RNAi表达载体对膀胱癌细胞Livin基因表达的抑制作用

目的观察RNA干扰（RNAi）表达载体对膀胱癌BIU-87细胞Livin基因的抑制作用。方法构建针对Livin基因的RNAi质粒表达载体，脂质体法转染膀胱癌BIU-87细胞株，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测其对Livin mRNA及蛋白表达的影响。结果构建的表达质粒在膀胱癌BIU-87细胞株中均抑制了Livin mRNA及蛋白表达。与空白载体组细胞作对照，前者产生的小干扰RNA（siRNA）在对Livin mRNA的抑制率24、48h分别为（81．28±9．21）％、（55．88±6．27）％，蛋白抑制率24h为（64．75±7．55）％。结论RNAi表达载体可以有效地抑制膀胱癌细胞Livin基因的表达。     

凋亡抑制因子Livin在膀胱移形细胞癌中的表达

目的检测抗凋亡（IAP）家族中Livin基因在膀胱移形细胞癌（BTCC）组织及癌旁组织的表达，探讨Livin的表达在膀胱癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学和实时荧光定量逆转录．荧光定量聚合酶链反应（RT-QPCR）方法对30例膀胱癌患者中Livin基因在癌组织和癌旁组织中的表达进行检测。结果免疫染色标本中，在癌旁组织和膀胱癌组织中Livin的阳性表达率分别为0．60％。Livin在膀胱癌组织中的-△△CT值是癌旁组织的8．0454（7．4264—8．6644）倍，与分级和分期没有相关性。结论Livin基因在癌旁组织中有少量表达，而在BTCC组织中的表达量远远高于癌旁组织。     

凋亡抑制基因Livin在食管癌中的表达及其与P53、Bcl-2的关系

目的探讨凋亡抑制基因Livin在食管癌组织中的表达及其与P53和Bcl-2表达的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）结合银染技术检测36例食管癌组织和18例癌旁正常组织中Livin mRNA的表达，采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）法检测食管癌组织中Livin、P53和Bcl-2蛋白的表达。结果RT—PCR检测结果显示：Livin mRNA在食管癌组织中的阳性表达较癌旁正常组织明显增强，两种异构体基本同时表达。免疫组织化学检测结果显示：Livin蛋白在食管癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P〈0.01）。癌组织侵及食管外膜的Livin阳性表达率高于癌组织侵及食管肌层者（P〈0.05）；有淋巴结转移者的Livin阳性表达率高于无淋巴结转移者（P〈0.05）。Livin蛋白表达与P53蛋白表达无关（x^2=1．00，P=0．505），与Bcl-2蛋白表达有关（x^2=10．60，P=0．003）。结论Livin在食管癌组织中异常表达，有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。凋亡相关基因Bcl-2与Livin基因的异常表达可能在食管癌癌变中起协调作用。     

前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达研究

目的：探讨前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用RT-PCR和免疫组化（SP）法，检测Livin在62例PCa组织中的表达情况，其中高分化癌14例，中分化癌30例，低分化癌18例，正常前列腺组织10例。结果：62例PCa组织中Livin基因高表达，正常的前列腺组织中Livin均无明显表达。62例PCa组织中Livin蛋白阳性表达共有37例（59．7％），低分化组Livin蛋白阳性表达率（83．3％）明显高于高分化组（28．6％），其差异有统计学意义（P〈0．05），中、高分化组间及低、中分化组间Livin蛋白阳性表达率无统计学差异（P〉0．05）。Livin蛋白阳性表达与PCa的临床分期比较，T1-T2 65．0％，T3-T4 77．3％，亦有统计学意义（P〈0．05），临床分期愈晚，Livin蛋白阳性表达率愈高。结论：Livin与PCa的发生、发展有关，检测PCa组织中Livin表达可能对判断PCa预后有一定意义。     

Livin mRNA及Bcl-2，p53蛋白在胰腺癌中的表达

目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin在胰腺癌组织中的表达及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。 方法:采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测52例胰腺癌和12例正常胰腺组织中Livin mRNA的表达；用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中Bcl-2和p53蛋白的表达。 结果:Livin mRNA在胰腺癌中的表达率为71.2%，明显高于正常胰腺组织（P＜0.01）。Livin基因表达与胰腺癌的分化程度和淋巴结转移有关（P＜0.05）。Livin基因表达与Bcl-2蛋白表达有关，而与p53蛋白无关。 结论:Livin基因在胰腺癌的发生发展中起重要作用；Livin与Bcl-2的异常表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用；Livin基因过表达与抑癌基因p53的失活无关。     

膀胱癌患者尿液脱落细胞Livin检测的临床意义

目的探讨膀胱癌患者尿液脱落细胞中Livin的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测52例膀胱癌患者,18例泌尿外科非肿瘤患者以及10例健康志愿者尿液脱落细胞Livinα和β的表达,以-βactin为内参照。结果52例膀胱癌患者42例尿液脱落细胞Livinα表达阳性,阳性率86.5%,而Livinβ均表达阴性;18例泌尿外科非肿瘤患者及10例健康志愿者Livinα及β均表达阴性。结论检测膀胱癌患者尿液脱落细胞Livinα的表达,敏感性和特异性均较高,可作为临床筛选膀胱癌的理想指标。     

Livin mRNA及Bel-2，p53蛋白在胰腺癌中的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白Livin在胰腺癌组织中的表达及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。方法采用逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）法检测52例胰腺癌和12例正常胰腺组织中Livin mRNA的表达；用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中Bcl-2和p53蛋白的表达。结果Livin mRNA在胰腺癌中的表达率为71．2％，明显高于正常胰腺组织（P〈0．01）。Livin基因表达与胰腺癌的分化程度和淋巴结转移有关（P〈0．05）。Livin基因表达与Bcl-2蛋白表达有关，而与p53蛋白无关。结论Livin基因在胰腺癌的发生发展中起重要作用；Livin与Bcl-2的异常表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用；Livin基因过表达与抑癌基因p53的失活无关。     

BPH和前列腺腺癌中Livin的表达及其意义

目的：探讨凋亡抑制因子Livin在BPH和前列腺腺癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法,用Livin单克隆抗体对10例BPH、30例前列腺腺癌和10例正常前列腺组织中Livin基因的表达进行检测,分析其在正常前列腺组织、BPH组织和前列腺腺癌组织中的表达状况,以及Livin基因的表达与前列腺腺癌病理学分级之间的关系。结果：Livin基因在10例正常前列腺组织中均不表达,而在10例BPH组织中有8例呈阳性表达（80％）,在30例前列腺腺癌中有21例呈阳性表达（70％）。Livin基因在正常组织中的阳性表达率与在BPH、前列腺腺癌中的阳性表达率差异有明显的统计学意义（P〈0．01）;Livin基因在BPH和前列腺腺癌中的阳性表达率差异无明显的统计学意义（P〉O．05）;Livin基因的表达和前列腺腺癌的分级无明显关系（P〉0．05）。结论：细胞凋亡抑制因子Livin在BPH和前列腺腺癌组织中的表达上调,提示Livin基因可能通过抑制细胞凋亡对BPH和前列腺腺癌的发生和发展起重要作用。检测Livin基因的表达对鉴定前列腺组织的良恶性方面无明显作用。     

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的作用

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用．利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。这种联合靶向SiRNA对Livin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为27．9％和22．3％．对Survivin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为32．2％和40．9％。与对照组相比,联合靶向siRNA可降低肿瘤细胞增殖率．增加细胞凋亡率,但其细胞生长抑制作用和促细胞凋亡作用均弱于单独干扰Livin或Survivin基因．结论Livin和Survivin基因联合靶向siRNA能降低结肠癌细胞中Livin和survivin基因的表达．抑制结肠癌细胞的增殖．并诱导结肠癌细胞的凋亡．但此协同抑制作用较单独干扰Livin或survivin基因为弱。     

膀胱癌中Livin的表达及其与突变型P53的关系

目的探讨Livin在膀胱癌中的表达及意义，及其与突变型P53表达的相关性。方法采用34例膀胱癌石蜡标本及10例正常膀胱组织标本，通过免疫组化SP法检测Livin与突变型P53的表达。结果Livin在10例正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有30例Livin阳性表达（P〈0．01）。在膀胱癌中Livin蛋白的阳性表达率和膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期、复发性无明显的相关性（P〉0．05）；突变型P53在正常膀胱组织中不表达，而34例膀胱癌组织标本中有18例突变型P53阳性表达（P〈0．01）；膀胱癌中Livin的表达率与突变型P53无相关性（P〉0．05）。结论Livin蛋白与突变型P53蛋白可作为诊断膀胱癌的特异性指标，亦为抗肿瘤基因治疗提供了新的靶点。     

siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的：研究应用siRNA沉默Livin基因表达后肝癌细胞HepG2的生物学功能变化。方法：用脂质体lipofectamineTM2000将携带Livin基因的siRNA载体转染至HepG2细胞内,RT—PCR、Westernblot检测转染前后Livin基因mRNA和蛋白质的表达改变;流式细胞技术（FCM）和TUNEL检测转染前后肝癌细胞凋亡变化。结果：RT—PCR及Westernblot检测发现转染siRNA后Livin基因的mRNA和蛋白质表达均明显下降（P〈0．05）;FCM检测发现实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞HepG2在G1期所占比例分别是（58．994-1173）％、（41．85±2．82）％、（41．25±1．24）％,实验组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;TUNEL技术检测表明实验组肝癌细胞HepG2凋亡数目明显增加,细胞凋亡率为（67．56±2．56）％,凋亡率明显高于阴性对照组（27．21±12．58）％和空白组（14．09±5．16）％（P〈0．05）。结论：在肝癌细胞HepG2中,Livin基因沉默具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞生长的作用。【关键词】癌,肝细胞·肝癌细胞,HepG2·siRNA·基因,Livin     

Pokemon、Ki-67及Livin蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：检测胃癌组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达,探讨其在胃癌的表达及意义。方法：应用Western-Blot方法检测80例胃癌标本及正常胃组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达。结果：胃癌组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达分别为67.5%（54/80）、42.5%（34/80）和52.5%（42/80）。正常胃组织中Pokemon、Ki-67及Livin的表达为12.5%（10/80）、7.5%（6/80）、11.3%（9/80）。胃癌组织中Pokemon、Ki-67、Livin的表达与临床TNM分期、淋巴结转移有关,与年龄、性别、部位、Borrman分型无关。Pokemon与Ki-67、Livin的表达呈正相关（P〈0.05）。结论：Pokemon、Ki-67、Livin共同参与了胃癌的发生、发展和转移,可能成为胃癌临床诊断指标。     

凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中的表达情况,探讨Livin蛋白与BTCC发病、演进和复发的关系。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测30例BTCC组织和10例正常膀胱组织新鲜标本中Livin基因mRNA的表达情况。结果:10例正常膀胱组织Livin基因均无表达,20例膀胱癌组织标本Livin基因为表达阳性(20/30,66.6%),且同时表达Livinα和Livinβ两种亚型。Livin基因是BTCC发生和演进中的早期事件之一,在BTCC早期(Ta T1)和低分级阶段(G1),Livin有较高的阳性表达率,分别达71.4%和69.2%。Livin基因mRNA表达与BTCC分级和分期无关,但与其是否复发密切相关,复发组Livin阳性率为85.0%,远高于未复发组的16.7%。结论:Livin基因与BTCC的演进和复发有关,可作为BTCC早期诊断和评判术后高复发风险的一项重要指标。     

Livin基因一肿瘤治疗新靶点

Livin是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族的新的重要成员。Livin在多种肿瘤细胞中高表达,参与抑制细胞凋亡,与肿瘤发生发展密切相关。研究发现,通过下调或抑制Livin基因的表达及诱导产生特异性地识别Livin的抗体可抑制、杀死肿瘤细胞,为恶性肿瘤的诊断、细胞和基因靶向治疗等提供新的方法。     

Livin基因siRNA重组表达载体的构建

目的构建针对人抑凋亡基因Livin的小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒载体。方法通过分子克隆技术,设计并合成具有基因特异性的3组寡核苷酸片段,克隆到pmU6质粒载体,并经菌落PCR鉴定及测序鉴定,Livin的siRNA序列成功克隆到重组表达质粒载体中。结果经菌落PCR鉴定及测序鉴定证实,人Livin的siRNA序列成功克隆到表达载体中,插入序列正确。结论成功构建了Livin siRNA质粒表达载体,为后续研究降低或沉默Livin基因表达后能否有效抑制膀胱癌细胞增殖和促进细胞凋亡奠定了基础。     

人胰腺癌组织中Livin和IGF-2的表达及临床意义

目的：探讨人胰腺癌组织中凋亡抑制蛋白Livin表达情况及其与各临床病理因素的关系，以及与胰岛素样生长因子-2（Insulin-likegrowth factor－2，IGF－2）表达的相关性。方法：应用免疫组织化学SP法检测56例胰腺癌组织中Livin与IGF－2的表达。结果：胰腺癌组织中34例Livin表达阳性，阳性率为60．7％；35例IGF-2表达阳性，阳性率为62．5％；胰腺癌组织Livin、IGF－2的表达阳性率均高于非肿瘤胰腺组织（P〈0．05）。Livin和IGF－2的表达与肿瘤组织学分级、临床病理分期及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。相关性检验示Livin的表达与IGF－2之间有相关性（P〈0．01）。结论：人胰腺癌组织中Livin与IGF-2表达均上调；IGF－2与Livin相互作用共同参与人胰腺癌的发生、发展。     

Livin基因及其蛋白在狼疮肾炎中的表达及意义

目的:探讨Livin在狼疮肾炎中的表达及其生物学意义.方法:应用QRT-PCR、Western-blotting,分别检测人狼疮肾炎组织标本中Livin基因和蛋白的表达情况.结果:QRT-PCR检测显示狼疮肾炎组织中Livin mRNA的表达明显高于对照组; Western-blotting提示Livin在狼疮肾炎组织中的表达较对照组明显升高.Livin mRNA及蛋白的表达在狼疮肾炎和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论:在狼疮肾炎组织中,Livin在mRNA和蛋白水平均高表达,提示Livin 基因在狼疮肾炎的发生发展中起重要作用.     

乙肝病毒X蛋白通过NF-kB信号能路对Livin基因的表达的影响

目的研究乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein,HBx）通过核因子-KB（Nuclear factor—kappa B,NF-KB）信号通路对Livin基因表达的影响。方法建立稳定转染HBx基因的L02（L02／HBx）细胞系,用NF-KB信号通路阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯（pyronidine dithiocarbamate,PDTC）阻断NF—KB信号通路。采用荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-KB信号通路的激活失活情况,同时用Real-time PCR和Western Blot检测转染前后及PDTC加入前后Livin基因的表达情况。结果转染HBx基因后NF—KB信号通路被激活,Livin基因表达明显上调（P〈0．05）;PDTC加入后NF．KB信号通路被阻断,Livin基因表达明显下调（P〈0．05）。结论NF—KB信号通路可能是HBx上调Livin基因的途径之一。     

肝癌组织中Livin蛋白的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨Livin蛋白在肝癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测78例肝癌及33例肝血管瘤旁正常肝组织中Livin蛋白的表达;光镜下计数阳性细胞数并根据不同临床特征进行统计学分析。结果:肝癌组织中Livin蛋白的表达明显高于正常肝组织（P＜0.001）;Livin蛋白的表达与患者的性别、年龄以及是否患有乙肝、丙肝、TNM临床分期均无明显关系，而与肝癌是否发生转移有明显关系;肝癌发生转移者Livin蛋白的表达率明显高于未转移者（P＜0.05）。结论:Livin蛋白的过度表达可能在肝癌的发生、发展中起重要作用，并与肝癌的转移密切相关。     

Livin靶向ASODN对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

目的：合成Livin靶向的反义核苷酸（ASODN）,观察其对前列腺癌PC3细胞凋亡和增殖等生物学特性的影响。方法：合成全硫代磷酸化修饰的LivinASODN并通过脂质体转染前列腺癌PC3细胞。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,采用RT—PCR检测转染后Livin基因mRNA的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡效应,采用体内成瘤实验比较细胞在裸鼠体内成瘤性的变化,采用激酶法测定Caspase-3活性的变化。结果：LivinASODN转染PC3细胞后,与对照组相比,实验组细胞内LivinmRNA的表达水平下调（P〈O．01）;细胞的增殖受到显著抑制（P〈O．01）;细胞凋亡率明显增高（P〈O．01）;肿瘤细胞在荷瘤鼠体内的成瘤体积小于对照组（P〈O．05）;Caspase-3活性明显增加（P〈0．05）。结论：靶向Livin基因的ASODN干扰了前列腺癌PC3细胞中Livin基因的表达,抑制了细胞的增殖并诱导其凋亡,延缓了肿瘤细胞的生长。