,发酵时间为72 h.在该条件下发酵液中纤溶酶酶活力为622 u/ml,是初始发酵培养基的3.4倍.     

一种提高大肠杆菌植酸酶异源表达的巴斯德毕赤氏酵母发酵策略

在AOXl启动子的控制下，大肠杆菌植酸酶基因appA在甲基营养酵母菌巴斯德毕赤氏酵母中得到了高效表达。在甲醇诱导前更换新鲜培养基以除去有阻遏作用的甘油和代谢废物，明显地提高了植酸酶的表达。通过适当调整培养基成分和发酵策略，分别使摇瓶规模的植酸酶活性水平从118提高到204u／ml，高细胞密度发酵的植酸酶从1880提高到4946u／ml。培养上清液中的大部分蛋白都是重组植酸酶，其酶特性与天然大肠杆菌植酸酶相似。