白藜芦醇抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7的激活

目的探讨白藜芦醇(Res)对脂多糖(LPS)诱导的破骨前体细胞Raw 264.7细胞系释放炎性细胞因子的抑制作用。方法采用LPS刺激Raw 264.7细胞构建炎症模型,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定细胞,采用MTT检测Res对Raw 264.7细胞的毒性影响,免疫荧光双标以及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度Res(1μmol/L和5μmol/L)对细胞炎性因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)与细胞炎性蛋白酶:诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧合酶-2(COX-2)、炎性信号蛋白核因子-κB(NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化。结果不同浓度的Res(1μmol/L和5μmol/L)在翻译水平和转录水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶i NOS和COX-2表达,同时了抑制细胞炎性因子IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调。结论 Res可能通过NF-κB调控LPS诱导的Raw 264.7细胞炎性细胞因子的释放进而抑制破骨前体细胞的激活,进而具有抗骨质疏松的作用。     

三七皂苷Rg1抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活

目的 探讨三七皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞系BV-2细胞炎性因子释放的抑制作用.方法 用LPS刺激BV-2细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测Rg1对BV-2细胞活力的影响,免疫荧光染色和反转录PCR方法检测不同浓度Rg1(10、20、40μmol/L)对细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2 (COX-2)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、炎性信号分子NF-κB蛋白与mRNA的表达变化.结果 不同浓度的Rg1在转录水平和翻译水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶iNOS和COX-2、细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号分子NF-κB的上调,并且iNOS、COX-2和NF-κB的表达呈剂量依赖性.结论 Rg1可通过调控LPS诱导的小胶质细胞系BV-2细胞炎性因子释放从而抑制小胶质细胞激活,发挥抗神经炎症的作用.     

IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞增殖、凋亡及细胞外基质相关蛋白表达的影响

目的:探讨组蛋白去甲基化酶抑制剂IOX1(5-羧基-8-羟基喹啉)提高组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)水平对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肝星状细胞株LX2增殖、凋亡及细胞外基质合成和代谢的影响。方法:采用实时无标记细胞分析技术动态观察不同浓度IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞增殖的影响。采用流式细胞术观察IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞凋亡的影响。Western blot检测细胞中H3K9me2水平,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col I)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,不同浓度的IOX1均能抑制LX2细胞增殖。流式细胞术结果表明,IOX1能够促进LX2细胞凋亡(P<0.05)。Western blot结果发现,IOX1能提高LX2中H3K9me2水平,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,300μmol/L IOX1能够明显抑制TGF-β诱导的LX2细胞中α-SMA、TIMP-1和Col I蛋白的表达(P<0.05),MMP-1蛋白的表达在不同浓度IOX1组中表现为上升趋势(P<0.05)。结论:IOX1可抑制TGF-β诱导的LX2细胞增殖并促进细胞凋亡,还可通过提高H3K9me2水平调节细胞外基质的合成和代谢,从而发挥抗肝纤维化作用。     

山竹醇通过NF-κB信号通路抑制IL-1β诱导的髓核细胞炎症和细胞外基质降解

目的探讨山竹醇(Gar)对白介素-1β(IL-1β)诱导的髓核细胞炎症和细胞外基质降解的影响。方法提取大鼠髓核细胞,用含不同浓度山竹醇联合或者不联合IL-1β的新鲜培养基进行培养,根据细胞处理方式分为Control组、IL-1β组、IL-1β+Gar 2.5μM组、IL-1β+Gar 5μM组。采用MTT法检测大鼠髓核细胞活力,采用Western blot、定量RT-PCR和免疫荧光染色检测大鼠髓核细胞的基质代谢、炎症因子水平及相关信号通路蛋白。结果山竹醇在0~10μM剂量下对大鼠髓核细胞无细胞毒性;IL-1β可诱导髓核细胞活力降低(P<0.05),剂量为2.5~10μM的山竹醇能够改善IL-1β刺激下的髓核细胞活力(P<0.05)。IL-1β刺激后髓核细胞中MMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5 mRNA表达水平显著提高(P<0.05),而山竹醇能抑制IL-1β刺激后的髓核细胞中MMP-3、MMP-9、MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5 mRNA表达水平(P<0.05)。IL-1β下调了髓核细胞中ColⅡ和Aggrecan mRNA表达水平(P<0.05),而山竹醇则显著改善了IL-1β刺激下髓核细胞中ColⅡ和Aggrecan mRNA表达水平(P<0.05)。IL-1β可显著提高髓核细胞中TNF-α、IL-6、IL-8、COX-2和iNOS mRNA表达水平(P<0.05),而山竹醇可抑制IL-1β诱导的TNF-α、IL-6、IL-8、COX-2和iNOS mRNA表达水平(P<0.05)。Western blot结果显示,IL-1β激活了髓核细胞中的NF-κB信号通路,而山竹醇逆转了IL-1β对NF-κB p65的活化作用(P<0.05),同时逆转了IL-1β引起的IκBα蛋白水平降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,IL-1β刺激下髓核细胞核中发生p65核转移,山竹醇显著抑制了p65向核的转移。结论山竹醇可通过抑制NF-κB信号通路,减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞炎症反应,降低分解代谢水平,具有治疗椎间盘退行性变(IDD)的潜能。     

厚朴酚对骨关节炎的抗炎和软骨保护作用

目的探讨厚朴酚的体外抗炎活性和对碘乙酸单钠(MIA)诱导的骨关节炎(OA)的影响。方法脂多糖(LPS)处理的RAW264.7细胞中体外评价厚朴酚的抗炎作用,设立LPS组、厚朴酚不同浓度组(5、10、20μmol/L),以正常培养的细胞作为对照组,Griess试剂测量培养基中NO的累积;Western blot检测细胞iNOS、COX-2蛋白的表达。MIA诱导OA的SD大鼠模型,分为MIA组、厚朴酚不同浓度组(5、10、20 mg/kg),以正常大鼠作为对照组,取大鼠膝关节组织样本进行组织学分析,实时PCR分析大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-2、MMP-9和COX-2的mRNA表达;ELISA检测培养基上清液中PGE 2、IL-6及各组大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量。结果厚朴酚抑制LPS处理的RAW264.7细胞中的NO、PGE2和IL-6的产生(P0.05)。此外,厚朴酚抑制MIA诱导OA大鼠模型的IL-1β、TNF-α和IL-6的升高及MMP-2、MMP-9和COX-2的合成(P0.05)。结论厚朴酚在OA大鼠模型中发挥有效的抗炎活性并保护软骨。     

胆红素对脂多糖引起的腹膜炎及腹腔免疫细胞功能的影响

目的探讨胆红素(bilirubin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的腹膜炎中腹腔炎性因子分泌,以及腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞功能的影响。方法构建LPS诱导的小鼠腹膜炎模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠腹腔灌洗液上清液中炎性因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6)的含量;分离培养小鼠腹膜巨噬细胞并进行分组处理,培养Raw264.7细胞进行分组处理。采用MTT法检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞的活性;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测不同处理的腹膜巨噬细胞与Raw264.7细胞中Nlrp3和IL-1βmRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blot)检测不同处理的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1β和caspase-1蛋白表达,Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1β、IκBα和p-p65蛋白表达,以及Raw264.7胞质与胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p-p65蛋白在不同处理的Raw264.7细胞胞质与胞核中的表达情况。结果在LPS诱导的小鼠腹膜炎模型中,注射胆红素的小鼠腹腔灌洗液中IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的含量明显降低。10μmol/L胆红素处理腹膜巨噬细胞后对细胞活性无影响;10μmol/L胆红素预处理可以显著抑制脂多糖诱导的腹膜巨噬细胞中Nlrp3、IL-1βmRNA和Nlrp3、IL-1β、caspase-1蛋白的表达。5μmol/L、10μmol/L胆红素处理Raw264.7细胞后对细胞活性无影响;胆红素呈剂量依赖性地抑制脂多糖诱导的Raw264.7细胞中Nlrp3、IL-1βmRNA和蛋白表达水平,并抑制IκBα蛋白表达降低与p-p65蛋白表达升高;10μmol/L胆红素预处理抑制了脂多糖诱导的Raw264.7细胞核中p50、p65和p-p65蛋白表达升高以及p-p65从细胞质向细胞核的转移。结论胆红素可抑制脂多糖引起小鼠腹膜炎中腹腔灌洗液中炎性因子的分泌,并抑制腹膜巨噬细胞和Raw264.7细胞中Nlrp3炎性体活化,该作用可能是通过抑制NF-κB通路激活实现的。     

甲基莲心碱对脑缺血再灌注脑损伤的调节作用

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对缺血再灌注脑损伤大鼠脑保护作用及其机制.方法线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CI/R)模型.造模后对大鼠神经功能进行评分;HE检测病理损伤;检测血清MDA、SOD和LDH含量;TUNEL检测脑细胞凋亡;RT-PCR检测Caspase-3、-9 mRNA表达;免疫组化检测脑组织ICAM-1表达;ELISA检测IL-6、IL-18和IL-1β的含量;蛋白印迹检测TLR4、NF-κB P65(核)和MIP-2表达.结果甲基莲心碱能有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能(P<0.01),减少造模诱导的脑组织病理损伤;减少MDA和LDH含量(P<0.01),增加SOD活性(P<0.01);减少脑组织细胞凋亡率(P<0.01),下调凋亡相关蛋白Caspase-3、-9 mRNA表达水平(P<0.01);降低促炎因子(ICAM-1)、炎性因子(IL-6,IL-18,IL-1β)和炎性蛋白(TLR4,NF-κB P65,MIP-2)在脑组织中的表达水平(P<0.01).结论甲基莲心碱能对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织起保护作用,其机制与减少凋亡及抑制炎性反应有关.     

CDC对胰岛β细胞中COX-2表达及PGE2生成的影响

目的观察12/15脂氧合酶抑制剂CDC对大鼠胰岛β细胞中环加氧酶2(COX-2)的表达及前列腺素E2(PGE2)生成的影响,并初步探讨其机制。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞,加入细胞因子IL-1β诱导COX-2蛋白的表达,然后采用Western印迹的方法观察12/15脂氧合酶抑制剂cin-naminyl-3,4-dihydroxy-α-cyanocinnamate(CDC)对COX-2蛋白表达的影响;借助萤光素酶报告基因技术检测CDC对COX-2启动子转录活性的影响,最后用放射免疫法了解CDC对胰岛β细胞中PGE2生成的抑制作用。结果细胞因子IL-1β能够在大鼠胰岛β细胞系INS-1中诱导COX-2基因的表达,而12/15脂氧合酶抑制剂CDC能够呈剂量依赖抑制IL-1β所诱导的COX-2蛋白的表达。结论12/15脂氧合酶抑制剂能够明显抑制炎性因子IL-1β所诱导的胰岛β细胞中COX-2的表达和炎性介质PGE2的生成。     

甜叶悬钩子苷通过NF-κB和MAPK信号通路抑制小鼠神经炎症细胞模型炎症反应

目的：通过体外实验探究甜叶悬钩子苷(RUB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及改善机制。方法：采用CCK-8法检测RUB对BV-2细胞活力的影响;使用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立神经炎症细胞模型,用不同浓度RUB进行干预,将BV-2细胞分为对照组、LPS模型组及LPS+RUB(25、50和100μmol/L)干预组,采用ELISA法检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RTqPCR法检测促炎细胞因子环加氧酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot法检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光染色观察细胞中p65的表达情况。结果：与对照组相比,LPS诱导后细胞上清液中IL-1β和TNF-α的分泌量增加(P<0.01),促炎细胞因子COX-2、iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA水平显著增加(P<0.01),NF-κB和MAPK信号通路蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),且p65出现荧光...     

lncRNA LEF1-AS1通过miR-212-5p影响IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌

为探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)淋巴增强因子1反义RNA 1(lymphatic enhancer factor 1 antisense RNA 1,LEF1-AS1)靶向miR-212-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子分泌的影响，采用qRT-PCR分析骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者软骨细胞中LEF1-AS1和miR-212-5p的表达。用10 ng/mL的IL-1β处理人正常软骨细胞建立体外OA细胞模型。运用FACS分析软骨细胞凋亡率；ELISA检测培养上清液中IL-6、TNF-α、IFN-γ水平；qRT-PCR检测LEF1-AS1和miR-212-5p表达水平。同时，将LEF1-AS1小干扰RNA、miR-212-5p模拟物转染软骨细胞，并检测抑制LEF1-AS1或过表达miR-212-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。qRT-PCR和双荧光素酶报告基因试验分析LEF1-AS1与miR-212-5p的靶向关系。结果显示，IL-1β处理显著增加软骨细胞的凋亡率(P<0.05),...     

CysLT2受体拮抗剂HAMI3379抑制LPS诱导小鼠小胶质瘤细胞系的炎性反应

目的探究半胱氨酰白三烯2(CysLT2)受体拮抗剂HAMI3379对LPS诱导小鼠小胶质细胞(BV-2)炎性反应的调控作用及其可能的作用机制。方法体外培养BV-2,将BV-2分为对照组、LPS(100 ng/mL)组、HAMI3379(0.01、0.1和1μmol/mL)组和LPS+HAMI3379组。CCK-8法检测BV-2细胞的增殖;ELISA检测细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10的含量;Western-blot检测PKCα、IKBα、NF-κB p50和p65蛋白的表达。结果LPS能够激活BV-2细胞,促进其细胞的增殖(P<0.05);显著增加细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α的分泌,减少IL-10的分泌(P<0.05);且显著上调PKCα、IKBα、p65蛋白的表达水平(P<0.05)。CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够显著减轻上述变化(P<0.05)。结论CysLT2受体拮抗剂HAMI3379能够抑制LPS激活BV-2细胞,抑制炎性反应,其作用机制可能与抑制PKCα/NF-κB信号通路有关。     

IL-6促进小鼠小胶质细胞系BV2坏死性凋亡

目的 探究在神经炎性反应中小胶质细胞凋亡的调控机制。方法 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠小胶质细胞系BV2,构建神经炎性反应细胞模型,使用白介素-6(IL-6)拮抗剂塞妥昔单抗(siltuximab)处理LPS诱导的BV2细胞。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6与TNF-α含量;RT-qPCR检测BV2细胞M1极化标志物IL-1β、IFN-γ与M2极化标志物CD206、Arg-1表达;Western blot检测JAK-STAT3信号通路关键蛋白及坏死性凋亡相关蛋白(RIP1)和RIP3表达。结果 LPS诱导后BV2细胞的增殖活力下降,凋亡增加,炎性因子IL-6与TNF-α含量增加(P<0.01)。M1极化标志物IL-1β、IFN-γ表达增加(P<0.01),M2极化标志物CD206、Arg-1表达减少(P<0.01)。JAK-STAT3通路关键蛋白磷酸化增加(P<0.01),RIP1、RIP3蛋白表达增加(P<0.01)。IL-6拮抗剂siltuximab处理细胞后,JAK-ST...     

粉防己碱减轻IL-1β诱导的体外人关节软骨细胞损伤

目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响。方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置6个重复。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎性相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的水平以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性;Western blot检测细胞中HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果 与对照组相比,IL-1β组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均升高,细胞存活率、SOD和GPx活性均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组相比,2-ME2组和Tet低、中、高浓度组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均降低,细胞存活率、SOD...     

IL—10抑制人肾系膜细胞环氧化酶—2及其介导的前列腺素E2的释放

目的观察白细胞介素-10(IL-10)对IL-1β诱导的人系膜细胞(HMC)前列腺素E2(PGE2)释放及环氧化酶-2(COX-2)基因和蛋白表达的影响.方法应用放射免疫测定法检测HMC培养上清中PGE2,应用RT-PCR和westernblot检测COX-2mRNA和蛋白水平.结果①IL-1β显著上调PGE2释放及COX-2基因和蛋白的表达(P均＜0.01);②IL-10对基础状态下PGE2释放及COX-2基因和蛋白表达无明显影响(P＞0.05);③IL-10可呈剂量依赖性地下调IL-1β诱导的PGE2释放及COX-2mRNA和蛋白表达(P＜0.01).结论IL-10抑制IL-1β诱导的HMCPGE2释放及COX-2表达,提示IL-10对HMC具有多方面抗炎作用.     

莪术醇抑制人骨肉瘤细胞系的增殖和促凋亡

目的 探究莪术醇对人骨肉瘤细胞系MG-63和U2OS体外增殖、凋亡的影响和作用机制。方法 将MG-63细胞和U2OS细胞分为对照组、莪术醇20、40、80和160μmol/L干预组;MTT法检测MG-63、U2OS细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞测量细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、caspase和β-catenin的mRNA和蛋白表达。结果 莪术醇呈浓度依赖性地抑制MG-63和U2OS细胞增殖,IC₅₀值分别为128.03μmol/L、117.95μmol/L。与对照组相比,莪术醇显著抑制MG-63、U2OS细胞的体外迁移和侵袭(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,莪术醇组促进Bax、caspase 3表达,抑制Bcl2表达(P<0.05),MG-63、U2OS细胞内β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达均被显著抑制(P<0.05)。结论 莪术醇显著抑制人骨肉瘤细胞系MG-63、U2OS增殖,诱导细胞凋亡。     

白桦脂醇对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的探讨白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用。方法 MTT法预实验证实10μmol/L Aβ_(25-35)的浓度对细胞活力无影响,但是影响炎症因子分泌,遂以10μmol/L Aβ_(25-35)作用于BV2细胞,实验随机分为对照组、模型组、白桦脂醇5、10和20μmol/L组,采用MTT法检测细胞的存活率、Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白(NF-κB P65、IκBα、p-NF-κB P65、p-IκBα)表达水平及炎症诱导酶环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的水平,以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10水平。结果 Aβ_(25-35)浓度为10μmol/L时,对BV2细胞存活率无影响。白桦脂醇浓度在0～20μmol/L时低毒性、细胞活力无变化。白桦脂醇预处理组IκBα、NF-κB P65的蛋白表达水平升高,p-NF-κB P65和p-IκBα的蛋白表达水平显著降低,COX-2、iNOS的水平显著降低,促炎因子IL-1β、TNF-α的表达降低,而抑炎因子IL-10的表达升高。结论白桦脂醇对Aβ_(25-35)诱导的BV2细胞的炎症反应有抑制作用,通过NF-κB信号通路,抑制iNOS及COX-2蛋白表达,并抑制TNF-α和IL-1β水平,提高IL-10水平。     

咪达普利拉对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2和抑制剂-2的作用及机制研究

目的：研究血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI）咪达普利活性代谢物咪达普利拉对白细胞介素－1β（interleukin -1β，IL-1β）诱导的心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）和基质金属蛋白酶2型抑制剂（type 2 tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP-2）表达的影响及其可能机制。方法:原代人心脏成纤维细胞从美国细胞应用所购买。用RT-PCR检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-2 mRNA水平的变化；用凝胶酶谱法分析心脏成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的活性；用Griess方法检测培养上清一氧化氮（nitric oxide，NO）水平。结果:通过凝胶酶谱分析，RT-PCR和Griess方法发现IL-1β能显著增加MMP-2基因转录以及活性(P<0.05)，同时也显著增加了细胞培养上清中NO的产生(P<0.05)。IL-1β的这些效应可以被咪达普利拉和外源性NO合酶抑制剂L-单甲基精氨酸（NG-methyl L-Arginine，L-NMMA）所抑制(P<0.05)，而外源性NO供体亚硝基铁氰化钠(sodium nitroprusside，SNP）可以取消咪达普利拉对于NO、MMP-2的有效作用(P<0.05)。实验中发现IL-1β以及咪达普利拉对TIMP-2基因转录无明显作用(P>0.05)。结论:咪达普利拉能通过NO途径抑制IL-1β诱导的心脏成纤维细胞MMP-2的合成和活性；提示ACEI抗心肌重塑以及心力衰竭的部分作用可能是通过MMPs途径实现的。     

氯喹对体外活化肝星状细胞自噬与胶原代谢的影响

目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制。方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h。实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+CQ(15μmol/L)组、TGF-β1+CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+CQ(60μmol/L)组。采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-q PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化。结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+CQ组均显著高于TGF-β1组(P0.01)。TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加。α-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+CQ组均显著高于control组(P0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+CQ各组之间无显著差异。MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。结论:自噬抑制剂CQ能显著增加HSC-T6细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达并呈剂量依赖性,这可能与其上调TIMP-1及TIMP-2的表达并抑制MMP-13表达有关。     

党参多糖调控miR-361-5p/TLR4/NF-κB通路对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的 探讨党参多糖对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响和机制。方法 采用CCK-8实验、流式细胞术评估党参多糖（10、20、40μmol/L）对胃癌细胞AGS活力和凋亡的影响。RT-qPCR检测miR-361-5p表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β分泌。蛋白质免疫印记法检测TLR4和磷酸化核因子（NF）-κBp65(p-p65)和磷酸化NF-κB抑制蛋白-α(p-IκBα)蛋白的表达。将miR-361-5p模拟物、miR-361-5p抑制物分别转染AGS细胞,经40μmol/L党参多糖处理后,用上述方法检测AGS细胞活力、凋亡率、Toll样受体4(TLR4)、p-p65和p-IκBα蛋白表达以及TNF-α、IL-6、IL-1β分泌。结果 10、20、40μmol/L党参多糖显著降低AGS细胞活力（P<0.05）,增加细胞凋亡率（P<0.05）,抑制TNF-α、IL-6、IL-1β分泌（P<0.05）,并上调miR-361-5p表达水平（P<0.05）。40μmol/L党参多糖明显降低TLR4、p-p65...     

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。