大气细颗粒物PM2.5诱导肺上皮MLE-12细胞的氧化应激和自噬

目的 研究大气细颗粒物PM_2.5对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞的氧化应激和自噬的影响。方法 用采集和处理的2009年北京市细颗粒物PM_2.5 25,50,100和200 mg·L^-1暴露处理MLE-12细胞24和48 h,用MTT比色法测定细胞存活率,双乙酰基二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧类(ROS)自由基生成,Western蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3 Ⅰ蛋白(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ表达,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体的形成。结果 与细胞对照组比较,PM_2.5 100和200 mg·L^-1处理24 h组细胞存活率明显降低,分别降低28%和33%(P<0.01);暴露处理48 h,PM_2.5 25~200 mg·L^-1组细胞存活率均明显下降(P<0.01),并呈浓度效应关系(R²=0.4940,P<0.01)。PM_2.5 100和200 mg·L^-1处理MLE-12细胞3 h,胞内ROS水平较细胞对照组显著升高,分别升高27.6%和60.7%(P<0.01)。此外,PM_2.5 100 mg·L^-1处理细胞12,24和48 h及PM_2.5 50,100和200 mg·L^-1处理细胞24 h细胞自噬标志物LC3Ⅱ蛋白表达均明显增强,呈现明显的时间效应(R²=0.9150,P<0.01)和浓度效应(R²=0.6338,P<0.01)关系。PM_2.5 100 mg·L^-1处理24 h细胞内自噬体荧光强度明显升高(P<0.05),细胞核周边有明显的自噬泡环绕。结论 PM_2.5诱导肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞的氧化应激,并引发细胞自噬。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016对肺癌A549细胞和小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的 探讨新型组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂DWP0016对肺癌的抑制作用及可能机制。方法 1 体外实验:DWP0016 0.625~10 μmol·L^-1作用A549细胞48 h,MTT法检测细胞存活,实时荧光定量PCR检测10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)mRNA水平;Western蛋白质印迹法测定总组蛋白H3, 乙酰化H3(Ac-H3), 细胞周期调控因子p21,PTEN,总Akt和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。2 在体实验:小鼠腋下接种0.2 ml Lewis肿瘤细胞悬液制备肺癌模型,7 d后按照分组分别ip给予DWP0016 12.5, 25和50 mg·kg^-1及伏林司他(SAHA)50 mg·kg^-1,每天1次,连续8 d。取肿瘤组织称重,计算肿瘤抑制率;免疫组化法检测肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达。结果 1 体外实验:MTT结果显示,DWP0016抑制A549细胞增殖的IC₅₀为 2.51 μmol·L^-1,SAHA IC₅₀为6.03 μmol·L^-1。与正常对照组相比, DWP0016 2.5 μmol·L^-1组细胞组蛋白H3乙酰化及p21蛋白表达显著上升(P<0.05),PTEN的转录水平和蛋白水平上调, Akt的磷酸化水平下调(P<0.05)。2 在体实验:与模型组比较,给予DWP0016 12.5 mg·kg^-1移植瘤小鼠的瘤质量显著降低(P<0.05),抑瘤率达42.0%,给予DWP0016 50 mg·kg^-1肿瘤抑制率高于SAHA 50 mg·kg^-1(P<0.05);与模型组比较,肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达增加。结论 DWP0016能明显抑制A549细胞增殖和Lewis肺癌模型小鼠的肿瘤生长,其机制与诱导Ac-H3的表达、激活p21、促进抑癌因子PTEN的转录及下调Akt的磷酸化水平有关。     

新凝血因子Ⅹa抑制剂Bg115-2的抗血栓作用及药代动力学

目的 探讨Bg115-2的抗血栓功效和初步药代动力学性质。方法 试剂盒测定小鼠半体内凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）;采用小鼠下腔静脉结扎模型评价对静脉血栓的作用;采用尾尖测定出血时间法;用FⅩa活性测定Bg115-2的血药浓度。结果 sc给予Bg115-2 0.19~3.0 mg·kg^-1可明显地、剂量依赖地延长PT (P<0.05, P<0.01)和APTT (P<0.01);Bg115-2 0.75~3.0 mg·kg^-1可显著地减轻血栓质量,其抑制50%血栓形成的剂量（ID₅₀）为0.19 mg·kg^-1;ig给予Bg115-2 1.5~6.0 mg·kg^-1也明显地减轻血栓质量(P<0.01)。Bg115-2的出血反应与那曲帕林钙相似,有较高的出血风险效益比,ED₂/ID₅₀为26.8。另外单次sc给予Bg115-2 3.0 mg·kg^-1显示出二室模型的药代动力学特点,t_1/2为（6.18±1.45)h, c_max为(5.20±0.66)mg·L^-1, AUC为(43.75±8.20)mg·L^-1·h。结论 Bg115-2为一注射和口服均可的、强效的静脉血栓形成抑制剂,出血不良作用较轻。它具有较长的半衰期和二室模型的分布特征。     

单程延迟性应激诱导雌性大鼠创伤后应激障碍模型的建立

目的 采用雌性SD大鼠建立单程长时应激(SPS)模型,从表观效度和预测效度2方面考察其是否能作为创伤性应激障碍的动物模型。方法 雌性大鼠依次连续给予固定束缚(2 h)、强迫游泳(20 min)和乙醚麻醉各1次作为应激因子制备SPS模型,随后连续2周内每天1次ig 给予舍曲林10 mg·kg^-1。2周后给予足底电击刺激,次日环境重现,测定呆滞行为时间;高架十字迷宫实验测定进入开臂次数百分比和开臂滞留时间百分比;开场实验观察爬格次数和站立次数。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠呆滞行为时间明显延长(P<0.01),进入开臂次数百分比和开臂滞留时间百分比显著降低(P<0.01);与模型组相比,舍曲林组大鼠呆滞行为时间显著降低,进入开臂次数百分比和开臂滞留时间百分比显著增加(P<0.05, P<0.01); 各组爬格次数和站立数与正常对照组无显著性差异。结论 通过SPS成功诱导建立雌性大鼠创伤性应激障碍动物模型。     

N-乙酰半胱氨酸对化疗所致骨髓抑制的改善作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗所致骨髓抑制的改善作用。方法 1 体内实验:将C57BL/6j小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺(Cy)所致骨髓抑制模型对照组(ip给予生理盐水)以及模型＋NAC 30,90和270 mg·kg^-1组,每天1次,连续10 d。给药第4天一次性ip给予Cy 380 mg·kg^-1制备骨髓抑制小鼠模型。造模后第1,2,3,4和7天,鼠尾静脉取血20 μl检测外周血像,同时取一侧股骨骨髓,检测骨髓单个核细胞(BM-MNC)数目;造模后第1天,检测BM-MNC凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平。2 体外实验:C57BL/6j小鼠一次性ip给予Cy 380 mg·kg^-1后第3天,取BM-MNC进行造血祖细胞培养,在培养体系中加入NAC 0.01, 0.1, 1和5 mmol·L^-1,于第7~12天检测造血祖细胞粒红巨噬巨核系集落形成单位(CFU-Mix)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)和红系爆式形成单位(BFU-E)数目,观察NAC体外对骨髓抑制模型小鼠造血祖细胞增殖分化的影响。结果 1 体内实验:与正常对照组相比,ip给予Cy后第1~4天,模型组BM-MNC和外周血白细胞(WBC)数目显著下降,造模后第7天仍未恢复正常。与模型组相比,造模第2天,NAC 270 mg·kg^-1组WBC数目降低;其余各时间点,NAC各治疗组的WBC数目无明显差异,NAC 30和90 mg·kg^-1组WBC最低值于造模后第4天出现。与模型组比较,造模后第1天NAC 30和90 mg·kg^-1组ROS水平降低,BM-MNC凋亡率无明显差异; 造模后第1~2天BM-MNC明显增加。2 体外实验:与正常对照组相比,模型组造血祖细胞CFU-Mix,CFU-GM和BFU-E数目均明显降低;与模型组比较,NAC 0.1 mmol·L^-1能够增加骨髓抑制小鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E数目,但NAC 5 mmol·L^-1减少模型小鼠CFU-GM,BFU-E和CFU-Mix数目。结论 NAC通过降低ROS水平对化疗所致骨髓抑制有一定的改善作用。     

四氯化碳致大鼠肝损伤早期血清总胆汁酸、α-谷胱甘肽S转移酶、嘌呤核苷磷酸化酶和鸟氨酸氨基甲酰转移酶的变化

目的 探讨血清总胆汁酸、α-谷胱甘肽S转移酶(α-GST)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)对肝损伤早期诊断的应用价值。方法 Wistar大鼠分别ig给予CCl₄ 0.02,0.05和0.08 ml·kg^-1,每天1次,连续10 d。于给CCl₄后第1天和第3天采集血清,采用全自动生化仪测定血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、碱性磷酸酶、总胆红素以及总胆汁酸的水平,采用ELISA测定血清α-GST, PNP和OCT的水平; 于给CCl₄后第10天,测定血清GPT、 GOT、碱性磷酸酶及总胆红素,计算大鼠的肝指数,观察肝组织病理学变化。通过Logistic回归建立回归模型,分别用ROC曲线分析给CCl₄后第1和第3天总胆汁酸、α-GST、PNP和OCT以及GPT和GOT对CCl₄致大鼠肝损伤早期诊断的意义。结果 与正常对照组同时间点相比,给CCl₄第1天,CCl₄ 0.02,0.05和0.08 ml·kg^-1组PNP均升高(P<0.05, P<0.01),CCl₄ 0.08 ml·kg^-1组GPT和总胆汁酸升高(P<0.05, P<0.01); 给CCl₄第3天,CCl₄ 0.05和0.08 ml·kg^-1组GOT, α-GST和OCT升高(P<0.05, P<0.01); 给CCl₄第10天,CCl₄ 0.02,0.05和0.08 ml·kg^-1组大鼠肝指数均显著升高(P<0.01),肝出现严重的肝细胞脂肪变性(P<0.01)。大鼠血清中GPT、GOT、总胆汁酸、α-GST、PNP和OCT的ROC曲线下面积分别为0.786, 0.728, 0.878, 0.629, 0.850和0.571。GPT和GOT联合检测的ROC曲线下面积为0.871;总胆汁酸、α-GST、PNP和OCT以及总胆汁酸、PNP和OCT联合检测的ROC曲线下面积为0.939,且均高于各指标单项检测。结论 总胆汁酸、α-GST、PNP和OCT可作为CCl₄致肝损伤早期的生物标志物,且总胆汁酸、PNP和OCT联合检测在CCl₄致肝损伤早期具有较高的诊断价值。     

抗抑郁剂吗氯贝胺的行为效应

加强5-羟色氨酸及β-苯乙胺致小鼠刻板行为实验表明, ig吗氯贝胺(Moc)对单胺氧化酶(MAO)- A 的选择性抑制作用 (ED₅₀=0.33 mg·kg^-1, 2 h) 较MAO-B (ED₅₀=12.7 mg·kg^-1, 2 h) 强约39倍. 24 h内ip Moc 300 mg·kg^-1有一定镇静作用. 对运动系统无明显影响，不引起记忆及定向障碍. Moc 600 mg·kg^-1不能对抗氧化震颤素引起的小鼠震颤和分泌增加. Moc的LD₅₀为小鼠: 1.3-1.5 g·kg^-1 ig; 198-199 mg·kg^-1 iv; 大鼠: 541-562 mg·kg^-1 ip. Moc 剂量依赖地对抗利血平引起的小鼠和大鼠睑下垂, 活动减少和体温降低；使慢性应激刺激引起的小鼠活动性增高及穿箱逃避电击反应失败率增高得到恢复，提示其抗抑郁作用.     

知母皂苷元通过上调PI3K/Akt信号通路减轻淀粉样β蛋白诱导的乳大鼠海马神经元突触损伤

目的 探讨知母皂苷元(Sar)减轻淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的海马神经元突触损伤的信号转导机制。方法 取出生0~24 h SD乳大鼠海马神经元,体外培养7 d。海马神经元分别加入磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性阻断剂LY294002 30 μmol·L^-1或蛋白激酶B(Akt)特异性阻断剂曲西立滨1 μmol·L^-1 1 h后,加Sar 30和100 μmol·L^-1作用1 h,再加Aβ_1-42 50 nmol·L^-1作用24 h。应用突触囊泡蛋白(SYP)免疫荧光染色观察突触的改变。Western蛋白质印迹法检测海马神经元SYP、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)表达水平的改变。结果 与正常对照组相比,Aβ_1-42组培养的海马神经元SYP, p-Akt和p-GSK3β表达水平明显减低(P<0.01)。与Aβ_1-42组相比,Aβ_1-42+Sar 30和100 μmol·L^-1组海马神经元SYP, p-Akt和p-GSK3β表达水平明显增加(P<0.01)。给予LY294002作用后,SYP和p-Akt表达水平明显降低(P<0.05)。给予曲西立滨作用后,SYP和p-GSK3β表达水平明显降低(P<0.05)。单独给予LY294002,海马神经元SYP表达无变化,p-Akt表达水平明显降低(P<0.01)。单独给予曲西立滨,海马神经元SYP和p-GSK3β蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论 Sar通过上调PI3K/Akt/GSK3β信号通路对抗Aβ_1-42诱导的海马神经元突触损伤。     

异丙嗪加重清开灵注射液导致的心律失常

目的 研究异丙嗪(PMZ)对清开灵注射液(QKL)所致心律失常的影响。方法 ① 豚鼠在体心脏实验:按照QKL 3.1→15.5→31→93 ml·kg^-1的顺序累加静脉推注,每组持续5 min,于处理后5 min记录心电图;按照QKL 31 ml·kg^-1→PMZ 7.67 mg·kg^-1→PMZ 38.35 mg·kg^-1的顺序累加静脉推注,每组持续5 min,于处理后5 min记录心电图。② 豚鼠离体心电图实验:按照QKL 3.3→33→66→99 ml·L^-1的顺序灌流,每一组灌流持续5 min,分别记录各浓度组给药5 min后的心电图;按照QKL 33 ml·L^-1→QKL 33 ml·L^-1+PMZ 1 μmol·L^-1→QKL 33 ml·L^-1+PMZ 10 μmol·L^-1→QKL 33 ml·L^-1+PMZ 30 μmol·L^-1→QKL 33 ml·L^-1+PMZ 50 μmol·L^-1→QKL 33 ml·L^-1,每一组灌流持续5 min,分别记录各浓度组给药5 min后的心电图。③ 记录左心室乳头肌动作电位实验:按照QKL 3.3→33→66→99→165 ml·L^-1→洗脱的顺序灌流,分别记录每个浓度组的动作电位图形。按照QKL 99 ml·L^-1→QKL 99 ml·L^-1+PMZ 1 μmol·L^-1→QKL 99 ml·L^-1+PMZ 10 μmol·L^-1→洗脱顺序,分别记录每个浓度组的动作电位图形。结果 ① QKL 31 ml·kg^-1明显延长豚鼠在体心电图QRS及QTc间期。合用PMZ 38.35 mg·kg^-1进一步延长P-R, QRS间期及QTc间期,并能显著减慢心率(P<0.05)。② QKL 33 ml·L^-1延长豚鼠离体心电图QRS间期。合用PMZ 1, 10, 30或50 μmol·L^-1呈浓度依赖性延长P-R, QRS间期及QTc间期,并能显著减慢心率(P<0.05)。③ QKL 99 ml·L^-1合用PMZ 10 μmol·L^-1使豚鼠左心室乳头肌动作电位部分消失。结论 PMZ能加重QKL诱发的豚鼠心律失常,临床上应该谨慎使用PMZ抢救QKL导致的严重不良反应的患者。     

益气活血风静胶囊对大鼠及家兔血液流变学的影响

目的：研究益气活血风静胶囊对大鼠及家兔的血液流变学的影响。方法：采用SD大鼠及家兔分别灌胃给药14 d及10 d,检测SD大鼠及家兔血浆凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）及血小板聚集率。另采用SD大鼠,大脑中动脉阻塞（MCAO）大鼠造模后灌胃给药5 d,检测MCAO大鼠PT、APTT、TT、FIB及脑组织含水量。结果：与空白组比较,益气活血风静胶囊高、中剂量组及阳性对照组,能显著延长大鼠血浆的PT、TT、APTT （P<0.05）,并能显著降低FIB的含量（P<0.05或P<0.01）,显著降低以二磷酸腺苷（ADP）诱导的大鼠血小板聚集率（P<0.05）。与空白组比较,益气活血风静胶囊高、中、低剂量组及阳性对照组能显著延长家兔血浆的PT、TT、APTT （P<0.05或P<0.01）,并能显著降低FIB的含量（P<0.01）,显著降低以ADP诱导的大鼠血小板聚集率（P<0.05或P<0.01）。MACO大鼠模型组给药后,与假手术组比较,模型组大鼠PT、APTT、TT明显缩短（P<0.05）,FIB含量升高（P<0.05）,脑组织含水量明显增加（P<0.01）;与模型组比较,益气活血风静组和人参有效部位组能延长大鼠血浆PT、APTT、TT时间（P<0.05或P<0.01）,降低纤维蛋白原的含量（P<0.01）,显著降低模型大鼠脑组织含水量（P<0.05）,牡丹皮有效部位组大鼠TT延长（P<0.05）,降低纤维蛋白原的含量（P<0.01）,显著降低模型大鼠脑组织含水量（P<0.05）。结论：益气活血风静胶囊具有显著的抗凝血以及抑制以ADP诱导的血小板聚集的作用,并对MCAO大鼠有较好的活血作用。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

当归总苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤的改善作用

目的研究当归总苯酞对脑缺血再灌注损伤的改善作用。方法 SD大鼠口服给予当归总苯酞0.05,0.1和0.2 g·kg-1,每日1次,连续7 d。第7天给药30 min后采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断再灌注损伤模型,于再灌前、再灌2和24 h进行神经功能评分,计算脑梗死面积和脑水肿比例,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。另同样给予药物处理的大鼠于第7天股静脉注射10%高分子右旋糖酐5 m.lkg-1,检测脑膜微循环血流量。结果与假手术组相比,模型组神经功能评分增高,脑梗死面积明显增加,出现脑水肿,MDA含量增加,同时SOD活性降低。与模型组比较,当归总苯酞0.1和0.2 g·kg-1组神经功能评分分别降低了20.4%和28.7%(P<0.05);再灌2 h当归总苯酞0.05,0.1和0.2 g·kg-1可使神经功能评分分别降低15.5%,28.7%和29.9%(P<0.01);再灌24 h则分别降低11.9%,25.3%和37.4%(P<0.01),脑梗死面积分别缩小9.8%,41.7%和49.6%(P<0.05);脑水肿程度分别减轻9%,42%和52%(P<0.01);同时使脑组织MDA含量降低,最大降低幅度为62.0%(P<0.01);SOD活性升高,最大升高幅度为77.1%(P<0.01)。与假手术组相比,模型组脑血流量明显减少;与模型组相比,给予当归总苯酞可使大鼠脑血流量出现不同程度的回升(P<0.05),但仍明显低于假手术组(P<0.05)。结论当归总苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的改善作用。     

芍药苷对胶原诱导型关节炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的探讨芍药苷治疗胶原诱导型关节炎(CIA)是否与调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴有关。方法 Wistar大鼠右足趾皮内注射牛Ⅱ型胶原(CⅡ)和弗氏完全佐剂制备CIA大鼠模型,7 d后大鼠背部和尾根部皮下注射CⅡ加强免疫1次。初次免疫后第14天ig给予地塞米松2 mg.kg-1或芍药苷25,50和100 mg.kg-1,每天1次,连续28 d。初次免疫后第14,21,28,35和42天观察CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数的变化。给药结束后第2天大鼠摘眼球取血,放射免疫法检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CS)含量;制备血清,用ELISA法检测白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和抗CⅡ抗体含量。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠关节红肿,关节炎指数升高(P<0.01),血中CRH、CS、抗CⅡ抗体、IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平明显升高(P<0.01),IL-4水平下降(P<0.01),ACTH无明显改变。ig给予芍药苷50和100 mg.kg-1可抑制CIA大鼠关节肿胀,降低关节炎指数(P<0.05),在第42天关节炎指数由模型对照组的6.4±0.7降至5.6±0.5和5.4±0.7(P<0.05);使模型对照组血清IFN-γ由(21.3±2.5)ng.L-1降至16.6±1.3和(16.1±1.9)ng.L-1(P<0.01),IL-1β由(37.3±4.2)ng.L-1降至32.1±2.9和(31.2±4.1)ng.L-1(P<0.01),TNF-α由(53.9±7.9)ng.L-1降至39.4±6.8和(31.3±6.1)ng.L-1(P<0.01),抗CⅡ抗体由(2.13±0.32)ng.L-1降至1.35±0.58和(1.10±0.42)ng.L-1(P<0.01),IL-4由(26.6±3.0)ng.L-1升至41.9±3.1和(49.1±4.2)ng.L-1(P<0.01);能使血浆CRH的水平由模型对照组的(2.3±0.5)μg.L-1升高至4.9±1.0和(5.3±1.1)μg.L-1(P<0.01),CS由(33±10)μg.L-1升高至47±9和(51±13)μg.L-1(P<0.01),ACTH水平亦有明显升高(P<0.01)。结论芍药苷治疗CIA可能与调节PHA轴有关。     

胰岛素降低海马谷氨酸和D-丝氨酸含量改善糖尿病大鼠空间学习记忆能力

目的观察胰岛素对糖尿病(DM)大鼠空间学习记忆及海马组织中谷氨酸和D-丝氨酸含量的影响。方法采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠DM模型。注射STZ第3天建模成功后,大鼠sc给予胰岛素2 U·kg-1,每天1次,持续82 d。定期检测各组大鼠体质量及空腹血糖。第81天进行Morris水迷宫实验,检测大鼠学习记忆能力;实验结束后取海马组织,观察形态变化,并测定谷氨酸和D-丝氨酸含量。结果与正常对照组比较,DM模型组大鼠体质量明显减轻(P<0.01),血糖明显升高(P<0.01),逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间显著减少(P<0.01),海马组织中谷氨酸及D-丝氨酸的含量均显著升高(P<0.01)。胰岛素治疗组体质量增加,血糖含量恢复到正常水平。与DM模型组相比,胰岛素治疗组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),原平台象限游泳时间占总时间百分比显著增加(P<0.01);海马组织中谷氨酸和D-丝氨酸的含量也分别由DM模型组的(1.550±0.054)和(0.084±0.05)mg·g-1下降为胰岛素治疗组的(1.137±0.023)和(0.068±0.004)mg·g-1。结论胰岛素可以改善糖尿病大鼠空间学习记忆能力,这可能与其降低海马组织中谷氨酸和D-丝氨酸含量有关。     

曲尼司特对糖尿病大鼠肾单核细胞趋化蛋白1表达的抑制作用

目的研究曲尼司特对糖尿病大鼠肾纤维化及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法健康SD大鼠一次性尾静脉注射链脲佐菌素30 mg.kg-1制备糖尿病大鼠模型,72 h后每天分别ig给予曲尼司特100和200 mg.kg-1,每天1次,连续12周。测定空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白(UP)和血清尿素氮(BUN)含量及肾指数;Masson染色观察肾形态,免疫组化法和Western印迹法检测肾组织MCP-1蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型对照组FBG、BUN、24 h UP含量和肾指数均明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,曲尼司特100和200 mg.kg-1组BUN、24 h UP含量、肾指数均显著降低(P<0.01),BUN由(21.0±3.5)mmol.L-1分别降低到14.5±2.6和(10.1±3.7)mmol.L-1,24 h UP由(39.3±6.6)mg分别降低到27.0±4.5和(23.7±6.0)mg(P<0.01)。与正常对照组相比,模型对照组肾小球体积增大,系膜区增宽,间质胶原纤维明显增多,肾MCP-1蛋白表达显著增加(P<0.05)。与模型对照组相比,曲尼司特100和200 mg.kg-1组间质胶原纤维明显减少,肾MCP-1表达明显下降(P<0.05)。其中曲尼司特200 mg.kg-1组效果更为明显(P<0.01)。结论 曲尼司特可能通过减少MCP-1表达,从而延缓肾间质纤维化的发展。     

远志皂苷对β淀粉样蛋白片段1-40诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨远志皂苷抑制β淀粉样蛋白片段1-40(Aβ1-40)诱导的PC12细胞凋亡的作用机制。方法采用聚集状的Aβ1-40 25μmol·L-1诱导PC12细胞凋亡,然后将处理后的PC12细胞分为Aβ1-40模型组和远志皂苷50,100和200μmol·L-1组,同时设正常细胞对照组。采用MTT比色法检测细胞存活率;膜联蛋白-Ⅴ和PI双染法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞凋亡基因Bcl-2和Bax及细胞色素c(Cyt c)表达阳性的细胞百分率;Western印迹法检测PC12细胞中Cyt c的表达水平。结果与正常对照组比较,Aβ1-40模型组PC12细胞的存活率明显降低(P<0.01),为(31±7)%;Bcl-2阳性表达细胞率降低(P<0.01),为(23.9±1.9)%;Bax和Cyt c阳性表达细胞率升高(P<0.01),分别为(79.0±3.7)%和(49.2±3.6)%,Bcl-2/Bax阳性表达细胞比值为0.30。与模型对照组比较,远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率分别升高至(51±13)%,(64±7)%和(84±10)%(P<0.01);Bcl-2阳性率升高至(38.7±0.9)%,(53.7±1.6)%和(60.3±0.8)%(P<0.01),Bax阳性率分别降低为(60.8±1.9)%,(41.5±2.2)%和(32.7±1.4)%(P<0.01),Bcl-2/Bax比值亦分别上升为0.64,1.29和1.84;Cyt c阳性率分别降低至(45.4±3.4)%,(30.2±2.2)%和(27.5±1.0)%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率和Cyt c蛋白表达水平亦明显升高(P<0.01);远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24h,PC12细胞凋亡率和Cyt c表达水平较模型组均降低(P<0.01)。结论远志皂苷对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是抑制Bax和Cyt c表达,增加Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路。     

热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法40℃分别热休克(HS)处理小鼠10min(HS10组)、20min(HS20组)和30min(HS30组),室温恢复8h后,小鼠ip给予AAP 550mg·kg-1诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,24,42和72h进行相关指标检测。赖氏法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性,HE染色进行病理学分析,免疫组化法检测给予AAP后0 h,小鼠肝热休克蛋白70(HSP70),细胞色素P4501A2(CYP1A2)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western印迹法检测给予AAP后0,6,24,42和72h时小鼠PCNA的表达。结果与AAP对照组相比,HS20组小鼠血清中AST和ALT酶活水平显著降低(P<0.05),而HS10组和HS30组小鼠无显著差异。与AAP对照组相比,HS20显著降低了AAP诱导的小鼠肝损伤程度(P<0.05),而HS10和HS30未显著降低肝损伤的程度。HS20显著诱导了小鼠肝HSP70(P<0.01),CYP1A2(P<0.01)和PCNA(P<0.05)的表达,而HS10和HS30显著诱导了小鼠肝HSP70和CYP1A2(P<0.05)的表达,但未明显诱导PCNA的表达。与HS10和HS30相比,HS20更加显著地诱导了HSP70和CYP1A2的表达(P<0.05)。HS20组小鼠在注射AAP后0,6,24,42和72h,小鼠肝PCNA的表达均显著高于AAP对照组(P<0.05)、HS10和HS30组(P<0.05)。结论 40℃热休克预处理20min可以有效降低AAP诱导的小鼠急性肝损伤程度,加速肝损伤后的修复。     

蛇床子素通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体α调节肝细胞内脂肪酸代谢

目的探讨蛇床子素是否通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α调节肝细胞内的脂肪酸代谢。方法 大鼠肝细胞在用蛇床子素12.5～100μmol.L-1作用24 h后,用比色法测定细胞内甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)含量,用逆转录聚合酶链反应法测定PPARαmRNA表达的变化。PPARα抑制剂MK886 1μmo.lL-1预处理肝细胞2 h后,观察蛇床子素100μmo.lL-1作用24 h后对细胞内TG和FFA含量以及PPARα调控的靶基因包括固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1/2、脂肪酸合酶(FAS)、二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)、肉碱软脂酰转移酶(CPT)-1a、脂肪酸转运蛋白(FATP)4和肝脂肪酸结合蛋白(L-FABP)mRNA表达的影响。结果 蛇床子素12.5～100μmol.L-1可明显降低肝细胞内TG和FFA的含量(P<0.01),同时也能明显增加肝细胞内PPARαmRNA的表达(P<0.01)。在用PPARα抑制剂MK886预处理后,蛇床子素降低肝细胞内TG和FFA的作用则明显被减弱(P<0.01),同时抑制SREBP-1/2,FAS和DGAT mRNA表达的作用明显减弱或完全消失(P<0.01),增加CPT-1a,FATP4和L-FABPmRNA表达的作用也明显减弱或完全消失(P<0.01)。结论 蛇床子素通过激活肝细胞中PPARα后可降低细胞中的TG和FFA含量,其机制与激活PPARα后随后抑制SREBP-1/2,FAS和DGAT的基因表达以及增加CPT-1a,FATP4和L-FABP的基因表达有关。     

胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响

目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10～200μmo.lL-1或者胡桃醌20μmo.lL-1+顺铂20μmo.lL-1继续培养8 h或24 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法测定细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10,20,50,100和200μmo.lL-1与HeLa细胞作用24 h,随着胡桃醌浓度的增加,光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆;HeLa细胞存活率明显降低,分别由对照组的(100.0±0.0)%降低至(87.2±5.6)%,(66.2±4.8)%,(54.5±4.9)%,(42.5±6.4)%和(32.0±2.2)%(P<0.05,P<0.01);HeLa细胞G2/M期百分率逐渐增加,分别由对照组的(7.5±1.2)%增加到(12.9±1.2)%,(16.2±2.8)%,(23.6±3.9)%,(34.2±4.2)%和(52.6±7.8)%(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用24 h,光镜下脱壁细胞增加,细胞形态变圆,较胡桃醌和顺铂单用组更加明显;联合用药组细胞存活率为(35.0±6.1)%,较胡桃醌和顺铂单用组〔(78.2±12.5)%和(58.5±10.9)%〕明显降低(P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用8 h,HeLa细胞早期凋亡率为(24.6±5.7)%,高于胡桃醌和顺铂单用组〔(6.7±1.5)%和(0.4±2.8)%〕(P<0.01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存活,促进HeLa细胞凋亡,与顺铂联合使用具有协同作用。     

番荔枝总内酯对大鼠心、肝和肾的毒性及其作用机制

目的观察番荔枝总内酯对大鼠的毒性作用,初步探讨其毒性机制。方法将雄性SD大鼠随机分为溶剂对照、番荔枝总内酯7和14 mg·kg-1组,分别ig给药,每天1次,连续4周,末次给药1h后取血,处死大鼠。HE染色观察大鼠心、肝和肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和肌酸激酶(CK)水平;BCA法、分光光度法和荧光素法分别测定心、肝和肾线粒体中蛋白质浓度、线粒体复合物Ⅰ活性和ATP含量;荧光探针法检测组织中Ca2+和活性氧类(ROS)浓度。结果番荔枝总内酯14mg·kg-1组大鼠肝组织中央静脉周围细胞轻微肿胀;与溶剂对照组比较,血清ALT,AST,BUN和CK水平显著升高,分别由溶剂对照组的(50.0±1.4)U.L-1,(126±11)U.L-1,(6.13±0.15)mmol·L-1和(293±13)U.L-1升高到(59.0±2.6)U.L-1(P<0.05),(176±12)U.L-1(P<0.05),(12.9±2.05)mmol·L-1(P<0.01)和(480±97)U.L-1(P<0.05),血清Cr水平无明显变化。心、肝和肾组织线粒体复合物Ⅰ活性分别由溶剂对照组的(22.6±4.9),(72±10)和(34±4)μmo.lg-1蛋白.min-1降低到(7.5±1.7),(54±10)和(26±6)μmo.lg-1蛋白.min-1(P<0.05,P<0.01);心、肝和肾组织ATP含量由溶剂对照组的(10.4±2.1),(6.8±1.6)和(12.5±3.4)nmo.l L-1降低至(2.2±3.4),(3.4±1.2)和(5.5±1.1)nmol·L-1(P<0.05,P<0.01);心肌细胞中Ca2+和ROS浓度增加,荧光强度分别由7.37±0.64和14.8±4.1增加到9.06±0.08和110.0±19.0(P<0.05,P<0.01),肝和肾细胞内Ca2+和ROS浓度无明显变化。番荔枝总内酯7mg·kg-1组上述指标无明显变化。结论番荔枝总内酯对大鼠心、肝和肾具有一定的毒性,其作用机制可能是降低心、肝和肾组织中线粒体复合物I的活性和ATP含量,升高组织细胞内Ca2+和ROS浓度,引起组织细胞损伤。