胰岛素联合顺铂对人宫颈癌细胞株HeLa生长的影响

目的：观察胰岛素（INS）联合顺铂（DDP）对人宫颈癌 HeLa 细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法体外培养的人宫颈癌细胞株（HeLa）经INS、DDP单独或联合作用后,MTT检测细胞增殖抑制情况;Annexin V-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡;流式细胞仪检测不同加药处理组的细胞周期时相变化情况;Western blot 印迹方法检测细胞中 JNK2、p-JNK2及caspase-3蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示：INS无抑制细胞增殖作用,DDP单药组与联合用药组均能抑制细胞的增殖,两药联合时细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义（P=0.000）,细胞凋亡结果显示：INS无促细胞凋亡的作用,联合用药组的细胞凋亡率明显高于DDP单药组（P〈0.01）。细胞周期结果显示：DDP、INS单药均能促进细胞由G1期向S期转变;联合用药组HeLa细胞S期比例增加更加明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot 结果显示：实验组与对照组比较,JNK2蛋白水平无明显变化, p-JNK2、caspase-3于DDP组及 DDP＋INS 组中表达增加,联合用药时增加更为明显,与DDP组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）,而在INS组中三种蛋白表达变化均不明显。结论 INS 可增强DDP对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与协同DDP促进细胞由G0期步入S期,上调p-JNK2及 caspase-3蛋白表达有关。     

姜黄素联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株的影响

目的观察姜黄素联合顺铂(DDP)对人前列腺癌PC-3细胞株抗肿瘤活性作用的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测姜黄素单独或联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株的抑制率;采用流式细胞术检测不同浓度姜黄素和顺铂单药、联合处理后对人前列腺癌PC-3细胞株凋亡率变化;RT-PCR检测姜黄素单独或联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株作用后P53的mRNA蛋白表达。结果不同浓度的姜黄素组随着药物浓度增加、作用时间延长,细胞抑制率上升,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P<0.05),两药联合具有协同作用;姜黄素和顺铂均促进人前列腺癌PC-3细胞株凋亡,联合用药可显著增加凋亡率;RT-PCR结果显示联合用药组能使P53 mRNA蛋白表达水平较单药组上升。结论姜黄素对人前列腺癌PC-3细胞株具有生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,其与顺铂联合具有协同抑制作用,其协同作用可能与上调P53 mRNA表达有关。     

苦参素注射液与顺铂联合对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响

目的:探讨苦参素注射液与顺铂(DDP)联合对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERTmRNA表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,半定量RT-PCR法检测wtp53和hTERTmRNA表达。结果:苦参素注射液、DDP单独应用均能抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合具有单纯相加或协同作用,与DDP单药组相比,联合用药组的细胞抑制率明显增加(P<0.01),端粒酶活性显著下降(P<0.01),wtp53mRNA表达明显升高(P<0.01),hTERTmRNA表达明显减少(P<0.01)。结论:苦参素注射液和DDP联合应用具有单纯相加或协同抗肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,其机制可能通过上调wtp53和下调hTERT基因表达,从而有效抑制端粒酶活性。     

塞来昔布联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移与侵袭能力的影响

目的评价塞来昔布联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移与侵袭能力的影响。方法采用MTT法检测药物对HepG2细胞增殖的抑制率;通过划痕实验、Transwell实验评价药物对HepG2细胞迁移与侵袭作用的影响;采用Western blot法检测相关蛋白E-cadherin、COX-2、Notch1、Snail的表达。结果塞来昔布与索拉非尼联用有协同抑制HepG2细胞增殖的作用。与对照组比较,两药单独用药及联合用药均可抑制HepG2细胞迁移与侵袭作用(P<0.05或P<0.01)。塞来昔布无显著增强索拉非尼诱导HepG2细胞E-cadherin表达增加的作用,也无显著降低索拉非尼诱导HepG2细胞Notch1、Snail表达下降的作用;索拉非尼无显著增强塞来昔布诱导HepG2细胞COX-2表达下降的作用。结论塞来昔布可增强索拉非尼的抗HepG2细胞增殖作用,但不影响索拉非尼抑制的HepG2细胞迁移与侵袭作用。     

根皮苷可增强索拉非尼抑制肝癌细胞能量代谢及活力

目的：探讨根皮苷联合索拉非尼对肝癌细胞能量代谢与凋亡的影响。方法：将根皮苷5 μmol/L和（或）索拉非尼5 μmol/L作用于HepG2细胞48 h后,检测肝癌细胞活力、肝癌细胞葡萄糖摄取与细胞内ATP含量、caspase-3活力与凋亡细胞计数。结果：索拉非尼组肝癌细胞活力降低,与对照组差异有统计学意义（P<0.05）;索拉非尼与根皮苷联合组肝癌细胞活力进一步降低,与其他各组（对照组、索拉非尼组及根皮苷组）差异均有统计学意义（P<0.05）。根皮苷组葡萄糖摄取及ATP生成减少,与对照组差异有统计学意义（P<0.05）;索拉非尼与根皮苷联合组葡萄糖摄取及ATP生成进一步减少,与其他组差异均有统计学意义（P<0.05）。索拉非尼组与根皮苷组caspase-3活力与细胞凋亡较对照组增强（P<0.05）;索拉非尼与根皮苷联合组caspase-3活力与细胞凋亡进一步增强,与其他组差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：根皮苷可以通过抑制肿瘤细胞ATP生成和促进肿瘤细胞凋亡来提高索拉非尼疗效。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合顺铂对小鼠移植型肝癌抑制作用的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）联合顺铂（DDP）对小鼠移植型肝癌的抑制作用。方法 H22肝癌移植瘤小鼠随机分为生理盐水（对照）组、TRAIL组、TRAIL＋DDP组和DDP组,称取瘤重分析其抑瘤作用、流式细胞检测细胞凋亡率。结果 （1）与对照组相比,TRAIL、DDP对小鼠移植性肝癌生长均有明显的抑制作用（P〈0.01）,TRAIL与DDP联用有增效作用（P〈0.05）。TRAIL组、DDP组及TRAIL＋DDP组的抑瘤率分别为45.14%、57.98%和77.23%。（2）与单一用药组相比,TRAIL与DDP联用可明显提高肿瘤细胞的凋亡率。结论 TRAIL与DDP联用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用。     

茶多酚联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响及机制

目的观察茶多酚(TP)、顺铂(DDP)及二者联合对人卵巢癌细胞SKOV3增殖及凋亡的影响,初步探讨二者联合对SKOV3细胞生长影响的机制。方法人卵巢癌细胞SKOV3经低毒剂量TP、DDP单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,DAPI核染色法荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化,AnnexinV-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot方法检测细胞中Akt及p-Akt的表达。结果低毒剂量TP单药组、DDP单药组与联合用药组对细胞的增殖抑制率分别为(11.47±2.07)%、(32.26±4.85)%、(52.62±3.23)%,联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);荧光显微镜下可见低毒剂量TP单药组的细胞核形态及染色与阴性对照组无明显差异,联合用药组细胞核比DDP单药组着色更重,核浓缩、核碎裂现象更加明显,呈现典型的细胞凋亡征象;低毒剂量的TP对细胞的凋亡无明显影响,联合用药组的凋亡率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);各用药组细胞中总的Akt蛋白表达无明显变化,p-Akt蛋白表达降低,其中联合用药组细胞中p-Akt蛋白表达降低最明显,与对照组及单药组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 TP与DDP联合后可显著增强DDP的抑制细胞增殖、促细胞凋亡效应,可能是通过抑制Akt蛋白的磷酸化来实现的。     

Evn一50增强人卵巢癌顺铂耐药株COCl／DDP对顺铂敏感性的研究

目的 观察黄荆子乙酸乙酯提取物（Evn-50）和顺铂（DDP）在体外对人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP凋亡的影响,探讨Evn-50提高人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP对DDP敏感性的机制.方法 运用MTT、FCM、Hoechst33258染色法、Western blot等方法,观察Evn-50增强DDP抑制COC1/DDP细胞增殖作用和此过程中COC1/DDP细胞凋亡,caspase-3蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）及其泛素化修饰蛋白（Ubi-PCNA）表达的改变.结果 Evn-50不仅增强DDP对COC1/DDP细胞的抑制增殖作用,也增强DDP对COC1/DDP细胞的凋亡作用,同时caspase-3蛋白表达增加（P〈0.05）;而Evn-50（20 μg/ml）组与空白对照组相比PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）,Evn-50与DDP合用组与DDP单药组均出现了Ubi-PCNA蛋白表达,Evn-50与DDP合用组与DDP组比较,Ubi-PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）.结论 Evn-50可能通过减少PCNA表达,使DDP诱导的PCNA泛素化水平下降,从而逆转DDP耐药,最终通过激活caspase-3蛋白高表达,启动caspase级联反应,增强DDP对人卵巢癌DDP耐药细胞株COC1/DDP的凋亡作用.     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

川芎嗪联合顺铂治疗Lewis肺癌的实验研究

【目的】观察川芎嗪联合顺铂对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用。【方法】复制Lewis肺癌小鼠移植瘤模型，将40只接种Lewis肺癌细胞C57BL／6小鼠随机分成4组：对照组、顺铂组（DDP）、川芎嗪组（TMP）、联合组（DDP＋TMP）。治疗期间，观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19d后，处死全部小鼠，剥离皮下肿瘤，称小鼠肿瘤瘤重量，计算出抑瘤率以及肿瘤坏死情况。【结果】顺铂组川芎嗪组、联合组与对照组相比肿瘤抑制率升高，联合治疗组小鼠抑瘤率明显高于川芎嗪组（P〈0．01）与顺铂组（P〈0．01）。联合治疗组肿瘤坏死率明显高于顺铂组（P〈0．05），与川芎嗪组比较，差异无显著性（P〉0．05）。联合治疗组小鼠毒副反应明显低于顺铂组，生存质量优于顺铂组。【结论】川芎嗪和顺铂对Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长具有协同抑制作用，并能降低毒副反应，提高生存质量。     

参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同抑制作用

目的 探讨参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同作用及其可能机制.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法测定细胞增殖情况;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化;RT-PCR检测VEGF、Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达.结果 MTT法显示参麦及顺铂能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用具有时间及浓度依赖性,单用顺铂组,有效浓度为1.25 μg/ml,起效时间为72 h,其抑制率为(8.70±0.57)%,联合用药组,有效浓度为顺铂0.625 μg/ml,起效时间为48h,其抑制率为(8.87±0.10)%.行Hoechst33258染色可见细胞核出现固缩、边集,形成凋亡小体等凋亡现象;RT-PCR检测显示:与对照组相比,药物作用后Bcl-2、VEGF的mRNA表达降低,Caspase-3mRNA表达升高.结论 参麦与顺铂联合对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用顺铂相比,参麦与顺铂联合可有效减少顺铂的用药剂量,促进凋亡,其作用与协同促进Caspase-3的高表达及Bcl-2、VEGF的低表达有关.     

索拉非尼联合柔红霉素对K562细胞株协同作用的研究

本研究探讨索拉非尼(sorafenib,SOR)联合柔红霉素(daunorubicin,DNR)对K562细胞株的增殖活性及凋亡的影响。采用MTT法检测K562细胞株在索拉非尼单药及联合柔红霉素作用下增殖的抑制效应,根据两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)评价两药相互作用性质,并用Hoechst33258荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果表明:索拉非尼单药及联合柔红霉素对K562细胞株有显著的抑制效应,而且两药联合应用具有协同作用,联合组凋亡细胞增加。结论:柔红霉素和索拉非尼联合作用于白血病细胞株K562呈现明显的协同抑制作用。     

Everolimus augments the effects of sorafenib in a syngeneic orthotopic model of hepatocellular carcinoma

Sorafenib targets the Raf/mitogen-activated protein kinase, VEGF, and platelet-derived growth factor pathways and prolongs survival patients in advanced hepatocellular carcinoma (HCC). Everolimus inhibits the mammalian target of rapamycin, a kinase overactive in HCC. To investigate whether the antitumor effects of these agents are additive, we compared a combined and sequential treatment regimen of everolimus and sorafenib with monotherapy. After hepatic implantation of Morris Hepatoma (MH) cells, rats were randomly allocated to everolimus (5 mg/kg, 2×/week), sorafenib (7.5 mg/kg/d), combined everolimus and sorafenib, sequential sorafenib (2 weeks) then everolimus (3 weeks), or control groups. MRI quantified tumor volumes. Erk1/2, 4E-BP1, and their phosphorylated forms were quantified by immunoblotting. Angiogenesis was assessed in vitro by aortic ring and tube formation assays, and in vivo with Vegf-a mRNA and vascular casts. After 35 days, tumor volumes were reduced by 60%, 85%, and 55%, relative to controls, in everolimus, the combination, and sequential groups, respectively (P < 0.01). Survival was longest in the combination group (P < 0.001). Phosphorylation of 4E-BP1 and Erk1/2 decreased after everolimus and sorafenib, respectively. Angiogenesis decreased after all treatments (P < 0.05), although sorafenib increased Vegf-a mRNA in liver tumors. Vessel sprouting was abundant in control tumors, lower after sorafenib, and absent after the combination. Intussusceptive angiogenic transluminal pillars failed to coalesce after the combination. Combined treatment with everolimus and sorafenib exerts a stronger antitumoral effect on MH tumors than monotherapy. Everolimus retains antitumoral properties when administered sequentially after sorafenib. This supports the clinical use of everolimus in HCC, both in combination with sorafenib or after sorafenib.     

联合化疗方案治疗非小细胞肺癌对照研究

目的：探讨联合化疗方案治疗非小细胞肺癌的临床效果。方法将60例非小细胞肺癌患者按照随机数字表法分为两组，每组30例，两组均常规予以吉西他滨、顺铂治疗，实验组在此基础上联合索拉非尼治疗，随访3 a。采用实体肿瘤疗效评价标准评估两组近期、远期治疗效果，随时记录不良反应发生状况。结果治疗后两组近期、远期治疗效果比较差异均无显著性(P >0.05)，实验组除手足综合征发生率显著高于对照组(P <0.05)外，其他不良反应发生率与对照组比较差异均无显著性(P >0.05)。结论吉西他滨、顺铂联合索拉非尼联合化疗方案对改善非小细胞肺癌患者的总生存期和远期存活率效果不明显，临床应根据患者病理特点和生物标记物进行个体化治疗。     

化疗及序贯放疗后手术治疗局部晚期食管癌30例分析

目的探讨应用紫杉醇＋顺铂方案化疗及序贯放疗后,再行手术治疗局部晚期食管鳞癌的近期疗效。方法局部晚期食管鳞癌患者30例,应用紫杉醇＋顺铂方案化疗2个周期后,序贯常规剂量分割放疗40Oy,放疗结束4周行食管癌切除＋重建消化道术;评定术前放、化疗疗效,观察放、化疗不良反应及手术切除率、病理客观缓解率、并发症发生率、术后病死率。结果30例均完成术前放、化疗,临床有效率为83．3％;2例不接受手术者继续放、化疗,余28例手术治疗者中1例侵犯主动脉未能切除,27例行根治性切除,手术切除率96．4％;术后并发肺部感染8例,吻合口瘘2例,声音嘶哑1例,吻合口狭窄1例,围手术期死于急性呼吸窘迫综合征1例。结论局部晚期食管鳞癌患者在紫杉醇＋顺铂方案化疗及序贯放疗后行手术治疗,可提高临床有效率和手术切除率。     

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。 方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。 结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。