单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1／HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法，鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白，存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上，其编码基因定位于长单一序列(UL)上，在0.490～0．564遗传单位之间，与已报道的HSV-2蛋白编码基因元重叠，因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

单纯疱疹病毒1型约105000道尔顿糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和用单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV—2)型间重组林作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)1A12目标抗原是一分子量约为105,000道尔顿的糖蛋白,存在于HSV—1感染的BHK细胞提取物中,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.640-0.682遗传单位之间。由于该糖蛋白的编码基因与gC编码基因部分重叠,因此该糖蛋白可能是gC的另一种形式。     

单纯疱疹病毒单克隆抗体靶抗原的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法.鉴定单纯疤疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体(McAb)1D10的靶抗原是一分子量约为60000道尔顿的糖蛋白,另6株McAbs 1A12、Mad-2、2D11,CM—D3、2A8及1C4的靶抗原的分子量在105000～130000之间。用McAbs与HSV-1/HSV-2型间重组株作物理图谱的方法.定位出这些McAbs靶抗原的基因。McAb 1D10的靶抗原的编码基因定位于短单一序列(Us)上,在0.912～0.976遗传单位之间,这一区域与gD编码基因重叠,故认为是gD。另6     

放射免疫沉淀试验鉴定单纯疱疹病毒糖蛋白C

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1/HSV-2)型间重组株作物理谱图的方法.鉴定出抗HSV的单克隆抗体(McAb) 1A12、Mad-2、2D11、CM-D3、2A8和1C_4的靶抗原是一组分子量在105～130Ka之间的糖蛋白,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.536～0.682遗传单位之间,与gC的编码基因部分重叠。故认为这些McAbs的靶抗原为gC,其中,Mad-2和CM-D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性,其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明,4株型共同性McAbs 1A12、2D11、2A8和1C4.抗gC上4个独立的抗原位点。     

单纯疱疹病毒gB糖蛋白型共同性和型特异性抗原决定簇在体内的表达

单纯疱疹病毒(HSV)1型和2型基因编码合成的糖蛋白、在疱疹病毒感染疾病中具有潜在的临床意义。尤其是gB糖蛋自,已证明它是唯一的多功能分子,在病毒感染过程中可诱导病毒衣壳与细胞膜的融合,还可作为病毒中和反应和ADCC的主要的靶抗原。体外研究证明,gB糖蛋白既具有HSV型共同性又具有型特异性,用其制备的抗HSV-1或HSV-2型gB糖蛋白单克隆抗     

体内表达单纯疱疹病毒糖蛋白gB的型共同性和型特异性抗原决定簇

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和Ⅱ型(HSV-2)基因组可编码合成几种抗原性不同的糖蛋白。这些糖蛋白表达于病毒感染细胞的表面,可刺激并与免疫监视的各种成分起反应。由于这些病毒诱导的抗原在原发性和复发性疱疹病毒病中,可能具有临床意义,因此,曾以极大的努力致力于其精确的免疫学特性鉴定。其中尤其重要的是,糖蛋白gB,     

单纯疱疹病毒单克隆抗体靶抗原的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法，鉴定单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体(McAb)1D10的靶抗原是一分子量约为60，000道尔顿的糖蛋白，另6株McAbs 1A12．Mad-2、2D11．CM—D3．2A8及1C4的靶抗原的分子量在105，000-130，000之间。用Mcabs与HSV-1／HSV-2型间重组株作物理图谱的方法．定位出这些McAbs靶抗原的基因。McAb1 D10的靶抗原的编码基因定位于短单一序列(Us)上，在0．912-0.976遗传单位之间，这一区域与gD鳊码基因重叠，故认为是gD。另6株McAbs的靶抗原的蝙码基固定位于长单一序列(UL)上，在0．573-0．690遗传单位之间，这一区域与gC鳊码基因重叠，故认为是gC，其中，Mad-2和OM—D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性，所以其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明4株型共同性MeAbs 1A12．2D11．2A8和1C4，抗gC上4个独立的抗原位点。     

单纯疱疹病毒糖蛋白B的结构与功能区

单纯疱疹病毒1(HSV-1)是双链线性DNA包膜病毒,其DNA编码至少有11种特异型的糖蛋白,其中gB、gD、gH和gL是病毒复制、穿入、病毒胞间扩散和病毒囊膜与感染的细胞膜融合必须糖蛋白[1～5].gB是病毒囊膜的组成部分,是HSV-1感染晚期糖蛋白,在感染的细胞中,gB是跨膜蛋白,穿膜时是以二聚体和糖基化形式由胞外区穿向细胞膜,存在于感染细胞的胞膜上、内质网、高尔基复合体和核膜上.HSV-1 gB在疱疹病毒家族中是高度保守蛋白,各毒株间差异较小,且与所有的疱疹类病毒亚群有较大的同源性[6～9];gB是病毒复制必须的多功能蛋白,是宿主免疫反应的主要靶抗原,能诱导细胞免疫、体液免疫和细胞毒T淋巴细胞反应[10～14].鉴于gB蛋白的多种生物活性,近年来许多学者对gB的抗原和功能区进行大量研究.HSV-1 gB由UL27基因编码,全长2172bp,编码904氨基酸,由-30(有的是29)氨基酸序列组成的信号肽、-696氨基酸序列组成的在氨基端具有亲水性的胞外区、-69氨基酸序列组成的具有疏水性的跨膜区、-109氨基酸序列组成的羧基端具有极性胞内区[15].HSV-1 gB含有6个一致序列N-连接糖基化位点和10个半胱氨酸序列,在与gB同源序列中是高度保守序列,这些结构是整个分子内的重要结构[16].     

单纯疱疹病毒2型三万道尔顿糖蛋白的纯化及其特性研究(摘要)

本文应用抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)型特异性单克隆抗体(McAb)CH-A9作亲和层析,纯化出HSV-2 30,000道尔顿型特异性囊膜糖蛋白,其特性与文献报道的各种HSV囊膜糖蛋白均不相同。经ELISA间接法、HSV感染BHK细胞固定片和活细胞膜荧光染色证明,McAb CH-A9具有抗HSV-2型特异性,是针对HSV-2囊膜某一糖蛋白的。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究

目的：构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)糖蛋白BDNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法：PCR扩增编码HSV-Ⅰ gB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp)，定向插入pcDNA3载体中，构建pcDNA3-gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALB／c小鼠注射免疫3次，观察小鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的变化，CFSE／PI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果：双酶切分析结果为目的基因(2．7kb)和线性质粒pcDNA3(5．4kb)；PCR扩增结果为特异产物(2．7kb)；测序结果与GenBank gB基因序列同源性达99．5％；CTL，活性增强；BALB／c小鼠脾CD4^ T细胞增加。结论：经鉴定证实了HSV-Ⅰ gB基因疫苗的构建；HSV-Ⅰ gB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答，应用于预防HSV-Ⅰ的感染具有良好的前景。     

表达单纯疱疹病毒1型糖蛋白gD的重组痘苗病毒诱导抗病毒免疫的机理:细胞毒性T细胞

许多学者认为T细胞介导免疫在单纯疱疹病毒(HSV)感染的恢复中起重要作用,然而目前关于HSV抗原刺激产生保护性T细胞的资料很少。本文用携带编码HVS-1糖蛋白gD基因的转化L细胞(gDL)和重组痘菌病毒(VgD52)研究了HSV特异性T细胞的应答。 用VgD52感染组织培养细胞可合成并表达一种与HSV-1gD相同的糖蛋白。用VgD_(52)感染鼠成纤维细胞系或C3H/HeJ脾细胞18小时后,细胞可与~(125)I标记的HSV-1gD特异性     

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。     

单纯疱疹病毒糖蛋白的特性及其临床意义

单纯疱疹病毒I型(HSV-1)有12种已命名的特异性的抗原糖蛋白,其中大部分具有诱导病毒原发感染的功能,是细胞免疫和体液免疫的主要靶标,也是预防和治疗HSV-1感染的亚单位疫苗或DNA疫苗的候选基因.本文综述了HSV囊膜糖蛋白的特性和其在复制循环中的作用以及其临床意义,为研制预防和治疗单疱病毒性角膜炎的糖蛋白联合疫苗提供了理论基础.     

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型，抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较，检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法；实验结果表明：本法特异、敏感，简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查，也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。     

单纯疱疹病毒1型和2型的单克隆抗体

一、引言 本章叙述1型和2型单纯疱疹病毒(HSV-1、HSV-2)的杂交瘤及其单克隆抗体作为血清学试剂,在研究病毒糖蛋白抗原决定簇方面的应用。HSV-1和HSV-2都含有一个分子量为10~8的线状双股DNA基因组,由162个壳微粒组成的立体对称衣壳、以及衣壳经感染细胞膜出芽时获得的囊膜。HSV病毒体由四种形态上不同的结构组成。最里面是由蛋白组成的一层已确定的衣壳所包绕的DNA核心,中间一层称为体皮(Tegument)的无定形蛋白,第三层是病毒的囊膜。囊膜由病毒特异的糖蛋白组成,在免疫血清的中和试验基础上,可将     

抗磷脂综合征患者脑脊液单纯疱疹1型病毒和巨细胞病毒抗体阳性病例分析

目的:报道4例与抗磷脂综合征(APS)患者脑脊液有关病毒抗体的阳性结果。方法:检测4例确诊APS患者脑脊液中单纯疱疹1型病毒(HSV-1)和巨细胞病毒(CMV)抗体,结合临床及影像学资料,分析其与APS发病的关系。结果:4例患者脑脊液HSV-1-IgG、CMV-IgG均为阳性,HSV-1-IgM、CMV-IgM均为阴性;例1、例2血清HSV-1-IgG、CMV-IgG阳性,例3、例4阴性;例1、2、3抗心磷脂抗体(aCL)血清水平12RU/ml;例4检出抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体。结论:初步提示HSV-1和CMV感染与APS可能存在相关性。     

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。     

单纯疱疹病毒糖蛋白C的鉴定

业已发现的单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白有6种即gB、gC、gD、gE,gG和gH。糖蛋白C(gC)既可诱生中和抗体,也能诱导细胞免疫,gC-1还起到补体C3b受体的作用。本文采用放射免疫沉淀试验和用HSV-1/HSV-2型间重组株作物理图谱等方法,鉴定出6株单克隆抗体(McAb)的靶抗原为gC。 6株抗HSV的MeAbs 1A12、1C4     

OX40/OX40L信号与自身免疫性疾病

1 OX40/OX40L在免疫应答中的作用1.1 OX40与OX40L的生物学特征OX40(CD134)是TNFR超家族成员之一,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,相对分子质量约为48～50 kD[1]。人的OX40基因位于第1号染色体上,并与其他TNF受体家族成员如     

联合靶向小干扰RNA对疱疹病毒2感染的体外抑制作用

目的 探讨联合靶向特异性小干扰RNA(siRNA)对疱疹病毒(HSV)2的体外特异抑制作用.方法 将体外合成的靶向HSV-2编码包膜糖蛋白gB的UL27.2基因、靶向DNA结合蛋白UL29.2基因的siRNA和该两种联合靶向特异性siRNA制剂,共转染Vero细胞并感染HSV-2,观察靶基因的表达情况、Vero细胞病变、空斑减数实验和子代病毒滴度并进行各组间比较:结果特异性UL27.2siRNA、UL29.2 siRNA和联合siRNA转染Vero细胞后,均能不同程度抑制各HSV-2临床株感染所导致的细胞病变,对病毒增殖抑制率分别为63.9%、86.7%和93.3%.实时定量PCR检测各组siRNA分别对UL27.2和UL29.2两个基因的表达,结果显示UL27.2 siRNA和UL29.2 siRNA对各自的靶向基因均有抑制,而联合靶向siRNA制剂对两个基因的抑制率最高.结论 联合靶向特异性siRNA制剂能有效抑制HSV-2的感染和复制.