miR-18a对人正常滋养细胞中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:研究子痫前期(pre-eclapmpsia,PE)相关微小RNA-18a(miR-18a)对人正常滋养细胞(HTR-8细胞)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的影响。方法:按照HTR-8细胞中miR-18a的表达情况分为3组(每组重复5次):miR-18a过表达组、miR-18a抑制组、阴性对照组;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染后HTR-8细胞中miR-18amRNA的表达量;RT-qPCR和蛋白质印迹(Western blotting)检测转染后HTR-8细胞中MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表达量。结果:miR-18a过表达组miR-18amRNA表达量比阴性对照组升高,miR-18a抑制组miR-18amRNA表达量比阴性对照组降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。miR-18a抑制组MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表达量比阴性对照组降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论:miR-18a影响人正常滋养细胞中MMP-2、MMP-9在mRNA及蛋白水平的表达,可能通过该途径参与对滋养细胞浸润能力的调控。     

miR-18a调节HTR-8细胞中雌激素受体α表达的研究

目的:研究微小RNA-18a(miR-18a)在人正常滋养细胞(HTR8)中对雌激素受体α(ERα)表达的调控作用。方法:miR-18a前体分子[miR-18a类似物(miR-18a mimics)、miR-18a空白载体、miR-18a抑制物(miR-18a inhibitor)]转染HTR-8细胞,分为实验组1、阴性对照组(NC组)、实验组2。RT-PCR检测转染后各组中miR-18a的表达情况;RT-PCR与Western-blot检测HTR-8细胞中ERα在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果:实验组1细胞中miR-18a的表达与NC组(0.407±0.019)相比明显增高(0.880±0.060),实验组2细胞中miR-18a的表达显著降低(0.160±0.014),差异有统计学意义(P0.05)。转染48小时后实验组1ERαmRNA的表达(0.249±0.003)与NC组(0.313±0.010)相比差异无统计学意义(P0.05);实验组2 ERαmRNA的表达水平明显增高(0.823±0.023),差异有统计学意义(P0.05)。实验组2 ERα蛋白表达水平(1.030±0.006)与NC组(0.960±0.008)相比有增高,实验组1 ERα蛋白表达水平明显降低(0.660±0.013),差异有统计学意义(P0.05)。结论:在人正常滋养细胞中,miR-18a可能在转录和翻译水平均对ERα具有调控作用。     

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制。方法qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平。培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染至HTR-8/SVneo细胞中,qRT-PCR检测细胞中miR-198、Wnt2B mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞中Wnt2B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达,双荧光素酶报告基因验证miR-198与Wnt2B的靶向关系。再将miR-198 mimics和Wnt2B过表达质粒分别或同时转染至HTR-8/SVneo细胞中,Western blot检测细胞中Wnt2B蛋白表达变化,CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活性以及细胞迁移与侵袭能力。结果与正常组比较,PE患者胎盘组织中miR-198表达水平显著升高(P<0.001)。miR-198过表达可显著抑制HTR-8/SVneo细胞增殖活性以及细胞迁移与侵袭能力(P<0.01,P<0.001),促进细胞中E-cadherin蛋白表达(P<0.001),抑制细胞中Wnt2B、N-cadherin和Vimentin等蛋白表达(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-198靶向负调控Wnt2B基因表达。过表达Wnt2B可显著逆转miR-198对HTR-8/SVneo细胞增殖以及迁移与侵袭能力的抑制作用(P<0.001)。结论过表达miR-198可抑制人滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭,其机制可能与靶向抑制Wnt2B基因表达有关。     

miR-451a对人滋养细胞迁移、侵袭能力的影响

目的研究miR-451a对人滋养细胞系(HTR-8/SVneo)细胞迁移、侵袭能力的影响。方法以人工合成的寡核苷酸miR-451a模拟物(miR-451a mimics)、miR-451a抑制物(miR-451a inhibitor)分别转染人滋养细胞,过表达与特异性抑制miR-451a;应用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应技术(q RT-PCR)检测转染后miR-451a的表达;应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验观察转染前后细胞的迁移和侵袭能力的变化。结果对比空白组及阴性对照组,人滋养细胞转染miR-451a mimics后,miR-451a表达明显升高,细胞迁移、侵袭能力下降;而转染miR-451a inhibitor后,miR-451a表达明显下降,细胞迁移、侵袭能力提高。结论 miR-451a可以抑制人滋养细胞的迁移、侵袭能力。     

MMP-9在绒毛外滋养细胞诱导内皮细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达对血管内皮细胞凋亡的影响。方法:MMP-9的siRNA转染绒毛外滋养细胞株(TEV-1),利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)和ELISA法检测转染前后细胞中MMP-9、FasL基因及蛋白表达的变化;通过trans well共培养技术,研究滋养细胞对内皮细胞凋亡的影响。结果:(1)MMP-9 siRNA转染后24h,滋养细胞MMP-9 mRNA的表达较对照组明显降低(P0.05),而FasL mRNA表达与对照组无明显差异(P0.05);转染后48h,细胞培养液中MMP-9蛋白及FasL蛋白表达均较对照组显著降低(P0.05);(2)与未转染者比较,转染MMP-9 siRNA的滋养细胞与内皮细胞共培养48h后,内皮细胞凋亡率显著降低,差异有显著性(P0.05)。结论:绒毛外滋养细胞表达MMP-9的水平影响其诱导内皮细胞凋亡的作用,此作用可能与MMP-9调节FasL蛋白的分泌表达有关。     

PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究

目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制。方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照。采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达。结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P0.01)。与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高。结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移。提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用。     

PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究26

目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制.方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照.采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达.结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.01).与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高.结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移.提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用.     

降表达SFRP2基因对滋养细胞HTR-8侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨SFRP2基因表达降低对人绒毛膜外滋养细胞HTR-8迁移和侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒转染技术构建稳定降表达SFRP2基因的稳克隆细胞株,Transwell实验和划痕实验评估细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测相关蛋白水平,平板克隆实验检测细胞的成球能力。结果:慢病毒转染SFRP2基因后,与HTR-8-vector组相比,HTR-8-shSFRP2-1/2组的穿膜细胞数增多、迁移距离增加; Vimentin、N-cadherin、MMP-9、MMP-2和Nanog、Oct4蛋白表达量明显增高,而E-cadherin蛋白表达量降低;细胞克隆形成数增加(P0.05)。给予Wnt抑制剂XAV 939后,Wnt/β-catenin信号通路的活性受到抑制,HTR-8-shSFRP2-1/2组细胞的侵袭、迁移能力及干性减弱。结论:降表达SFRP2基因可促进人绒毛膜外滋养细胞HTR8的迁移、侵袭能力和干性。     

MicroRNA-155通过调控Wnt/β-catenin通路对滋养细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-155是否通过调控Wnt/β-catenin通路影响滋养细胞的生物学行为,参与子痫前期(PE)的发生。方法:收集20例PE孕妇(PE组)及20例正常孕妇(Normal组)的胎盘组织,qRT-PCR检测组织中miR-155表达,qRT-PCR及Western blot检测β-catenin表达。HTR-8/SVneo细胞分别转染miR-155 mimic、miR-155 inhibitor及miR-155 NC,qRT-PCR检测其转染效率及β-catenin mRNA表达,Western blot检测β-catenin及Wnt3a蛋白表达,CCK-8、Transwell、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡。转染miR-155 inhibitor后,用β-catenin抑制剂处理细胞,检测相关蛋白表达及细胞的增殖、迁移和凋亡。结果:PE组胎盘组织中miR-155表达较Normal组升高(P<0.001),β-catenin表达降低(P<0.01)。过表达miR-155后,β-catenin及Wnt3a表达、细胞增殖、迁移能力均下降(P<0.01)...     

RNA干扰技术抑制HLX1基因表达对滋养细胞生物学性能的影响

目的:研究小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人类同源异型盒基因HLX1的表达对胎盘滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞生物学性能的影响。方法:常规体外培养HTR-8/SVneo细胞,设实验组(转染HLX1基因的特异性siRNA)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)及空白对照组(除不含siRNA片段,余试剂与另两组相同)3组分别进行瞬时转染。用流式细胞术测定siRNA转染效率,应用实时定量PCR技术和蛋白印迹法测定转染后各组HTR-8/SVneo细胞中HLX1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT比色实验、Matrigel侵袭实验分别检测转染后各组细胞的增殖能力与侵袭能力的变化。结果:(1)转染24h后测得siRNA转染效率达(86.3±2.6)%。(2)转染48h后HLX1 mRNA的表达水平下调(77.0±1.2)%(P<0.01),转染72h后HLX1蛋白的表达水平下调(82.6±1.2)%(P<0.01),与HLX1 mRNA的表达水平下调相一致。(3)转染HLX1 siRNA 24h后,HTR-8/SVneo细胞的增殖活性已受到抑制,转染72h后细胞增殖抑制最显著,抑制率达到(58.1±4.4)%(P<0.01)。(4)转染HLX1 siRNA后,HTR-8/SVneo细胞侵袭Matrigel基质胶的能力受到显著抑制,其穿膜细胞数为(29±3)个,与空白对照组(穿膜细胞数为[53±8]个)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HLX1基因表达水平的下降可以显著抑制滋养细胞的增殖活性与侵袭能力;HLX1基因表达异常可能通过影响滋养细胞增殖、侵袭等过程参与IFGR、子痫前期等疾病的发生。     

Wnt2在植入胎盘组织中的表达及其对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响

目的检测Wnt2在植入胎盘组织中的表达,分析Wnt2对滋养细胞凋亡、迁移和侵袭功能的影响。方法收集2020年7月至2021年1月于武汉大学中南医院妇产科行剖宫产的胎盘植入孕产妇胎盘组织15例(植入组)和正常孕产妇胎盘组织15例(对照组)。RT-PCR法和Western blot法检测胎盘组织中Wnt2表达水平,采用siRNA敲低HTR-8/Svneo细胞中Wnt2表达水平,流式细胞学法检测细胞凋亡,Transwell侵袭和迁移实验评估细胞的迁移和侵袭能力,RT-PCR法和Western blot法检测β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2和MMP-9表达水平。结果与对照组相比,植入组胎盘组织中Wnt2、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著升高(均P<0.05)。转染敲低HTR-8/Svneo细胞Wnt2水平后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力显著抑制(P<0.01),β-catenin、Bcl-2、MMP-2和MMP-9表达显著下降(均P<0.05),而Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论植入胎盘组织中Wnt2蛋白表达显著升高,且Wnt2可能通过wnt/β-catenin信号通路参与了胎盘滋养细胞的凋亡、迁移和侵袭。     

子痫前期相关微小RNA-18b对人正常滋养细胞浸润能力影响的研究

目的:研究人类子痫前期相关微小RNA-18b(miR-18b)对人正常滋养细胞系(HTR-8/SVneo)细胞浸润能力的影响。方法:用脂质体包裹化学合成的miR-18b前体分子并转染人正常滋养细胞系,过表达与特异性抑制miR-18b。逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测miR-18b过表达与抑制效果;Tanswell小室技术检测转染后细胞浸润能力的变化。结果:RT-PCR结果显示,与未转染组(0.422±0.011)相比,miR-18b过表达组(0.910±0.040)及miR-18b抑制组(0.110±0.012)miR-18b的表达显著变化,差异均有统计学意义(P0.05)。Tanswell小室检测结果显示,与未转染组及过表达组相比,抑制组细胞浸润能力有所下降,差异具有统计学意义(P0.05);与未转染组相比,过表达组细胞浸润能力无明显改变,差异无统计学意义(P0.05)。结论:抑制子痫前期相关miR-18b的表达可影响人正常滋养细胞的浸润能力,可能与子痫前期疾病的发生发展有关。     

II型核受体PPARγ和金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在早孕胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨II型核受体的过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9与细胞滋养细胞浸润的关系。方法:采用免疫组织化学、实时RT-PCR和免疫印迹技术检测早孕早期(孕6-8周,A组)和早孕晚期(孕11-12周,B组)绒毛组织中PPARγ、MMP-2和MMP-9mRNA及蛋白的表达。结果:PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2和MMP-9蛋白阳性颗粒主要存在于绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且A组绒毛PPARγ表达量高于B组(P<0.05),而MMP-2和MMP-9表达量在B组高于A组(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,-0.68,P<0.01);且在A组MMP-2表达量多于MMP-9,而B组则MMP-9多于MMP-2,但无显著性差异。结论:PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的,为深入探讨PPARγ及其配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。     

LncRNA H19通过调节miR-let7/MMP-9分子轴促进滋养细胞侵袭及迁移

目的:通过检测妊娠期高血压疾病(HDP)患者胎盘组织中lncRNA H19、miR-let7、MMP-9表达，探索HDP发病机制。方法:收集2019年12月至2021年3月在昆明医科大学第一附属医院分娩的妊娠期高血压疾病(HDP)患者86例(PIH 26例，PE 29例，sPE 31例)和正常妊娠孕妇20例。分别对HTR-8/Svneo细胞进行敲减或过表达H19,过表达H19与miR-let7e-5p mimics共转染。RT-qPCR法检测胎盘组织及HTR-8/Svneo细胞中lncRNA H19、miR-let7、MMP-9 mRNA表达水平，免疫组化法检测胎盘组织中MMP-9蛋白表达水平。Transwell试验检测细胞侵袭力，细胞划痕实验检测细胞迁移力，CCK-8试验检测细胞活力。结果:与正常妊娠组相比，HDP患者胎盘组织中lncRNA H19表达明显上调，miR-let7b-5p、miR-let7e-5p及MMP-9蛋白表达均下调；PIH及sPE患者胎盘组织中MMP-9 mRNA表达下调。HTR/SVneo细胞中敲减H19后，lncRNA H19及MMP-9 mRNA表达减少，...     

MicroRNA-34a抑制Notch1并影响滋养细胞侵袭和增殖能力

目的:以胎盘组织和人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞为研究对象,研究MicroRNA-34a(miR-34a)对Notch1和JEG-3细胞侵袭和增殖能力的影响,进一步探讨miR-34a参与子痫前期(PE)发生发展的分子机制。方法:选取30例PE孕妇(PE组)和30例健康孕妇(正常对照组)。将miR-34a mimic、miR-34a inhibitor和Notch1 siRNA转染JEG-3细胞。Real-time PCR法检测各组中miR-34a和Notch1 mRNA表达,Western blot法检测各组Notch1蛋白表达,Transwell法观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化,CCK-8法检测转染前后细胞存活情况。结果:PE组胎盘组织中miR-34a miRNA表达较对照组显著升高(P0.05),Notch1 mRNA表达较对照组明显降低(P0.05)。转染miR-34a mimic可抑制JEG-3细胞的侵袭、迁移和增殖,转染miR-34a inhibitor可促进细胞的侵袭、迁移和增殖。过表达miR-34a可减少JEG-3细胞中Notch1表达,抑制miR-34a可增加Notch1表达;转染Notch1 siRNA后,细胞的侵袭、迁移和增殖能力均受到抑制。结论:miR-34a影响滋养细胞的不同生物学功能,可能通过抑制Notch1表达发挥功能,参与了PE的发生发展。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ及其配体对早期细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9表达的调控

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)及其配体(15-脱氧-前列腺素J2,15-d-PGJ2)对细胞滋养细胞表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的调控作用。方法:采用免疫荧光细胞化学方法检测细胞滋养细胞中PPARγ的表达;利用免疫荧光共聚焦技术观察15-d-PGJ2作用前后细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9表达强度的变化;通过荧光定量PCR(Real-timePCR)和Westernblot方法定量检测MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达变化。结果:在细胞滋养细胞中有PPARγ蛋白表达,且主要定位在细胞滋养细胞核中;15-d-PGJ2作用后细胞滋养细胞中MMP-2和MMP-9的表达明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.01);15-d-PGJ2对MMP-2的作用强于MMP-9。结论:PPARγ及其配体15-d-PGJ2调节滋养细胞浸润作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的。     

沉默MMP-2对人宫颈鳞癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响。方法:分别用MMP-2沉默慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞(MMP-2-LV组)、空载慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞为阴性对照组(NC-LV组)。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)观测MMP-2 mRNA的表达,蛋白质印迹(Western blotting)检测MMP-2蛋白的表达,流式细胞技术、Transwell侵袭、迁移和CCK-8细胞增殖实验观测MMP-2对细胞凋亡、侵袭、迁移和细胞增殖的影响,在裸鼠上构建移植瘤模型观测MMP-2对小鼠皮下成瘤能力。结果:转染后,与NC-LV组比较,MMP-2-LV组细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达量较低(P<0.05),增殖能力降低(P<0.01),侵袭、迁移能力降低(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,接种MMP-2-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积小于接种NC-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积(P<0.01)。结论:沉默MMP-2可抑制SiHa细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进其凋亡,MMP-2可能是宫颈鳞癌的潜在诊疗靶点。     

MiR-26b在子痫前期胎盘中差异表达的临床意义

目的探讨子痫前期胎盘组织中miR-26b差异表达及其临床意义。方法收集子痫患者与健康人胎盘组织各30例,RT-qPCR和Western blotting检测组织中miR-26b与Smad1的表达;转染miR-26b的mimics到HTR-8/SVneo细胞中,MTT法比较转染组、NC对照组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期情况;同时RT-qPCR、Western blotting检测各组miR-26b和Smad1的表达情况,并运用双荧光素酶报告检测试验验证miR-26b与靶标Smad1之间靶向关系。结果 miR-26b在子痫前期胎盘组织中高表达,且Smad1的表达与miR-26b的表达相反;滋养层细胞中miR-26b过表达会抑制细胞增殖(P0.01),并将细胞阻滞在G0/G1期。miR-26b过表达会降低Smad1 mRNA与蛋白的表达(P0.01)。双荧光素酶报告基因实验证明Smad1是miR-26b的直接靶点。结论 miR-26b可能通过靶向Smad1调控HTR-8/SVneo细胞的增殖与周期。     

miRNA-101通过调控胎盘滋养细胞功能参与妊娠期糖尿病的发病

目的:研究miRNA-101对胎盘滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖和迁移能力的影响,探讨其在妊娠期糖尿病(GDM)中的可能作用机制。方法:收集GDM患者及正常孕妇胎盘组织,PCR、Western blot法检测胎盘组织中miR-101及下游因子EZH2表达,免疫组化法检测胎盘中EZH2及其下游因子H3K27me3的定位及表达。分别上调和抑制HTR-8/SVneo细胞中miRNA-101表达,PCR法检测EZH2 mRNA表达水平,Western blot法检测EZH2及H3K27me3蛋白表达,CCK-8法、Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。结果:GDM组胎盘组织中miR-101 mRNA表达明显高于正常组(P0.05),EZH2及H3K27me3表达显著低于对照组(P0.05)。上调miRNA-101后,HTR-8/SVneo细胞中EZH2及H3K27me3表达显著降低(P0.05),细胞增殖能力显著降低(P0.01),迁移能力明显降低(P0.05);抑制miR-101表达后,EZH2及H3K27me3表达显著升高(P0.05),细胞增殖能力无明显变化(P0.05),迁移能力显著增强(P0.001)。结论:GDM患者胎盘中miRNA-101表达异常升高,miRNA-101可能通过EZH2-H3K27me3途径使胎盘滋养细胞增殖及迁移能力降低,参与GDM发病的病理机制。     

白血病抑制因子对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的调节

目的:研究白血病抑制因子(LIF)对人早孕滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和MMPs组织抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:以不同浓度的LIF作用于体外培养的细胞滋养细胞,于2h、4h、12h收集细胞。用RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达。结果:LIF对人早孕滋养细胞MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达无明显作用。LIF作用4h和12h,实验组MMP-9 mRNA明显上升(P<0.01),并呈明显剂量依赖关系。结论:LIF可以在一定的时间和剂量范围内促进滋养细胞MMP-9的表达。推测LIF可能通过节制性调节MMPs的表达,进而分解子宫内膜细胞外基质,介导滋养细胞的入侵。