基孔肯雅病毒E2蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)E2主要结构蛋白,为预防CHIKV感染及亚单位疫苗的研究奠定基础。方法根据Gen Bank上公布的CHIKV基因序列合成E2基因,并进行密码子优化,以提高原核表达效率。设计引物并以合成的E2基因为模板,PCR扩增CHIKV E2,连接到原核表达载体p ET-28a上,构建重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后进行纯化。结果重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2经双酶切鉴定构建正确,测序结果与原序列一致。表达的CHIKV E2融合蛋白相对分子质量约为47 000,可与His标签抗体特异性结合,纯化后纯度达95%以上。结论成功在大肠埃希菌中表达了CHIKV E2蛋白,纯化后蛋白纯度较高,为CHIKV亚单位疫苗的免疫试验奠定了基础。     

无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立

目的建立无血清培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株的工艺。方法分别采用VP-SFM和含5%牛血清DMEM于方瓶中培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株,比较无血清培养基培养不同代次Vero细胞间及无血清与含血清培养基培养Vero细胞间制备的狂犬病病毒滴度及效力。将2 g/L微载体cytodex-1加至250 ml spinner flask中,加入Vero细胞,37℃培养3 d,按MOI=0.02接种狂犬病病毒CTN-1V株,检测病毒收获液的病毒滴度及效力,每天显微镜下观察细胞生长情况,计算细胞比生长速率。结果无血清培养基培养不同代次Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度和效力差异无统计学意义(P0.05);无血清和含血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度差异无统计学意义(P0.05),但无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒效力明显高于含血清的培养基(P0.05)。搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞制备狂犬病病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,收获病毒液的平均病毒滴度为6.50 lg FFU/ml,平均病毒效力为6.77 IU/ml。结论初步建立了微载体系统无血清培养Vero细胞制备狂犬病病毒的工艺,为无血清规模化制备狂犬病疫苗奠定了基础。     

基于中心组合设计和响应面分析的血清替代物浓度优化

细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK cells)是一类广泛应用的肿瘤过继免疫疗法的效应细胞,其体外扩增过程中常需要使用无血清培养基。今以胰岛素、亚麻酸、胆固醇和乙醇胺4种可替代血清促进细胞扩增的组份为研究对象,采用中心组合设计和响应面分析相结合的方法,考察上述组分的浓度以及相互作用对单个核细胞扩增的影响,得到了可支持单个核细胞扩增的最优浓度,分别为10、5.66、19.86和1.22 mg?L?1。将上述4种组分以优化的浓度添加到DMEM/F12和IMDM以1:1体积比混合而成的基础培养基中,制成无血清培养基Optimizer。以含10%FBS的RPMI 1640为对照,采用半量稀释法培养脐血单个核细胞,以培养14天的总细胞扩增倍数、细胞组成、CD3+CD56+细胞扩增倍数以及对K562细胞的杀伤活性为指标,评价了制成的无血清培养基Optimizer支持CIK细胞扩增的效果。结果显示,采用所制备的无血清培养基Optimizer,总细胞扩增倍数为56.54±18.87,明显高于SFM1的5.14±1.03(p0.05)和SFM2的3.59±0.56(p0.05),与含10%FBS的RPMI 1640的35.24±20.92(p0.05)接近;CD3+细胞为97.98%±1.41%,与含10%FBS的RPM I1640的94.34%±1.29%相当(p0.05);尽管CD3+CD56+细胞比例18.17%±7.38%低于含10%FBS的RPMI 1640中的数值25.49%±3.35%(p0.05),但两种培养基的CD3+CD56+细胞扩增倍数分别为440.86±222.89和429.27±249.16,没有显著性差异(p0.05);当效靶分别为9:1时分别采用两种培养基扩增的细胞对K562细胞的杀伤活性均能达到50%以上。该研究结果为用于CIK细胞体外扩增的无血清培养基的开发提供了依据。     

微载体无血清培养水痘-带状疱疹病毒的效果

目的探讨利用生物反应器微载体无血清培养水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的效果。方法利用生物反应器,将人二倍体细胞2BS培养至在微载体上形成单层后,分别采用BD008无血清培养基及含有2%新生牛血清的MEM维持液按MOI为0. 004～0. 008感染VZV毒种;当细胞呈现70%细胞病变效应(cytopatho-genic effect,CPE)时,无血清培养的细胞沉淀经PBS洗涤1次,含血清培养基培养的细胞洗涤1～3次后收获,分别制备3批VZV原液;噬斑法检测病毒滴度,ELSIA法检测牛血清白蛋白残留量,并对制备的水痘减毒活疫苗(live attenuated varicella vaccine,VarV)进行热稳定性检测。结果洗涤1～3次获得的3批含血清培养VZV原液滴度从5. 00 lgPFU/mL降至4. 12 lgPFU/mL;牛血清白蛋白残留量分别为203. 2、120. 3和81. 2 ng/mL,前2批超出合格范围(≤100 ng/mL)。洗涤1次获得的3批无血清培养VZV原液滴度分别为4. 92、5. 00和5. 30 lgPFU/mL;牛血清白蛋白残留量分别为75. 2、82. 3和71. 9 ng/mL,均值低于洗涤1及2次含血清培养VZV原液(P <0. 05)。3批无血清培养的VarV热稳定性均符合要求。结论获得的无血清培养的VZV原液滴度及牛血清白蛋白残留量均符合《中国药典》三部(2015版)标准,本研究为提高VarV质量及生物反应器微载体工艺改进提供了参考。     

无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较

目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善。结论 目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。     

中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立

目的建立中蜂囊状幼虫病病毒(chinese sacbrood,CSBV)依赖解旋酶扩增(helicase-dependent amplific ation,HDA)检测方法,并对该方法进行优化及验证。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫RNA,以其为模板进行HDA,对建立的HDA的引物浓度(原始浓度为50μmol/L,进行10、20、40、80、160、240、320倍稀释)、反应温度(60、65及70℃)及时间(60、90及120 min)进行优化,并对优化的方法进行特异性、敏感性及稳定性验证。经电镜观察、RT-PCR及优化的HDA法对37份临床样品进行检测。结果 HDA最佳引物浓度、反应温度及时间分别为5μmol/L、65℃及90 min;CSBV与健康幼虫、蜜蜂急性麻痹病毒(acute bee paralysis virus,ABPV)、蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus,CBPV)、黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)和残翅病毒(deformed wing virus,DWV)cDNA均无交叉反应,HDA的最低检出限为10-2ng,检测试剂保存12个月后,仍可扩增出目的条带;37份临床样品中,有6份样品的RT-PCR和HDA结果为阳性,但电镜观察仅有4份为阳性。结论建立了CSBV HDA检测方法,该方法具有较高的敏感性、特异性及稳定性,为检测其他蜂病毒及快速鉴定其他动物病毒提供了参考。     

谷氨酰胺和丙酮酸钠对NK-92细胞体外扩增的影响

为了优化免疫细胞体外培养体系实现其高效扩增,以自然杀伤细胞系(natural killer-92 cells,NK-92)为对象,通过氨基酸代谢分析及正交实验设计优化了关键代谢物浓度,并在有/无血清培养基中进行了验证。结果表明,谷氨酰胺丙酮酸钠浓度对NK-92细胞的体外扩增有显著影响,其最适浓度为13.0和2.5 mmol·L~(-1)。在此浓度下,有血清培养体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3 712.85±225.74)倍,显著高于优化前对照组的(2 255.93±243.00)倍(p0.05);其杀伤活性均值由57.23%提高到63.53%;无血清体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3 193.59±199.99)倍,明显高于对照组的(1 917.16±242.87)倍(p0.05),且显著提高了扩增后NK-92细胞中CD3~-CD56~+细胞比例和杀伤活性(p0.05)。该结果可为免疫效应细胞无血清培养基的开发提供技术支持。     

在无血清无蛋白培养基中培养Vero细胞

目的开发在无血清无蛋白培养基(PF)中培养Vero细胞的技术。方法在DMEM/F12培养基中添加酵母提取物和大豆水解物,配制成无血清无蛋白培养基。使用配制好的无血清无蛋白培养基,分别在玻璃、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和聚苯乙烯(PS-TC)培养面上培养Vero细胞,观察细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线,以含血清培养基BM为对照。结果与BM培养基比较,在玻璃培养面上,PF培养基不支持Vero细胞生长和分裂;在PVB培养面上,PF培养基支持Vero细胞生长,但不支持分裂;在PS-TC培养面上,PF培养基支持Vero细胞的生长和分裂。结论在PS-TC培养面上,PF培养基适合培养Vero细胞。     

病毒性出血热的研究进展

病毒性出血热(viral hemorrhagic fevers,VHFs)是一组由媒介病原微生物引起的以发热和出血为主要临床症状的急性传染病,可引起人类VHFs的病毒包括黄病毒科病毒[如西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和登革病毒(Dengue virus,DENV)]、布尼亚病毒科病毒[如汉坦病毒(Hantavirus,HV)、克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)]、丝状病毒科病毒[如埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)和马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)]、沙粒病毒科病毒[如拉沙病毒(Lassa virus,LASV)和Lujo病毒]、披膜病毒科病毒[如基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)]。近年新发突发VHFs病例不断增加,且目前尚无有效治疗药物,VHFs严重威胁人类健康。本文就VHFs的病原学、临床特征、快速早期诊断及疫苗研究等方面作一综述。     

猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)和猪蓝耳病病毒(Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV)多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证。用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较;检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对。结果以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带。建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA;该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Trans-missible gastro-enteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的检测结果均为阴性;该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100%;选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3%⁹8.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%98.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%⁹7.9%之间。结论成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础。     

甲型肝炎病毒与水痘病毒感染2BS细胞的超微结构变化

目的观察甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、水痘带状孢疹病毒(Varicella zoster virus,VZV)分别感染与共同感染二倍体细胞2BS株时细胞超微结构的变化。方法电镜观察HAV单独感染21、23、25 d,VZV单独感染1、3、5 d及HAV感染21 d后再以VZV感染1、3、5、7 d的2BS细胞的超微结构。结果与正常对照2BS细胞相比,单独感染HAV的2BS细胞超微结构无明显变化;单独感染VZV的2BS细胞的超微结构主要出现核膜破坏;HAV与VZV共同感染的2BS细胞核内出现VZV包涵体,核膜缺失,胞浆中可见HAV与VZV形态,且细胞粗面内质网和滑面内质网膨胀,内质网小池内有致密颗粒。结论HAV与VZV共同感染的2BS细胞的超微结构与两种病毒单独感染的细胞的超微结构存在不同的变化规律和形态特征,先感染HAV后感染VZV的2BS细胞比单独感染VZV的2BS细胞受到的破坏程度轻。     

乙型脑炎病毒在Vero细胞上的传代适应性及毒种库的建立

目的分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库。方法将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代(P3V1~P3V20),采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。优化JEV静置培养条件(维持液p H值、培养温度、MOI)及接种方式(单层接种法、混合接种法),并进行培养规模的放大。采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析。建立JEV毒种库,并进行全面检定。结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最适培养条件为:病毒维持液p H值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为:单层接种法。在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100%,传代稳定性良好。建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求。结论已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础。     

表达呼吸道合胞病毒F蛋白的新城疫重组病毒的构建及其免疫原性

目的利用新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)反向遗传系统构建表达呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白的重组病毒,并以BALB/c小鼠为动物模型,评价其免疫原性。方法在已建立的NDV反向遗传系统的基础上,将RSV F基因插入NDV全长cDNA克隆中,构建并拯救获得表达RSV F蛋白的重组病毒rLS/RSV-F。采用间接免疫荧光(indirect immunoinfluscent assay,IFA)法鉴定RSV F蛋白的表达;以HA、病毒半数鸡胚感染量(50%infective dose,EID50)、半数组织感染量(50%tissue infectious dose,TCID50)及生长曲线等生物学指标对其生物学特性进行鉴定;将rLS/RSV-F滴鼻免疫BALB/c小鼠,于免疫后第49天经眼眶后静脉丛采血,分离血清,ELISA法检测IgG抗体效价,中和试验检测中和抗体效价。结果成功拯救表达RSV F蛋白的NDV重组病毒rLS/RSV-F,具有与亲本病毒相似的感染能力及生长动力学特性;rLS/RSV-F可刺激小鼠机体产生较高水平的针对RSV F蛋白的特异抗体及RSV中和抗体,与亲本病毒对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论成功拯救了表达RSV F蛋白的NDV重组病毒,并通过动物实验证明重组病毒rLS/RSV-F具有较好的免疫原性,为RSV疫苗的研发提供了新思路。     

水貂肠炎细小病毒及犬瘟热病毒灭活后的联合免疫效果

目的探讨水貂肠炎细小病毒(mink enteritis virus,MEV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)灭活后的联合免疫效果。方法用甲醛灭活MEV-L和CDV-L弱毒株,固定MEV-L的血凝效价为2~6,与CDV-L病毒液(CDV-L TCID_(50)10~(-5.29)/mL)分别按1∶1(Ⅰ组)、1∶2(Ⅱ组)、1∶3(Ⅲ组)的量混合,加入10%氢氧化铝胶,充分混匀后免疫大鼠,均为1 m L/只。分别于免疫前及免疫后第7、14、30、60、90天采血,分离血清,采用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和间接ELISA检测血清MEV抗体效价,血清中和试验和间接ELISA检测血清CDV抗体效价。结果大鼠在免疫后7 d时产生MEV和CDV抗体,30 d时抗体效价最高,随后下降,90 d时抗体效价仍较高;Ⅰ组CDV抗体效价较其他两组高。结论3组不同比例的CDV和MEV联合免疫大鼠均可产生较高的抗体水平,其中以1∶1比例的免疫效果最佳。     

水痘带状疱疹病毒培养液的筛选

目的筛选培养水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的培养液。方法将4种不同的培养基分别与新生牛血清、人血白蛋白组合,配制12组不同的病毒培养液,培养VZV后,采用噬斑法检测病毒滴度。用筛选出的病毒培养液,对VZV进行6个40层细胞工厂的扩大化培养及连续传代培养,收获P1和P5病毒,进行ORF62核酸序列测序,利用DNAMan软件对测序结果进行比对分析。结果实验2、4、11组培养液培养的VZV滴度明显高于其他组(P均0.05),选择实验4组培养液对VZV进行扩大化培养后,病毒滴度均稳定在约5.4 Lg PFU/ml;连续传代培养,ORF62核酸序列无碱基突变。结论筛选出1种不含血清及人血白蛋白的VZV培养液,可以稳定地培养VZV。     

寨卡病毒研究进展

寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世界的公共卫生健康息息相关。起初该病仅在非洲地区流行,1980年传入东南亚,2007年传入密克罗尼西亚,于2014年传入美国并呈现出扩大蔓延趋势,引起世界卫生组织高度重视。2016年,在我国确诊了ZIKV输入性感染病例。本文就ZIKV的分子生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断、预防等方面作一综述,为其相关研究提供参考。     

B型流感病毒血凝素的纯化

目的纯化B型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)。方法使用不同浓度的菠萝蛋白酶酶切B型流感病毒HA,超速离心获得含HA的上清后,经蔗糖密度梯度离心进行纯化,HPLC分子筛分析纯化效果。纯化后的蛋白经糖苷酶PNGaseF处理后,切取丰度较高的蛋白条带,进行质谱鉴定。结果病毒蛋白与菠萝蛋白酶蛋白含量的最佳比例为40∶1;5%~30%梯度浓度的蔗糖能很好地去除低相对分子质量的蛋白,流感病毒内丰度较高的NP及M蛋白得到很好的去除;纯化的HA蛋白的纯度大于90%,且HPLC分析显示仅有1个主峰,均一性良好。结论优化了B型流感病毒HA蔗糖密度梯度离心纯化方法,获得了高纯度的HA蛋白,为制备HA标准抗血清奠定了基础。     

Peptidomimetic therapeutic agents targeting the protease enzyme of the human immunodeficiency virus and hepatitis C virus

During the past two decades, great strides have been made in the design of peptidomimetic drugs for the treatment of viral infections, despite the stigma of poor drug-like properties, low oral absorption, and high clearance associated with such compounds. This Account summarizes the progress made toward overcoming such liabilities and highlights the drug discovery efforts that have focused specifically on human immunodeficiency virus (HIV) and hepatitis C virus (HCV) protease inhibitors. The arsenal against the incurable disease AIDS, which is caused by HIV infection, includes peptidomimetic compounds that target the virally encoded aspartic protease enzyme. This enzyme is essential to the production of mature HIV particles and plays a key role in maintaining infectivity. However, because of the rapid genomic evolution of viruses, an inevitable consequence in the treatment of all viral infections is the emergence of resistance to the drugs. Therefore, the incomplete suppression of HIV in treatment-experienced AIDS patients will continue to drive the search for more effective therapeutic agents that exhibit efficacy against the mutants raised by the earlier generation of protease inhibitors. Currently, a number of substrate-based peptidomimetic agents that target the virally encoded HCV NS3/4A protease are in clinical development. Mechanistically, these inhibitors can be generally divided into activated carbonyls that are transition-state mimics or compounds that tap into the feedback mode of enzyme-product inhibition. In the HCV field, there is justified optimism that a number of these compounds will soon reach commercialization as therapeutic agents for the treatment of HCV infections. Structural research has guided the successful design of both HIV and HCV protease inhibitors. X-ray crystallography, NMR, and computational studies have provided valuable insight in to the free-state preorganization of peptidomimetic ligands and their enzyme-bound conformation. Researchers have designed a variety of novel bioisosteric replacements of amino acids and short peptides that contain all of the required pharmacophore moieties and play a key role in inducing conformational changes to the overall molecule. The knowledge gained from these studies will undoubtedly guide the future design of therapeutic agents and further contribute to the success of this field.     

豚鼠对EB病毒的易感性分析

目的建立豚鼠感染EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)动物模型,分析EBV对豚鼠的易感性。方法将EBV经鼻腔和口腔感染豚鼠,建立感染EBV动物模型。提取分离的豚鼠淋巴细胞总RNA,巢式PCR法检测EBNA1及BcLF1基因mRNA的表达水平;ELISA法检测豚鼠血清中抗EBV IgG抗体水平的变化。取豚鼠肝脏、肺、脾脏、腮腺进行病理分析。结果10只模型组豚鼠中有6只检测到BcLF1基因mRNA的表达,其中有4只同时检测到了EBNA1和BcLF1基因mRNA的表达;经双酶切及测序鉴定,扩增的EBNA1及BcLF1基因大小与预期相符。10只豚鼠血清中VCA IgG和EBNA-IgG抗体水平均有所升高。模型组中有5只豚鼠的肝脏、肺、脾脏、腮腺的组织发生不同程度的病变。结论豚鼠可作为EBV感染动物模型的备选动物。     

流感病毒裂解工艺的优化

目的探讨影响流感病毒裂解的因素,优化流感病毒裂解工艺。方法分别在不同裂解时间(Triton X-100裂解1、2、3和4 h)、不同终浓度的裂解剂(终浓度为0.5%、0.6%、0.7%和0.8%的Triton X-100)、不同总蛋白浓度(2 000、3 000和4 000μg/ml)及不同的离子强度[终浓度为0.01、0.05、0.1和0.5 mol/L的PBS(p H 7.2)]下,对流感病毒进行裂解,电镜下观察病毒裂解效果,同时采用免疫单扩散法检测血凝素含量,Lowry法检测总蛋白含量,计算蛋白含量/血凝素含量比值(裂解后病毒纯度)及血凝素回收率,确定最佳裂解工艺参数。结果当裂解前病毒纯化液蛋白含量范围为2 000~3 000μg/ml,PBS终浓度为0.1 mol/L时,利用终浓度为0.7%~0.8%的Triton X-100裂解流感病毒2 h,可获得最佳裂解效果。结论确定了流感病毒最佳裂解参数,优化了流感病毒裂解疫苗生产中的裂解工艺。