乌头碱对KBV200细胞Pgp蛋白表达影响的研究

乌头碱是温阳散寒代表中药附子、乌头的主要成分之一[1].现代研究表明,乌头碱具有抑制肿瘤与抗肿瘤转移、缓解癌性疼痛、增强巨噬细胞的吞噬等作用[2～5].研究中发现,乌头碱能够增加长春新碱对KBv2f00细胞敏感性,推测机制与乌头碱能够抗耐药有关[6].KBv200细胞株具有Pgp蛋白高表达的生物学特征.为进一步证实乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应,我们在体外细胞培养过程中,采用流式细胞仪检测了经乌头碱作用后的KBv200细胞Pgp蛋白表达.     

乌头碱对KBv200细胞PgP蛋白表达影响的研究

乌头碱是温阳散寒代表中药附子、乌头的主要成分之一。现代研究表明，乌头碱具有抑制肿瘤与抗肿瘤转移、缓解癌性疼痛、增强巨噬细胞的吞噬等作用。研究中发现。乌头碱能够增加长春新碱对KBv200细胞敏感性，推测机制与乌头碱能够抗耐药有关。KBV200细胞株具有Pgp蛋白高表达的生物学特征。为进一步证实乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应，     

青蒿素及其衍生物逆转肿瘤耐药作用初探

目的探讨青蒿素及其衍生物的抗肿瘤耐药作用。方法以体外培养的耐药性人口腔鳞状上皮癌KBv200细胞株为研究对象,采用MTT法测定青蒿素、二氢青蒿素及青蒿琥酯对KBv200细胞的增殖影响和增敏指数。结果青蒿琥酯、二氢青蒿素对肿瘤细胞增殖的抑制作用比青蒿素强。不同浓度的青蒿素能够部分增加长春新碱对KBV200细胞杀伤的敏感性。结论二氢青蒿素及其青蒿琥酯能强烈抑制KBv200的细胞增殖;青蒿素能增加化疗药物的敏感性。     

中药活性成分体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究

目的：从中药活性成分中筛选肿瘤耐药逆转剂,并对其逆转作用进行研究。方法：采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果：钩藤总碱5μg/ml、药根碱2μg/ml、肯定玉红1．25μg/ml对长春新碱在KBv200细胞的逆转倍数分别为16．8、5．1和4倍;姜黄素1．56－12．5μg/ml与长春新碱合用对KB和KBv200细胞均具增敏作用。结论：钩藤总碱、药根碱、靛玉红均可逆转kBv200细胞对长春新碱的耐药性,而姜黄素与长春新碱合用对KB和KBv200细胞均具增敏作用。     

双苄基异喹啉化合物Ys-96与阿霉素或长春新碱联合用药对体外培养人癌细胞的抗癌增效作用

目的:研究双苄基异喹啉化合物Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药对体外培养人癌细胞系MCF7和KB的抗癌增效作用。方法:在体外培养的敏感株人乳腺癌细胞MCF7及其阿霉素耐药株MCF7/Adr和敏感株人口腔粘膜上皮样癌细胞KB及其长春新碱耐药株KBv200的体外试验系统中,采用Berenbaum所报道的评价二药相互作用性质的试验方法,对源于中药汉防己的双苄基异喹啉化合物Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药的抗癌作用进行了研究。结果:3种不同比例混合的Ys96和阿霉素或长春新碱联合用药对敏感株MCF7或KB以及耐药株MCF7/Adr或KBv200的IC50分数值之和(SFIC)均小于1.0,而且所有联合用药的等效曲线形态均为凹型。结论:Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药对上述体外培养的人癌细胞具有抗癌增效作用。     

双苄基异喹啉化合物Ys-96与阿霉素或长春新碱联合用药对体外培养人癌细胞的抗癌增效作用

目的:研究双苄基异喹啉化合物Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药对体外培养人癌细胞系MCF7和KB的抗癌增效作用。方法:在体外培养的敏感株人乳腺癌细胞MCF7及其阿霉素耐药株MCF7/Adr和敏感株人口腔粘膜上皮样癌细胞KB及其长春新碱耐药株KBv200的体外试验系统中,采用Berenbaum所报道的评价二药相互作用性质的试验方法,对源于中药汉防己的双苄基异喹啉化合物Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药的抗癌作用进行了研究。结果:3种不同比例混合的Ys96和阿霉素或长春新碱联合用药对敏感株MCF7或KB以及耐药株MCF7/Adr或KBv200的IC50分数值之和(SFIC)均小于1.0,而且所有联合用药的等效曲线形态均为凹型。结论:Ys96与阿霉素或长春新碱联合用药对上述体外培养的人癌细胞具有抗癌增效作用。     

乌头碱影响KBV200细胞Pgp蛋白表达的组化实验

目的:通过观察Pgp蛋白表达的细胞阳性率探讨乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法:以免疫组化法,分别测定6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后的KBV200细胞Pgp蛋白阳性表达率。结果:对照组Pgp蛋白表达的阳性细胞为96%;而6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后Pgp蛋白表达的阳性细胞率分别为83%、30%。结论:乌头碱能够降低KBV200细胞Pgp蛋白高表达,部分逆转KBV200细胞耐药性。     

利用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制

目的采用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法提取乌头碱12.5μg/mL用药组和对照组KBV200细胞的RNA,进行cDNA微阵列分析。结果整张基因芯片5504个基因克隆,其中用药前高表达基因208个,占克隆总数的3.8%,用药后高表达基因196个,占3.6%。用药前后细胞凋亡相关基因、CDKS家族、SMADS家族、MAPK信号转导系统等的基因发生变化。结论乌头碱可能通过影响细胞凋亡相关基因和影响MAPK信号转导系统等机制,最后作用于Mdr1基因的表达,从而起到抗耐药作用。     

粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞凋亡

目的 :观察粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱与长春新碱合用对多药耐药肿瘤细胞诱导凋亡的作用。方法 :采用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染技术、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测长春新碱及其与上述单体合用诱导耐药株瘤细胞MCF 7/Dox的凋亡程度。结果 :单用长春新碱可引起约 10 %细胞凋亡 ,而长春新碱与粉防己碱、甲基莲心碱或蝙蝠葛碱合用明显地增加细胞凋亡的百分率 ,其中粉防己碱的作用最强。联合用药的细胞凋亡数显著地大于单用长春新碱的作用。结论 :粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱均有明显的增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF 7多药耐药细胞的凋亡作用     

大黄素蒽醌衍生物介导KB及KBv200细胞氧化损伤的研究

目的研究以大黄素为母体结构,人工半合成的4种蒽醌衍生物抑制KB和KBv200细胞增殖的作用机制.方法采用MTT比色法测定细胞毒作用;采用流式细胞仪检测分别用DCFH-DA和DiOC6荧光探针标记的细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(△ψm).结果4种蒽醌衍生物均能不同程度地抑制KB和KBv200细胞的增殖,表现为较强的体外抗肿瘤作用1,8-二(二甲氨乙氨基)-3-甲基-6-甲氧基蒽醌(H-19)对KB和KBv200细胞IC50分别为1.37和1.42 μmol/L;1-吡啶乙氨基-3-甲基-6,8-二甲氧基蒽醌(H-21)的IC50分别是13.0和17.9 μmol/L;1-吡咯烷乙氨基-3-甲基-6,8-二甲氧基蒽醌(H-25)的IC50分别是8.5和11.7μmol/L;1-羟丁氨基-3-甲基-6,8-二甲氧基蒽醌(H-28)的IC50分别是7.6和8.6 μmol/L,且各药对敏感株KB和相应的多药耐药(MDR)细胞KBv200的IC50相近(P＞0.05).用4种药物分别处理两种细胞12、24、48 h,12 h即能引起ROS的明显增加,24 h达到最大,与48 h引起的ROS增加差异不显著;各药均引起两种细胞△ψm时间依赖性的降低,48h时△ψm降低达到最大.结论4种大黄素蒽醌衍生物可能通过诱导细胞内ROS的增加,使得△ψm降低,从而抑制KB和KBv200细胞的生长,且对MDR细胞无抗药性,具有开发前景.     

Reversal effect of Ys-96, a bisbenzylisoquinoline, on adriamycin or vincristine resistance in human cancer cells in vitro]

OBJECTIVE: Reversal effect of Ys-96, a bisbenzylisoquinoline, on the resistance of human cancer cells to adriamycin or vincristine was studied in vitro. METHOD: In an in vitro culture system of human cancer cells MCF-7 and its adriamycin-resistant line MCF-7/Ad or KB and its vincristine-resistant line KBv200, the sensitivity(IC50) of the resistant cell lines to adriamycin or vincristine was evaluated with a MTT assay. RESULT: IC50 value of adriamycin or vincristine in combination with Ys-96 at a concentration of 1.00 mumol/L against MCF-7/Ad or KBv200 was found to be close to that of adriamycin alone or vincristine alone against the sensitive cell line MCF-7 or KB. CONCLUSION: The drug resistance of MCF-7/Ad or KBv200 could be essentially reversed by Ys-96 at a concentration of 1.00 mumol/L.     

5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

目的研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及机制。方法以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果;用流式细胞仪检测MDR逆转效果最好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素(ADR)蓄积的影响;Western blotting法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况。结果骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达。贝母素乙联合5-氟尿嘧啶(5-FU)给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达。结论贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关。     

葛根素对胃癌多药耐药的逆转实验研究

目的观察葛根素注射液对人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR的影响。方法采用MTT法进行药敏实验,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化、胞浆内药物浓度,荧光显微镜显示荧光强度,免疫细胞化学染色法显示耐药细胞中多药耐药相关蛋白(MRP)和P-糖蛋白(P-gp)的分布,观察化疗药(包括5-FU、VCR、DDP、ADM)和/或葛根素对胃癌裸鼠原位移植瘤的抑瘤率。结果葛根素注射液能够逆转SGC7901/ VCR对5-FU的耐药性,与SGC7901/VCR比较S期和G_2+M期增加,G_1期减少,细胞内的阿霉素荧光强度明显增强,MRP和P-gp的表达明显减弱,葛根素和5-FU联合应用对裸鼠胃癌的抑瘤率明显高于单纯应用5-FU组。结论葛根素注射液能够逆转SGC7901/VCR的多药耐药性,其机理可能是促使MRP和P-gp蛋白表达减少。     

EGCG对两株耐药肿瘤细胞的细胞毒增敏作用及抑瘤作用研究

目的:研究EGCG对人耐药肝癌细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及对裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法:MTT法检测药物对体外培养细胞的毒性作用,采用BEL7404/ADR或KBV200细胞种植于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型,观察用药后对裸鼠体重、抑瘤率、病理改变以及RTPCR和免疫组化法分别检测瘤组织mdr1和P糖蛋白的表达。结果:EGCG在100mg/L以下剂量对两株耐药肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与抗肿瘤药物联合应用可明显提高抗肿瘤药物的细胞毒作用;体内与抗肿瘤药物联合应用对两种肿瘤抑瘤率明显高于单用抗肿瘤药物组,mdr1mRNA和Pgp的表达下降。结论:EGCG与抗肿瘤药物联合应用可增强化疗药物对耐药肿瘤细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1mRNA表达、降低Pgp表达有关。     

茶多酚和粉防己碱联合抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用

目的研究天然有效成分茶多酚(TP)和粉防己碱(TET)分别联合4种常见抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用。方法以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的TP和TET分别联合顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)对实验细胞的增殖抑制率。结果无毒剂量的TP分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约200%;无毒剂量的TET分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约300%。结论无毒浓度的天然药物TP、TET分别与抗肿瘤药物联合应用能提高药物对鼻咽癌耐药细胞株的增殖抑制率,降低药物的IC50。     

至真方对人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR的增殖抑制及凋亡诱导作用

目的：研究至真方含药血清对人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法：用MTT法观察至真方含药血清对HCT-8及其耐药细胞HCT-8/VCR的增殖抑制作用;分光光度法检测至真方含药血清作用HCT-8/VCR细胞后Caspase-3活性;流式细胞术检测至真方含药血清对细胞凋亡率的影响。结果：不同体积分数的至真方含药血清对HCT-8及耐药细胞HCT-8/VCR存在明显的增殖抑制作用（P〈0.01）,且对两细胞系的抑制无统计学差异（P〉0.05）。10%体积分数的至真方含药血清作用HCT-8/VCR细胞24、48、72、96h后Caspase-3活性变化呈时间依赖性,并在72h之后出现OD峰值（OD=1.4,并达到平台。含药血清作用HCT-8/VCR细胞72h后的细胞凋亡率明显高于空白对照组（P〈0.01）。结论：至真方含药血清对人大肠癌多药耐药HCT-8/VCR细胞生长有明显增殖抑制作用,在一定条件下呈时间、浓度依赖性,并可诱导HCT-8/VCR细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3活性升高有关。     

长春新碱对可移植性小鼠淋巴细胞白血病的疗效及其机制研究

目的探讨长春新碱(Vincristine,VCR)对L615白血病的疗效及其可能机制。方法L615白血病造模成功后,分为对照组和VCR组,进行腹腔注射给药(对照组给生理盐水),隔日一次,连续6次。观测小鼠生存时间,体重变化,外周血白细胞计数,肝脾指数,肝脾骨髓涂片及骨髓白细胞分类,流式细胞术测定凋亡率。结果对照组体重明显减轻,VCR组体重无明显改变;VCR组小鼠生存时间是对照组的229%;外周血象,同组小鼠随病程的延长,白细胞逐渐上升,至濒死期则显著上升,与实验前比较有显著差异,且对照组更为显著,而血小板是先升后降,至濒死期,末梢血对照组出现大量L615白血病细胞,占白细胞总数的52.9%,VCR组L615白血病细胞占17.25%,两者具有显著差异(P<0.01);白血病死亡小鼠脾脏指数有差异(P<0.05),且VCR组脾指数大于对照组;流式细胞术证实,VCR能诱导L615白血病体内细胞凋亡,凋亡率达43.81%。结论VCR对L615白血病具有较好的疗效,其机制主要是诱导白血病细胞凋亡;VCR在抗肿瘤的同时,可能对正常组织尤其是免疫系统具有一定的损害作用。     

金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用

目的:探讨金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞的耐药逆转作用及其可能的作用机制。方法:分别以不同质量浓度(2.5~80 mg·L-1)的金丝桃苷及不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱作用于体外培养的HCT8和HCT8/VCR细胞48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率,计算各组细胞金丝桃苷和长春新碱的半数抑制浓度(IC50)及金丝桃苷抑制率为5%的药物浓度;采用非毒性剂量金丝桃苷分别与不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱联合作用HCT8/VCR细胞,检测长春新碱的IC50,计算逆转倍数;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3,Caspase-9蛋白活性的变化。结果:金丝桃苷非细胞毒性剂量为0.82mg·L-1。0.82 mg·L-1金丝桃苷可使长春新碱对HCT8/VCR细胞的IC50从65.97 mg·L-1下降至9.94 mg·L-1,逆转倍数为6.63;与单独用长春新碱组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组细胞凋亡率,Caspase-3,Caspase-9蛋白活性均显著提高(P0.01)。线粒体膜电位检测发现,与单独用长春新碱组及金丝桃苷组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组低荧光强度相对细胞数所占比率显著提高(P0.01)。结论:长春新碱与金丝桃苷联合应用后可增强Caspase-3,Caspase-9蛋白活性,降低线粒体膜电位,提高HCT8/VCR细胞的凋亡率,从而产生耐药逆转作用。