胃癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达及其临床意义分析

目的：探讨胃癌患者外周血癌胚抗原（CEA）mRNA表达及其与相关病理因素、近期疗效、预后的关系。方法：应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测58例胃癌患者化疗前、后20例健康对照者外周血癌胚抗原CEAmRNA表达；同时采用化学发光法测定胃癌患者血清CEA水平。患者随访2年。结果：胃癌患者外周血CEAmRNA阳性率为56．89％（33／58），显著高于健康对照组，二者差异有统计学意义（P〈0．001）；胃癌患者外周血CEAmRNA表达与肿瘤浸润深度（P=0．035）、淋巴结转移（P=0．042）、远处转移（P=0．006）和血清CEA水平相关（P=0．001）；多因素Logistic回归分析表明：淋巴结转移和血清CEA水平是影响胃癌患者外周血CEAmRNA表达的独立因素；血清CEA阳性率31．03％（18／58），胃癌患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于CEA蛋白水平（Χ^2=7．873，P=0．005），TaqMan定量RT—PCR与化学发光法检测CEA的符合率为88．89％（化学发光法检测阳性的病例TaqMan定量RT—PCR检测阳性率）；化疗后CEAmRNA阳性率略有下降，但不显著。近期疗效无效的患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者（Χ^2=9．992，P=0．002）。平均随访2年后，CEAmRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别是33．33％和77．27％，差异具有显著性（P=0．002）。结论：外周血CEAmRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志；定期监测胃癌患者外周血CEAmRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。肿瘤浸润深度和血清CEA蛋白水平与外周血肿瘤细胞微转移相关。CEAmRNA的检测优于蛋白水平的检测，有助于胃癌的早期诊断。     

早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测及其临床意义

 目的 研究早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测的临床意义。 方法 巢式RT PCR检测50例早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血hMAM mRNA阳性细胞,随访。24例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作对照。 结果 早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞hMAM mRNA阳性率26.0%,与良性乳腺疾病患者（4.2%）、健康体检志愿者（0%）比较,差异有统计学意义(分别为P=0.025、P=0.012);其hMAM mRNA阳性率与癌组织HER2过表达相关（P=0.037）;13例阳性患者中8例（61.5%）随访出现复发转移（P=0.004）,中位无瘤生存期明显降低（P=0.002）。 结论 hMAM mRNA是检测乳腺癌循环肿瘤细胞较为理想的分子标记物。早期乳腺癌患者术后辅助治疗前hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测,可能是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

胃肠道癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的检测及其临床意义

目的：应用RT—PCR法检测胃肠道癌患者外周静脉血CEAmRNA，探讨与不同临床病理指标之间的关系，评估对临床治疗和预后的指导意义。方法：应用RT—PCR技术，选择特异性CEAmRNA引物，检测41例胃癌、大肠癌患者外周血CEAmRNA，同时定量检测外周血CEA和CA19—9糖蛋白。另抽取12例健康志愿者外周血标本作为对照。结果：41例胃肠癌患者外周血中CEAmRNA、CEA、CA19—9阳性率分别为26．8％、19．5％、14．6％。12例对照外周血中CEAmRNA、CEA、CA19—9均阴性。有淋巴结转移者外周血CEAmRNA阳性率（40％，10／25）高于无淋巴结转移者（6．25％，1／16），P=0．000。TNM分期Ⅳ期中外周血CEAmRNA阳性率63．6％（7／11），Ⅲ期21．4％（3／14），Ⅰ、Ⅱ期6．3％（1／16），P=0．004。外周血CEAmRNA表达在不同年龄、性别、病理类型中无统计学差异（P〉0．05）。结论：CEAmRNA、CEA和CA19—9在胃肠道癌患者中的阳性率，以CEAmRNA阳性率最高，随淋巴结转移数目、病期进展，阳性率更高，可能预后不良。     

外周血癌胚抗原mRNA在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：应用RT—PCR技术检测大肠癌患者外周血CEAmRNA，探讨与不同临床病理指标之间的关系，评估复发转移的早期预测意义。方法：应用RT—PCR技术，选择特异性CEAmRNA引物，检测29例大肠癌患者外周血CEAmRNA，同期定量检测外周血CEA和CA19-9糖蛋白。另抽取12例健康志愿者外周血标本作为对照。结果：29例大肠癌患者外周血中CEAmRNA、CEA、CAl9-9阳性率分别为24．14％（7／29）、17．24％（5／29）、13．79％（4／29）。12例对照组外周血中CEAmR—NA、CEA、CA19-9均阴性。有淋巴结转移者外周血CEAmRNA阳性率（35．29％，6／17）高于无淋巴结转移者（8．33％。1／12），但x^2=2．79，P=0．095。TNM分期Ⅳ期中外周血CEAmRNA阳性率66．67％（4／6），Ⅲ期16．67％（2／12）。Ⅰ、Ⅱ期9．09％（1／11），差异有统计学意义。x^2=7．65，P=0．022。外周血CEAmRNA表达在患者的年龄、性别、病理类型等差异无统计学意义，P〉0．05。结论：CEAmRNA、CEA和CA19-9在大肠癌患者中的阳性率，以CEA mRNA阳性率最高，随TNM分期进展，阳性率更高，提示预后不良，应加强治疗。     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

可手术乳腺癌循环肿瘤细胞与原发肿瘤临床病理特征的关系

目的探讨可手术乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）的阳性率及其与原发肿瘤临床病理特征的关系。方法以2010年9月至2011年5月期间南京医科大学第一附属医院收治的94例可手术乳腺癌患者为实验组,20例健康志愿者及20例乳腺良性疾病患者为对照组,抽取实验组及对照组患者的外周静脉血10ml,用密度梯度离心法富集分离单个核细胞,以多标志物（CK19、人乳腺珠蛋白、小黏蛋白）联合的实时荧光定量PCR法检测CTCs。采用皮尔逊x。检验分析可手术乳腺癌组与对照组外周血CTCs阳性率的差异,以及CTCs与原发肿瘤临床病理特征的关系。结果可手术乳腺癌组外周血CTCs阳性率显著高于对照组[56％（53／94）比5％（2／40）,X^2=30．62,P=0．00]。可手术乳腺癌患者外周血CTCs阳性率在不同的年龄、绝经状态、肿块大小、淋巴结转移、TNM分期、病理分级、病理类型、激素受体状态、HER-2表达、是否为三阴性乳腺癌、分子分型、P53表达、Ki67表达以及增殖细胞核抗原（PCNA）表达分组问差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论可手术乳腺癌患者外周血CTCs的阳性率较高,但其与原发肿瘤临床病理学特征无关系。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在乳腺癌中的表达及其临床意义

[目的]探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（IGF—IR）在乳腺癌中的表达及其临床意义。[方法]免疫组化方法检测20例正常乳腺组织、20例乳腺良性肿瘤和86例乳腺恶性肿瘤组织中IGF—IR的表达。[结果]①乳腺恶性肿瘤IGF—IR的阳性率及强阳性率明显高于乳腺良性肿瘤（x^2=10．512，P=0．001；X^2=23．591，P=0．000），高于正常乳腺组织（x^2=29．341，P〈0．05）；②IGF—IR在伴淋巴结转移的乳腺癌中表达明显高于无淋巴结转移的乳腺癌（X^2=3．950，P=0．047）；③IGF—IR表达与患者年龄、绝经情况、肿瘤大小、ER和PR表达情况、临床分期、病理类型无明显相关性。[结论]IGF．IR在乳腺癌的发生发展过程中发挥着重要作用，有可能成为临床诊断和判断预后的一个重要指标。     

hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值

目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标.     

MGMT和EGFR在乳腺癌中的表达及其相关性分析

[目的]研究乳腺癌组织中DNA修复酶O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）和表皮生长因子受体（EGFR）表达的相关性及其临床意义。[方法]采用免疫组织化学SABC法。检测66例乳腺癌组织中MGMT及EGFR的表达。[结果]乳腺癌中MGMT的阳性率为57．58％。EGFR的阳性率为48．48％，MGMT与EGFR的表达具有中度相关性（r=0．403）。有淋巴结转移患者MGMT与EGFR阳性率均高于无转移（P〈0．05）。[结论]检测MGMT与EGFR的表达对乳腺癌患者的预后判断和制定化疗方案具有指导意义。     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨RT—PCR法检测乳腺癌患者外周血中的CEA mRNA表达的情况及在乳腺癌外周血微转移诊断中的应用。方法采用RT—PCR法,检测46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达情况,以良性乳腺疾病患者及健康志愿者外周血标本作为对照。结果46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA阳性率为32．6％。对照组中CEA mRNA表达均为阴性。CEA mRNA的阳性表达与患者的TNM分期、腋淋巴结状况差异有统计学意义（P〈0．05）,而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论CEA mRNA可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,有助于指导临床治疗及判断预后。     

CD133 mRNA在胃癌患者外周血单核细胞中的表达及意义

[目的]通过检测胃癌患者外周血单核细胞中CD133的表达,探讨其与临床病理特征的关系。[方法]于术前抽取30例胃癌患者、15例胃溃疡患者、15名健康志愿者外周静脉血,密度梯度离心法分离单核细胞。半定量反转录聚合酶链反应检测CD133 mRNA表达水平。分析胃癌患者外周血CD133 mRNA表达与临床病理特征的关系。[结果]胃癌患者外周血中CD133mRNA表达水平明显高于胃溃疡患者和健康志愿者（0.2804±0.1835 vs 0.0984±0.1321,t=6.724,P〈0.001;0.2804±0.1835 vs 0.0282±0.0597,t=-7.327,P〈0.001）。CD133 mRNA表达与肿瘤最大直径、淋巴结转移、TNM分期有关（P〈0.05）,而与性别、分化程度、淋巴管浸润、血管浸润、浸润深度无关。Spearman相关分析显示,CD133 mRNA表达与淋巴结转移呈正相关（P〈0.01）。[结论]胃癌患者外周血中CD133 mRNA的表达与胃癌的发展、转移及预后密切相关。     

ERCC1在恶性肿瘤患者外周血和肿瘤组织中表达的相关性研究

目的 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1（ERCC1）在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌患者外周血和肿瘤组织中表达的相关性及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测230例肺癌、160例结肠癌、125例胃癌、100例乳腺癌患者的肿瘤石蜡标本及其对应的血液样本中ERCC1 mRNA的表达水平。结果 ERCC1 mRNA在4种肿瘤的癌组织和外周血中的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。4种肿瘤的癌组织中ERCC1 mRNA的相对表达量高于相对应外周血中的表达（P＜0.05）,且肿瘤组织与外周血ERCC1 mRNA的表达均呈正相关（肺癌：r=0.430,P＜0.001;结肠癌：r=0.553,P＜0.001;胃癌：r=0.583,P＜0.001;乳腺癌：r=0.501,P＜0.001）。肺癌、结肠癌及乳腺癌肿瘤组织和外周血中ERCC1的表达水平与年龄、性别均无关（P＞0.05）。胃癌肿瘤组织和外周血中ERCC1 mRNA的表达水平与年龄无关,而男性患者肿瘤组织中ERCC1的表达高于女性（P＜0.05）。结论 通过检测肺癌、结肠癌、胃癌及乳腺癌患者外周血中ERCC1的表达水平能够在一定程度上间接反映癌组织中ERCC1的表达状况。     

荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的研究

目的 通过检测大肠癌病人外周血清中癌胚抗原(CEA),外周血及淋巴结中癌胚抗原信使核糖核酸(CEA mRNA)的相对表达量,建立外周血中定量检测CEA mRNA的方法,并探讨CEA mRNA检测在结直肠癌诊断中的临床意义。方法 采用逆转录-荧光定量PCR技术检测大肠癌病人外周血及淋巴结中CEA mRNA的相对表达量,并用电化学发光法检测外周血中的CEA。结果 50例大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率为84%,与正常对照组(20人无1例阳性)比较,差异有统计学意义(P＜0.01);CEA 阳性率为22%与CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义(P＜0.01)。淋巴结CEA mRNA表达阳性率32.3%,与外周血中CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 建立了SYBRGREEN 荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的方法,大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率较高,且显著高于外周血中CEA含量以及淋巴结中CEA mRNA表达阳性率,可用于大肠癌患者的术前诊断。