阿托伐他汀对LPS诱导人血管内皮细胞IκBα表达的影响

目的通过观察阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞IκBα表达的影响来探明其抑制核因子κB活性的机制。方法将培养的人血管内皮细胞株ECV304,分为对照组、LPS组、阿托伐他汀低、中、高3个浓度组。阿托伐他汀3组加入不同阿托伐他汀孵育后与LPS组均加入LPS刺激30min。用免疫荧光法观察核因子κB活化情况,用逆转录-聚合酶链反应观察IκBα mRNA的表达情况,用蛋白印迹法观察IκBα及p-IκBα蛋白含量的变化。结果阿托伐他汀3组能够抑制p65由胞质转移至核内、能够剂量依赖性的降低pIκBα蛋白表达、减少IκBα的降解;阿托伐他汀高浓度组IκBα mRNA的表达增加。结论阿托伐他汀可以通过影响IκBα的表达和降解来抑制核因子κB活性。     

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质中核因子-κB表达的影响

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质核转录因子-κB(NF-κB)的动态表达及阿托伐他汀对其的影响。方法将45只大鼠随机分为假手术组、模型组及阿托伐他汀治疗组(简称阿乐组),后两组行左侧输尿管结扎术。阿乐组术前3d开始阿托伐他汀(10mg·kg^-1·d^-1)灌胃,余两组予等量生理盐水灌胃。术后第5,10,15天分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和M asson染色动态观察肾脏病理改变,并用免疫组化方法检测肾小管间质中NF-κB p65的动态表达。结果组织病理显示模型组呈现进行性肾间质面积增宽,纤维化程度加重。免疫组化结果显示假手术组大鼠肾组织中仅见极少部分的肾小球系膜细胞和肾皮质远曲小管上皮细胞表达较弱的NF-κB p65,主要位于细胞浆,各时间点的表达无明显差异。模型组大鼠肾NF-κB p65的表达主要位于肾近曲小管和远曲小管上皮细胞浆和核中,其中以胞核表达为多,表达量较假手术组明显增加(P<0.01),其表达随梗阻时间的延长逐渐增多。阿乐组肾小管间质中NF-κB p65虽较假手术组明显增加(P<0.01),但均较同期模型组有不同程度的减少(P<0.01)。结论UUO模型大鼠肾小管间质NF-κB的表达明显增加,阿托伐他汀可下调NF-κB的表达,其改善肾小管间质纤维化作用可能与抑制NF-κB的活性有关。     

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质中核因子-κB表达的影响

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质核转录因子-κB(NF-κB)的动态表达及阿托伐他汀对其的影响。方法将45只大鼠随机分为假手术组、模型组及阿托伐他汀治疗组(简称阿乐组),后两组行左侧输尿管结扎术。阿乐组术前3d开始阿托伐他汀(10mg.kg-1.d-1)灌胃,余两组予等量生理盐水灌胃。术后第5,10,15天分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和M asson染色动态观察肾脏病理改变,并用免疫组化方法检测肾小管间质中NF-κB p65的动态表达。结果组织病理显示模型组呈现进行性肾间质面积增宽,纤维化程度加重。免疫组化结果显示假手术组大鼠肾组织中仅见极少部分的肾小球系膜细胞和肾皮质远曲小管上皮细胞表达较弱的NF-κB p65,主要位于细胞浆,各时间点的表达无明显差异。模型组大鼠肾NF-κB p65的表达主要位于肾近曲小管和远曲小管上皮细胞浆和核中,其中以胞核表达为多,表达量较假手术组明显增加(P<0.01),其表达随梗阻时间的延长逐渐增多。阿乐组肾小管间质中NF-κB p65虽较假手术组明显增加(P<0.01),但均较同期模型组有不同程度的减少(P<0.01)。结论UUO模型大鼠肾小管间质NF-κB的表达明显增加,阿托伐他汀可下调NF-κB的表达,其改善肾小管间质纤维化作用可能与抑制NF-κB的活性有关。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞IκB和NF-κB表达的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核因子(NF)-κB的表达、激活的影响及其诱导动脉粥样硬化形成的分子机制。方法:将体外培养的HUVECs分为对照组、2.5(H1)、5(H2)、10(H3)及15mmol/L(H4)5组,培养24h。通过四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测NF-κBp65mRNA的表达,Westernblot检测NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)的蛋白降解,免疫组化法检测NF-κB的核转移趋势。结果:H2、H3、H4组HUVECs细胞活力较对照组明显下降(P<0.01);Hcy可使NF-κBp65mRNA的表达明显增强(P<0.05或P<0.01);Hcy可促进IκB-α蛋白降解,且呈现明显的剂量依赖性;Hcy处理HUVECs后,大量的NF-κBp65从细胞质进入细胞核。结论:Hcy可通过增强NF-κBp65mRNA的表达,加速IκB-α蛋白的降解,促进NF-κBp65的释放、活化,从而转移进细胞核,调节其下游的趋化因子、细胞黏附分子的表达,促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

Ghrelin通过核因子-κB抑制肿瘤坏死因子-α诱导的HepG2细胞PAI-1 mRNA表达

目的探讨Ghrelin对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HepG2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA表达的影响及核因子-κB(NF-κB)在其中的作用.方法HepG2细胞培养,加入不同浓度TNF-α,采用逆转录-聚合酶链反应测定(RT-PCR)检测PAI-1 mRNA的水平;免疫印迹法检测胞浆胞核NF-κBp65和胞浆κB抑制蛋白(IκB)的表达.给予Ghrelin预处理1 h后,加入TNF-α检测NF-κKBp65和IκB表达的变化.结果TNF-α(0.1,1,10μg·L-1)浓度依赖地增高HepG2细胞PAI-1 mRNA的表达;Ghrelin组的PAI-1 mRNA表达减少.TNF-α组胞核NF-κBp65表达增加,胞浆IκBα的表达减少;Ghrelin组较TNF-α组胞核NF-κBp65减少,胞浆IκBα的表达增加.结论TNF-α通过NF-κB介导HepG2 PAl-1mRNA的表达;Ghrelin通过抑制NF-κB而抑制TNF-α诱导PAI-1mRNA的表达.     

阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白刺激下脂肪细胞分泌功能的影响

目的 观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下3T3-L1脂肪细胞分泌功能的影响,并探讨其作用机制.方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL刺激脂肪细胞,给予不同浓度的阿托伐他汀干预,收集细胞,测定脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度、TNF-α和PPAR-γ mRNA表达水平及核因子-κB(NF-κB)活性.结果 oxLDL刺激使3T3-L1脂肪细胞分泌TNF-α、TNF-α mRNA表达水平明显增高.阿托伐他汀呈浓度依赖性抑制oxLDL刺激下TNF-α分泌、TNF-α mRNA表达和NF-κB活化,并增强PPAR-γ mRNA表达.1.0及10.0 μM阿托伐他汀干预组TNF-α水平、TNF-α mRNA表达低于oxLDL刺激组(P＜0 05),10.0 μM阿托伐他汀干预组PPAR-γ mRNA表达高于oxLDL组,NF-κB活性低于oxLDL刺激组(P＜0 05);TNF-α水平、TNF-α mRNA表达、NF-κB活性和PPAR-γ mRNA表达10.0和0.1 μM阿托伐他汀干预组比较差异均有统计学意义(P＜0 05).结论 阿托伐他汀能抑制oxLDL刺激下3T3-L1脂肪细胞TNF-α分泌、TNF-α mRNA表达和NF-κB活性,增强PPAR-γ mRNA表达,PPAR-γ与NF-κB可能介导了他汀类药物对脂肪细胞炎性过程的调节.     

异甘草酸镁对成纤维细胞NF-κB信号通路活性的影响

目的:研究异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)对成纤维细胞核因子-kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路活性的影响。方法:实验分6组,为空白对照组、TNF-α模型组、地塞米松(dexamethasone,DEX)阳性对照组和0.1、1、10mg/ml的MgIG组。DEX组和MgIG组分别给予DEX(1μg/ml)和MgIG(0.1、1、10mg/ml)预处理4h后,除对照组外,其余5组加入TNF-α(20ng/ml)作用1.5h。提取细胞核蛋白,以免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白质表达。提取总RNA,用实时PCR技术检测细胞内IκBαmRNA表达。成纤维细胞经DEX和MgIG预处理4h后加入TNF-α作用24h(浓度同上),用报告基因技术检测NF-κB基因表达。结果:成纤维细胞经TNF-α作用1.5h后,细胞核内NF-κB p65蛋白质表达量明显增加,IκBαmRNA表达上调;TNF-α作用24h后,NF-κB基因上调。DEX预处理4h,可以明显减少TNF-α引起的核内NF-κB p65蛋白质表达和细胞内IκBαmRNA表达,明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达。MgIG处理成纤维细胞4h后,能够明显降低TNF-α作用1.5h后核内NF-κB p65蛋白质表达量,但对IκBαmRNA表达水平无明显影响。1、10mg/ml的MgIG能够明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达水平。结论:MgIG的抗炎作用与抑制NF-κB p65转位入核和NF-κB基因表达,从而抑制NF-κB信号通路活性相关,但与DEX不同的是MgIG不能改变IκBαmRNA表达水平。     

核因子-κB p65与心肌素在子宫肌瘤中的表达及作用机制

目的探讨核因子(NF)-κB p65亚型和心肌素在子宫肌瘤发生中的作用机制。方法蛋白印迹法检测29例子宫肌瘤和相应肌层组织以及15例原代子宫肌瘤细胞和相应肌层细胞中NF-κB p65、心肌素的表达;RNA干扰技术抑制子宫肌瘤细胞中NF-κB p65基因表达,光镜观察细胞生长状况,蛋白印迹法检测干扰后子宫肌瘤细胞中NF-κB p65和心肌素的表达。结果与正常肌层相比,子宫肌瘤组织和细胞中的NF-κB p65相对表达量增高(P<0.05),而心肌素的相对表达量降低(P<0.05)。RNA干扰后,与未转染的子宫肌瘤细胞相比,NF-κB p65的相对表达量降低(P<0.05),而心肌素的表达量相对增高(P<0.05)。结论 NF-κB p65与心肌素可能相互作用共同参与了子宫肌瘤的形成。     

甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达及意义

目的 探讨甲状腺癌组织中核因子-κB (NF-κB) p65、NF-κB p50及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平及临床意义.方法 选择解放军171医院2013年1月-2015年12月切取的甲状腺组织标本212例进行研究,其中甲状腺癌组织122例,甲状腺腺瘤组织30例,甲状腺肿组织30例,正常甲状腺组织30例,比较各组NF-κBp65、NF-κB p50及HMGB1表达,并分析其与甲状腺癌临床特征的关系,以及三者之间的相关性.结果 甲状腺癌组、甲状腺腺瘤组和甲状腺肿组的HMGB1、NF-κB p50和NF-κB p65阳性率均高于正常甲状腺组(P＜0.01),甲状腺癌组和甲状腺腺瘤组均高于甲状腺肿组(P＜0.01),甲状腺癌组高于甲状腺腺瘤组(P＜0.01).肿瘤直径≥1.0 cm和有淋巴结转移的甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达阳性率高(P＜0.01,P＜0.05).NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1三者间呈显著正相关(r=0.356、0.645和0.275,P＜0.05).结论 甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1均呈高表达,并且与肿瘤直径和淋巴结转移有关.     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化。结果:①荧光显微镜观察:分别作用45min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白。免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P<0.05);免疫印迹结果也显示,作用45min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性。结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活。TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用。     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合阿托伐他汀对冠心病患者外周血单个核细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达的影响

目的：观察冠心病患者外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB 的表达,分析丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀对其表达的影响,以 TLR4炎症信号通路为靶点探讨丹参酮ⅡA 磺酸钠治疗冠心病的可能机制。方法选取诊治的冠心病患者160例,同期进行健康体检的正常人100例作为对照。采用 Real time-PCR 和 Western blot 测定外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。160例冠心病患者随机分为观察 A 组和观察 B 组,每组80例。观察 A 组在常规治疗基础上给予阿托伐他汀治疗,观察 B 组在观察 A 组基础上加用丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液,疗程均为30 d,比较2组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平。结果与对照组比较,冠心病患者组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平显著升高（ P ﹤0.05）。TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白表达与 hs-CRP、TNF-α呈正相关（ r ＝0.761和0.802,0.699和0.774,0.835和0.749,P 均﹤0.05）。与治疗前比较,治疗后观察 A 组和观察 B 组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低（ P ﹤0.05）;但观察 B 组降低程度更明显（ P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀通过抑制外周血单个核细胞 TLR4炎症信号通路的激活发挥抗炎作用,可能是丹参酮ⅡA 磺酸钠发挥治疗作用的机制之一。     

NF-κB p65 siRNA对延迟性排斥反应的抑制作用

目的 探讨核因子kappa B(NF-κB) p65的小干扰RNA (siRNA)对延迟性排斥反应的抑制作用.方法血管内皮细胞(EOMA)分为7组:A组(空白对照),B组(阴性对照),C组(TNF-α处理),D组(siRNA处理),E组(scramble siRNA处理),F组(TNF-α+ siRNA处理),G组(TNF-α+scramble siRNA处理).用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65 siRNA转染入相应的EOMA细胞,24 h后在C组、F组和G组中加入TNF-α(终浓度为20 ng/ml).于TNF-α加入后的6h提取各组细胞总RNA,RT-PCR法测定EOMA细胞内E选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素1α(IL-1α)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平.结果 F组EOMA细胞内E-selectin、ICAM-1、IL-1α和VCAM-1表达明显高于A组,的明显低于C组和G组(P＜0.01).结论 特异性siRNA抑制NF-κB p65表达可以有效抑制延迟性排斥反应.     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TLRs/NF-κB通路相关因子表达的影响

目的:观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:将大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、柳氮磺吡啶肠溶片(SASP,阳性对照,0.3 g/kg)和半夏泻心汤低、中、高剂量组(3.9、7.8、11.7 g/kg),每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均采用三硝基苯磺酸-乙醇法复制UC模型。成模后,ig给药,每天1次,连续3周。给药结束后,检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,其余各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);半夏泻心汤具有一定的剂量依赖性,且高剂量组大鼠结肠组织中上述水平的降低程度均高于SASP组(P<0.05)。结论:半夏泻心汤可下调UC大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α及TLR4 mRNA及蛋白的表达,这可能是其治疗UC的作用机制之一。     

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

核因子-κB特异性抑制剂小白菊内酯在大鼠心肌组织的药效时间

目的观察核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂小白菊内酯(PTN)在大鼠心肌组织中的药效作用时间。方法健康雄性SD大鼠40只随机分为5组:空白对照组、PTN组、二甲亚砜(DMSO)组、脂多糖(LPS)组和PTN+LPS组。第1天:PTN组、DMSO组和PTN+LPS组大鼠分别腹腔内注射PTN(500μg/kg)和PTN溶剂DMSO(相等容量);其余各组腹腔内注射相等容量的生理盐水。第2天(即PTN注射后24 h):LPS组和PTN+LPS组大鼠经皮下注射LPS(12.5 mg/kg);其余各组经皮下注射相等容量的生理盐水。每组在相当于注射LPS后1 h时取出心脏,采用Westernblot法分析心肌细胞细胞核内NF-κB p50和细胞浆中抑制蛋白(IκBα)、磷酸化抑制蛋白(p-IκBα)表达变化。结果与空白对照相比,PTN组和DMSO组NF-κB p50I、κBα和p-IκBα表达差异无统计学意义,而LPS组和PTN+LPS组NF-κBp50表达上调(P<0.05),IκBα表达下调(P<0.05),p-IκBα表达上调(P<0.05)。结论LPS刺激可在1 h内激活NF-κB,PTN(500μg/kg)在大鼠体内代谢24 h后未见明显药效。     

活化蛋白C通过NF-κB抑制TNF-α介导的炎症反应

目的观察活化蛋白C(APC)是否能够通过核因子-κB(NF-κB)途径抑制TNF-α介导的炎症反应。方法分离培养正常组、TNF-ɑ组、TNF-ɑ+rhAPC组的人脐静脉内皮细胞细胞(HUVECs)。用ELISA法,检测细胞上清液中的细胞内粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)及选择素浓度。用逆转录聚合酶链反应、Western bloting技术检测HUVECs NF-κBmRNA、NF-κB蛋白的表达。结果细胞上清液中ICAM-1、VCAM-1及E选择素浓度,TNF-ɑ组较正常组显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组显著降低(均P<0.05)。HUVECs NF-κB mRNA、蛋白表达水平,TNF-ɑ组较正常组均显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组均显著降低(均P<0.05)。结论 APC通过抑制黏附分子的产生来调节TNF-α介导的炎症反应,其可能是通过NF-κB途径来实现。     

芍药总苷调控巨噬细胞核因子-κB p65蛋白核转移作用的研究

目的:研究芍药总苷调控巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)p65蛋白核的转移作用,探讨芍药总苷对NF-κB活化的影响。方法:原代培养大鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖和芍药总苷作用后,用Western blot方法观察NF-κB亚基p65蛋白在胞浆和胞核的表达。结果:经脂多糖刺激后,p65蛋白在胞浆中表达显著减少,在胞核中表达显著增多;芍药总苷显著增加了脂多糖刺激后p65蛋白在胞浆中的表达,并减少了其在胞核内的表达。结论:芍药总苷可抑制NF-κB p65蛋白从胞浆向胞核的转移,提示其具有抑制NF-κB活化的作用。     

异丙酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤时核因子-κB信号途径的影响

目的观察异丙酚对大鼠在体心肌缺血/再灌注时核因子-κB(NF-κB)信号途径的影响,以探讨异丙酚的心肌保护作用机制。方法阻断大鼠左冠状动脉前降支30min,再灌注2h引起心肌缺血/再灌注损伤。60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)和异丙酚3、6、12mg·kg-1·h-1组。分别于缺血前、缺血30min末、再灌注2h末记录心率、平均动脉压,并计算心率-血压指数。ELISA及放射免疫法分别测定血清、心肌中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的含量。分别用原位杂交法(ISH)和半定量RT-PCR法检测心肌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、粘附分子1(ICAM-1)的mRNA的表达。免疫组化染色分析心肌组织中NF-κB的核移位,Western blot检测心肌组织NF-κB的表达量。结果缺血/再灌注后各组大鼠的平均动脉压、血压-心率指数均呈进行性下降(与Sham组相比P<0.05)。异丙酚12mg·kg-1·h-1组在缺血/再灌注后的平均动脉压和血压-心率指数明显高于I/R组(P<0.05)。与Sham组相比,I/R组NF-κB活化,明显从细胞质移位于细胞核,表达量也增加(P<0.05);血清、心肌中TNF-α、IL-1β含量明显升高(P<0.01),心肌中iNOSmR-NA、ICAM-1 mRNA表达增强(P<0.01)。而异丙酚6、12mg·kg-1·h-1组,NF-κB从细胞质向细胞核的移位被明显限制,NF-κB的表达量也明显低于I/R组(均P<0.05);血清、心肌中TNF-α、IL-1β含量明显较I/R组降低(P<0.05),心肌中iNOS mRNA、ICAM-1 mRNA表达减弱(与I/R组相比,P<0.05,P<0.01)。结论异丙酚能减轻缺血/再灌注损伤,同时明显抑制心肌缺血/再灌注时NF-κB的活化,阻断NF-κB相关信号通路的传导,下调TNF-α、IL-1β、ICAM-1和iNOS等炎症相关因子的表达。