地塞米松对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的观察体外培养的不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平的差异及地塞米松（1×10^-8mol/L）对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法采用酶消化法分别提取、纯化和培养新生（24h以内）、2、4、8、12月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞,并且用Western-blot、ECL法检测体外培养成骨细胞雌激素受体的水平。结果提取的大鼠成骨细胞生长情况良好,碱性磷酸酶染色阳性,具有成骨细胞特性。Western-blot结果显示：雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平在新生鼠和8月龄鼠较高,在2、4、12月龄鼠较低;地塞米松组成骨细胞雌激素受体表达水平在新生和2月龄低于对照组,在4、8、12月龄高于对照组。结论不同月龄雌性大鼠体外培养的成骨细胞雌激素受体的表达水平不同;1×10^-8mol/L地塞米松对体外培养的雌性大鼠成骨细胞雌激素受体水平有影响且与大鼠的月龄有关。     

转化生长因子β对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的探讨转化生长因子β对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法实验中取雌性SD大鼠4肢松质骨,应用胶原酶消化法得到大量纯净成骨细胞;进行形态学观察,检测不同培养时间的细胞培养液的上清液中成骨细胞特征性分泌物:碱性磷酸酶(AKP)和骨钙素(OCN)的含量;碱性磷酸酶(ALP)染色(改良Gomori氏钙钴法);通过免疫组化法(SP法)进行雌激素受体染色;用不同浓度的TGFβ作用于体外培养的成骨细胞,进行SDSPAGE电泳和Westernblot检测雌激素受体。结果成骨细胞上清液AKP和OCN的分泌量明显高于成纤维细胞(P<0.01),形态学观察符合成骨细胞的特征。经免疫组化染色大鼠的成骨细胞存在雌激素受体,且位于胞核内。Westernblot结果显示,雌激素受体在TGFβ浓度为0.1～0.5ngml时,有较强的荧光发光信号条带。结论TGFβ在浓度为0.1～0.5ngml时,能提高成骨细胞雌激素受体基因表达水平,这可为研究TGFβ对于成骨细胞雌激素受体的作用机制及骨代谢疾病药物筛选提供新的支持。     

人成骨细胞体外培养、鉴定及护骨素表达的研究

目的：用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞，进行体外培养和功能鉴定，观察用17β－雌二醇（17β-E2）和雌激素受体拮抗剂ICI182780处理后，成骨细胞中护骨素（OPG）的表达变化。方法：用胰酶－胶原酶消化法从正常人松骨骨中分离培养成骨细胞，Ⅰ型胶原染色用VanGie-son法，钙化结节用茜素红染色，用钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶的表达，骨钙素和OPG基因的表达用RT－PCR检测，OPG蛋白用W esternBlot检测，结果：用酶消化法分离的人成骨细胞，在体外培养时可维持合成Ⅰ型胶原，碱性磷酸酶、骨钙素，并形成钙化结节等功能，体外培养的人成骨细胞表达OPG，17β-E2上调其表达，并能被雌激素受体拮抗剂ICI182780阻断。结论：用酶消化法进行人成骨细胞培养，方便易行，可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用；17β-E2上调OPC表达，而绝经后雌激素缺乏时，OPG的表达相应减少，可能是骨质疏松的发病因素之一。     

成骨细胞中雌激素受体β介导雌激素对IL-6和TGF-β的调控作用

[目的]利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1为细胞模型,研究雌激素与IL-6和TGF-β三者在成骨细胞分化中的具体作用机制,进一步在细胞水平探讨雌激素受体ERβ在雌激素功能中的作用。[方法]17β-雌二醇处理MC3T3-E1细胞后检测碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白、骨保护素、骨钙素等成骨细胞相关因子的表达。同时17β-雌二醇处理后检测细胞因子IL-6和TGF-β的表达是否改变。然后分别用IL-6和TGF-β单独处理后检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关因子和破骨细胞分化因子的表达。进一步利用siRNA干扰ERβ的表达,检测在17β-雌二醇诱导下IL-6和TGF-β表达的改变。[结果]雌激素能够诱导MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白、骨保护素、骨钙素的生成。雌激素处理后细胞因子IL-6的生成受到抑制,而TGF-β的表达上调。干扰了ERβ后,17β-雌二醇处理MC3T3-E1细胞后白细胞介素6及TGF-βmRNA的表达无明显改变。[结论]雌激素通过ERβ,调控IL-6和TGF-β的表达,进而调节成骨细胞的功能和骨的形成。     

17β-雌二醇下调人成骨细胞CTGF表达的信号转导机制研究

目的 探讨17β-雌二醇下调人成骨细胞CTGF表达的信号转导机制。方法 人成骨细胞分别用10^-8mol／LE2及雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKA阻断剂H-89、PKC阻断剂H-7、NF-kB阻断剂PDTC、PKA活化剂forskolin干预24h，采用Northern blotting、Western blotting分析CTGFmRNA、蛋白表达水平的变化。结果 10^-8mol／L雌二醇可明显下调人成骨细胞CTGFmRNA及蛋白的表达；PKA阻断剂H-89可完全阻断雌二醇对CTGF的降调节作用，而雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKC阻断剂H-7、NF-kB阻断剂PDTC对雌二醇介导的CTGF降调节无明显作用。PKA活化剂forskohn可明显下调人成骨细胞CTGFmRNA、蛋白的表达，雌二醇组与forskolin组相比，CTGFmRNA、蛋白的水平无明显差异。结论 17β-雌二醇下词人成骨细胞CTGF表达由PKA介导，雌激素核受体、PKC、NF-kB信号转导通路均不参与雌激素介导的CTGF降调节。     

17-β雌二醇对肾间质纤维化防治作用的探讨

目的探讨17-β雌二醇对肾间质纤维化防治作用可能的机制。方法雌性SD大鼠30只，随机分为4组：①对照组；②生理雌激素组；③低雌激素组；④17-β雌二醇组。21d后光镜观察单侧梗阻肾组织病理改变；通过免疫组化方法检测转化生长因子（TGF-β1）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）；并用RT-PCR方法检测肾组织α-SMAmRNA的表达。结果单侧输尿管梗阻各组出现肾小管间质纤维化改变，其肾组织TGF-β1。和α-SMA表达上调（P〈0．01）；与生理雌激素组相比，低雌激素组纤维化病变加重，上述物质表达均明显增多（P〈0．05）；而17-β雌二醇组则病变均减轻（P〈0．05）。结论注射17-β雌二醇可能通过下调TGF-β1，和α-SMA的表达，抑制细胞外基质的生成，进而韶到延绣肾间后纤维化的作用．     

17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物家族的作用

目的观察17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物家族 (insulin receptor substrate IRS)表达的影响。探讨雌、孕激素对骨的作用机制。方法从正常骨折病人骨组织中分离正常人成骨细胞,经纯化和培养后,用Van Gieson行Ⅰ型胶原染色、钙钴法行碱性磷酸酶染色、茜素红行钙化结节染色进行成骨细胞鉴定。用半定量RT-PCR检测细胞IRS-1、- 2、-3 mRNA表达量。结果分离和培养的细胞具有正常人成骨细胞的形态,能分泌Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶并形成钙化结节。17β-雌二醇和／或孕酮均不影响人成骨细胞和MG-63细胞IRS-1mRNA 的表达(P>0．05),可诱导人成骨细胞和MG-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调(P<0．05),IRS- 3 mRNA的表达下调(P<0．05)。二者联合干预时作用明显加强(P<0．01)。结论 17β-雌二醇和孕酮均不影响IRS-1 mRNA的表达,但可使人成骨细胞和MC-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调, IRS-3mRNA的表达下调,二者联合干预具有正性协同效应。不同的IRS家族成员对同一细胞具有效应的多样性。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜问质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-立群雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48h；此后选用10^-10mol／L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blotting）检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182，780（10μmol／L）对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达，并呈剂量和时间依赖性，于10^-10mol／L作用48h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182，780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt／β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

三七皂苷调控Wnt/β-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠的作用机制研究

目的：探究不同剂量三七皂苷对激素性股骨头坏死模型大鼠骨力学参数的影响及对Wnt/β-catenin信号通路分子的干预作用。方法：50只SD大鼠分为对照组、模型组、三七皂苷低剂量组、三七皂苷中剂量组和三七皂苷高剂量组,每组10只,采用20 mg/(kg·d)甲基强的松龙诱导激素性股骨头坏死大鼠模型,每周注射3次,连续注射3周,对照组注射等量生理盐水。造模成功后,三七皂苷低、中、高剂量分别给予5、10、20 mg/(kg·d)剂量的三七皂苷灌胃6周,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。实验终点检测大鼠骨密度、骨生物力学指标、骨形态学指标;通过ELISA法检测各组大鼠血清中抗酒石酸碱性磷酸酶（TRAP）、尿I型胶原交联N末端肽（U-NTX）、骨碱性磷酸酶（BALP）、雌二醇（E2）、尿型胶原交联C末端肽（U-CTX）、骨钙蛋白（BGP）等骨转化指标;通过qPCR、Western blot法及免疫组化检测骨组织中Wnt/β-catenin信号通路关键分子Wnt5a和c-Myc的mRNA和蛋白表达水平。结果：三七皂苷能显著增加股骨头坏死大鼠股骨、脊柱骨的骨密度,提高股骨生物力学参数水平（P &l...     

17β-雌二醇调控骨外膜来源成骨样细胞雌激素受体及相关受体α基因表达

目的 探讨雌激素受体（estrogen receptors，ER）及雌激素相关受体α（estrogen related—receptord，ERRα）基因在骨外膜来源成骨样细胞的表达及其与雌激素调控的关系。方法6周龄、雌性Wistar大鼠颅骨骨外膜来源的成骨样细胞分别在含有0．01、0．05、0．1、0125、0．5、0．75、1.5、10nmol／L9种浓度17β-雌二醇（17β—E2）或对照的成骨诱导培养液中培养7d，提取细胞总RNA，采用RT—PCR法分析ER及ERRα基因的表达情况。结果 ERα基因表达阴性，ERβ基因呈弱表达。从0-0．25nmol／L范围内可以看剑ERβ的表达水平有上升趋势。5nmol／L和10nmol／L雌激素组ERβ的表达水平显著低于其他雌激素组（P〈0．01）ERRα表达阳性，各雌激素组的表达水平均显著高于对照组（P〈0．01）。0．25nmol／L组的ERRα表达水平最高、0．5nmol／L组次之，两组的表达水平显著高于其他雌激素组（R0．05）；10nmol／L组表达水平昆若低于其他雌激素组（P〈0．05）。结论 雌激素上调了骨外膜来源成骨样细胞ERRα的表达水平，低水平的雌激素有可能上调ERβ的表达水平。血清17β—E2水平维持在早、晚卯泡期的生理浓度有可能扶得最佳的骨保护疗效。     

补肾中药对增龄成骨细胞VDR蛋白表达的影响

目的 观察维生素D受体（VDR）蛋白在增龄大鼠成骨细胞中的表达，研究补肾中药对增龄大鼠成骨细胞VDR蛋白的影响，探讨补肾中药促进骨形成的新机制。方法 来源于不同年龄的大鼠成骨细胞被分离，采用组织块翻转方法培养。通过倒置显微镜观察细胞形态、矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。采用免疫组化和western blot方法检测成骨细胞VDR蛋白表达。结果 免疫组化和western blot结果表明，在增龄大鼠成骨细胞中，补肾益精方、固本壮骨胶囊、金匮肾气丸可上调VDR蛋白表达，但是知柏地黄丸对于VDR蛋白表达的影响却存在着差异。结论 补肾益精方、固本壮骨胶囊、金匮肾气丸上调增龄成骨细胞VDR蛋白的表达，但知柏地黄丸对于VDR蛋白表达的影响却存在着明显的差异。     

脱氢表雄酮在体外对成骨细胞代谢和IL-1β的影响

目的探讨脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）对离体大鼠成骨细胞和IL-1β的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞，取传一代细胞，分别给予10^-5mmoL／L、10^-7mmoL／L、10^-9mmol／LDHEA培养72h，以10^-8mmoL／L雌二醇（estradiol，E2）为阳性对照，另设空白对照组。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色鉴定成骨细胞，MTT法检测成骨细胞的增殖能力，PNPP法测定ALP活性。ELISA法测定不同浓度DHEA培养液中IL-1β的水平。结果不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力和ALP的活性均有上升，其中以10^-7mmoL／LDHEA组最显著（P〈0．01），其作用和E2相似（P〉0．05）；10^-9mmoL／LDHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组（P〈0．05）。不同浓度的DHEA组IL-1β呈下降趋势，成骨细胞增殖能力及ALP活性和IL-1β成负相关。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖，提高ALP活性，其作用可能和抑制IL-1β有关。     

17β-雌二醇通过整联蛋白α1β1、α2β1抗大鼠髓核细胞凋亡的实验研究

目的 探索胞膜整联蛋白α1β1、α2β1参与的17β-雌二醇抗大鼠腰椎间盘髓核细胞凋亡的作用机制.方法 原代培养大鼠髓核细胞,细胞传代至第3代,用不含胎牛血清和酚红的培养液培养,按以下分组实验:对照组,加入少量乙醇作为对照;雌激素组,加入17β-雌二醇干预;雌激素+抑制剂组,加入17β-雌二醇和雌激素受体抑制剂ICI 182780干预.细胞培养48 h后,行流式细胞术以及TUNEL法检测细胞凋亡;细胞-胶原黏附实验检测细胞与Ⅰ、Ⅱ型胶原的粘附水平;western印迹法对整联蛋白亚基α1、α2、β1定量检测.结果 免疫细胞化学检测到髓核细胞Ⅱ型胶原呈阳性,髓核细胞纯度较高.各组细胞凋亡率的差异有统计学意义(F=24.20,P＜0.001).雌激素组凋亡率低于对照组和雌激素+抑制剂组,对照组与雌激素+抑制剂组差异无统计学意义.各组细胞对Ⅰ型胶原的黏附水平差异无统计学意义,对Ⅱ型胶原的黏附水平差异有统计学意义(F=10.68,P＜0.05),雌激素组高于对照组和雌激素+抑制剂组,对照组与雌激素+抑制剂组差异无统计学意义.整联蛋白α1亚基表达水平差异无统计学意义.α2和β1亚基表达水平差异均有统计学意义,雌激素组高于对照组和雌激素+抑制剂组,对照组与雌激素+抑制剂组差异无统计学意义.结论 17β-雌二醇抗大鼠髓核细胞凋亡,其作用机制为上调了整联蛋白α2β1的表达,进而增强了细胞与胞外Ⅱ型胶原的黏附作用.     

α-玉米赤霉醇对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的 探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)向成骨细胞增殖、分化的影响。方法 采用全骨髓培养差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为空白对照组、雌二醇阳性对照组、低浓度α-ZAL组、中浓度α-ZAL组,高浓度α-ZAL组。镜下每天观察细胞形态变化,碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞纯度,MTT实验测定细胞增殖活性绘制细胞生长曲线,采用酶联免疫吸附法(ELISΑ)测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨形态发生蛋白2( Bone morphogenetic protein-2,BMP-2),运用蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）检测护钙素（Osteoprotegerin,OPG）和NF-KB受体活化配体（Receptor actiator of nuclear factor-KB ligand, RANKL）的蛋白水平表达变化。结果 不同浓度的α-玉米赤霉醇可显著的促进小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖、分化,增加细胞活性（P<0.05）,明显提高小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化后ALP和BMP-2的表达（P<0.05）,并且显著的上调了成骨细胞内OPG/ RANKL的表达率（P<0.05）。结论 不同浓度的α-玉米赤霉醇可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖、分化,并且通过上调OPG/ RANKL的表达率抑制成骨细胞细胞向破骨细胞分化,有望成为临床骨折疏松症治疗的激素替代药物。     

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732 增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线^3H-TDR掺入、ALP、BGP的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了17β-雌二醇OS-732细胞增殖和分化的影响及骨粘连蛋白（ON）mRNA表达的影响。结果显示：17β-雌二醇以剂量领带性促进OS-732细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明OS-732细胞上存在ER受体，且给药后核内ER增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明OS-732上存在（ON）mRNA的表达，而给药后无明显变化。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48 h;此后选用10-10mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L作用48 h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182,780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠子宫及骨组织 ERα和 ERβmRNA 表达的影响

目的：研究骨靶向雌激素大黄酸-雌酮（ LC）对去卵巢大鼠骨组织中的ERα和ERβmRNA表达的影响。方法72只6月龄雌性未孕Wistar大鼠，分为6组：假手术组（ Sham）、去卵巢模型组（ OVX）、雌酚酮组（ E，OVX＋雌酚酮1.0 mg/kg· d）、大黄酸-雌酮高（ H-LC， OVX＋LC 1.0 mg/kg· d）、中（ M-LC，OVX＋LC 0.5 mg/kg· d）、低（ L-LC，OVX＋LC 0.25 mg/kg· d）剂量组，除假手术组外其余各组均行双侧卵巢切除。给药24周后，采用放射免疫方法测定血中雌二醇水平，采用RT-PCR法测定子宫及骨组织ERα和ERβmRNA水平。结果与Sham组比较，OVX组雌二醇水平明显降低，与OVX组比较，E组和H-LC、M-LC组大鼠血清雌二醇明显升高，L-LC组与OVX组无明显差别。 Sham组胫骨近端ERαmRNA和ERβmRNA均有表达，OVX组ERβmRNA表达水平与Sham组相比降低，未检出ERαmRNA。 E组ERαmRNA和ERβmRNA水平均与Sham组无差异，大黄酸-雌酮各组均未检出ERαmRNA，ERβmRNA相对表达量高于OVX组，大黄酸-雌酮各剂量组之间ERβmRNA无明显差异。Sham组大鼠子宫组织有ERαmRNA和ERβmRNA表达，OVX组ERαmRNA表达量明显降低，未检出ERβmRNA。 E组大鼠子宫组织ERαmRNA和ERβmRNA均较OVX组上调。大黄酸-雌酮各剂量组之间ERαmRNA无明显差异，但均低于E和Sham组。结论大黄酸-雌酮在骨及子宫均能选择性上调ERβmRNA表达，而对ERαmRNA无影响，雌酚酮对两种亚型无选择性，这可能是大黄酸-雌酮对骨具有保护作用而对子宫并无雌激素样刺激作用的原因之一。     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均0.05),成骨染色更为显著(P均0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P0.05)。结论 lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。     

雌激素对β淀粉样蛋白(25~35)诱导大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响

目的研究雌激素抑制β淀粉样蛋白(Aβ)诱导大鼠神经细胞凋亡的作用机制。方法通过乳酸脱氢酶(LDH)释放率的测定及膜联蛋白V/碘化丙啶双染色流式细胞术观察17β-雌二醇(17β-E2)对Aβ(25~35)诱导的大脑皮质神经元细胞死亡及凋亡的影响,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Bcl-2在转录水平的表达。结果Aβ(25~35)可以诱导大鼠皮质神经元细胞凋亡,下调抗凋亡分子Bcl-2的表达。17β-E2预处理48 h显著抑制Aβ(25~35)诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡,并且显著抑制Aβ(25~35)下调Bcl-2表达的作用。结论Aβ可以通过下调抗凋亡分子Bcl-2的表达诱导原代培养的大鼠皮质神经元细胞凋亡,雌激素可以通过上调抗凋亡分子Bcl-2的表达来抑制Aβ诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡。