人类巨细胞病毒感染对脐动脉血管平滑肌细胞胆固醇代谢的影响

目的探讨人类巨细胞病毒感染对脐动脉血管平滑肌细胞内胆固醇代谢的影响及机制。方法自脐动脉分离平滑肌细胞,以1个感染复数(multiplicity of infection,MOI)的人类巨细胞病毒攻击,同时用含3%小牛血清的DMEM/F12维持液进行模拟感染以用作对照。测定病毒攻击后平滑肌细胞内胆固醇含量的变化,以基因表达谱芯片技术检测病毒攻击后细胞基因表达谱的变化,研究与胆固醇代谢有关酶的变化并经荧光定量RT-PCR验证。结果细胞内胆固醇含量在病毒感染后72h[(0.71±0.06)μmol/106 cells]显著高于模拟感染组(P=0.000 2)。脐动脉平滑肌细胞被人类巨细胞病毒攻击后48、72h,细胞中与胆固醇合成代谢有关的HMG-CoA合成酶及HMG-CoA还原酶的表达明显上调(P<0.01)。结论人类巨细胞病毒感染可能通过上调HMG-CoA合成酶及HMG-CoA还原酶基因的表达水平,导致血管平滑肌细胞内胆固醇合成增加,引起细胞内胆固醇代谢失衡。     

干扰素-γ、一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖的关系

目的：研究干扰素γ与一氧化氮合酶、一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系。方法：将不同质量浓度的干扰素γ（２５０～１０００Ｕ·ｍｌ－１）作用于培养的血管平滑肌细胞中,采用［３Ｈ］ＴｄＲ掺入、细胞生长曲线和定量ＲＴＰＣＲ等方法检测血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达,一氧化氮产生及血管平滑肌细胞增殖。结果：干扰素γ可以诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因及酶蛋白,产生一氧化氮并呈质量浓度依赖。同时还发现干扰素γ抑制血管平滑肌细胞的ＤＮＡ合成及细胞增殖与一氧化氮的产生是相平行的。结论：干扰素γ能通过诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因产生一氧化氮来抑制血管平滑肌细胞增殖     

受体活性修饰蛋白1基因载体构建及其对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨受体活性修饰蛋白1(RAMP1)表达载体的构建及其高表达RAMP1对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法通过构建RAMP1大鼠基因开放阅读框的真核表达载体,利用脂质体将其转入原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,G418筛选稳定表达细胞集落。逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹法检测RAMP1的表达量;MTT法测定细胞的增殖或生存率,并计算细胞倍增时间。结果成功构建RAMP1基因真核表达载体,脂质体能将RAMP1表达载体稳定转入血管平滑肌细胞,RAMP1高表达能明显增强降钙素基因相关肽抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞生存率及明显延长其倍增时间。结论RAMP1高表达能增强CGRP抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

骨桥蛋白特异性短发夹RNA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的应用特异性短发夹RNA(shRNA)抑制血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达,观察其对体外培养的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法根据大鼠骨桥蛋白基因设计靶序列,采用体外转录方法获取shRNA,以此转染血管平滑肌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应、Western blot等方法检测骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达;用MTT法检测shRNA对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果与未转染特异性shRNA细胞相比,转染shRNA的细胞中骨桥蛋白mRNA、蛋白表达量均明显降低,抑制率分别为(76.3±3.4)%和(68.7±4.6)%。血管平滑肌细胞的增殖也受到明显的抑制。结论设计的靶序列能有效沉默血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因的表达,为进一步构建载体和体内研究奠定了基础。     

大鼠SOCS3基因重组腺病毒载体的构建及转染血管平滑肌细胞后的表达

目的 构建携带大鼠SOCS3基因的重组腺病毒载体并转染大鼠血管平滑肌细胞,评价其转染效果,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定基础.方法 用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ将目的基因pUC57-Simple-rSOCS3及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle- 4(带GFP标记)行双酶切.回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化至DH5α感受态.提取质粒酶切鉴定正确后测序.通过LR体外同源重组将rSOCS3表达框构建至pAd/PL-DEST腺病毒表达载体上.将腺病毒线性化后转染HEK293细胞包装腺病毒,PCR鉴定此腺病毒中是否含有rSOCS3基因.放大培养并收集病毒,TCD法测定病毒滴度.将此病毒感染大鼠血管平滑肌细胞,荧光显微镜观察感染效率,real-time PCR及免疫印迹检测SOCS3 mRNA及蛋白表达.结果 rSOCS3腺病毒穿梭质粒酶切鉴定正确,测序与rSOCS3基因库中的序列完全相符.PCR鉴定pAd/PL-DEST腺病毒表达载体成功携带目的基因rSOCS3.TCD法测定的最终滴度为2×1010pfu/mL.荧光显微镜观察此病毒感染血管平滑肌细胞的效率在80％以上,real-time PCR及免疫印迹检测结果显示血管平滑肌细胞中SOCS3 mRNA及蛋白表达明显上调.结论 成功构建携带大鼠SOCS3基因的腺病毒载体,并在血管平滑肌细胞中高表达,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定了基础,具有一定的应用价值.     

干扰素—γ,一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖的关系

目的 研究干扰素γ与一氧化氮合酶,一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系,方法 将不同质量浓度的干扰素－γ（２５０－１０００Ｕ．ｍｌ＾－１）作用于培养血管平滑肌细胞中,采用（＾３Ｈ）ＴｄＲ掺入,细胞生长曲线和定量ＲＴ－ＰＣＲ等方法检测血管平滑细胞一氧化氮合酶基因表达,一氧化氮产生及血管平滑肌细胞增殖。结果;干扰素－γ可以诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因及酶蛋白,产生一氧化氮并呈质量浓度依赖。     

氧化低密度脂蛋白、低氧和5-HT对血管平滑肌细胞5-HT2A受体及胞内游离钙的影响

目的　为探讨粥样硬化病变动脉对 5 - HT收缩反应增加的机制 ,观察与粥样硬化有关因子氧化低密度脂蛋白 (ox L DL)、低氧、5 - HT对血管平滑肌细胞 5 - HT2 A受体及其基因表达 ,以及细胞 [Ca2 ]i的效应。方法　分别将大鼠主动脉平滑肌细胞单独以 5 0 μg/ m l ox L DL 培养 8h,2 %低氧处理 2 4和 48h,10 μm ol/ L 5 - HT处理30 min,放射配基结合分析测定 5 - HT2 A受体 ;RT- PCR和 Southern杂交检测受体基因的 m RNA;激光共聚焦扫描显微镜测单个细胞 [Ca2 ]i。结果　经 ox L DL、低氧、 5 - HT处理 ,血管平滑肌细胞 5 - HT2 A受体显著上调 (P<0 .0 1) ;ox L DL及低氧处理的受体基因的 m RNA表达增加 ;ox L DL、低氧处理后 ,5 - HT刺激的血管平滑肌细胞[Ca2 ]i升高幅度显著加大 (P<0 .0 5及 P<0 .0 1)。结论　 ox L DL、低氧、5 - HT引起血管平滑肌细胞 5 - HT2 A受体上调及细胞 [Ca2 ]i增加 ,可能是粥样硬化动脉对 5 - HT收缩反应增强的部分原因。     

反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,探讨反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 .方法 :通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ,用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体ODNs 抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ,用Western -Blot检测反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 .结果 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 0 5 ) ,明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 .结论 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,其抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 ,特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达来完成 .     

孤儿核受体Nur77对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨孤儿核受体Nur77对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,在ox-LDL及其相关成分7-酮胆固醇(7-KC)、9-HODE和13-HODE等条件刺激下,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、蛋白免疫印迹技术和免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测Nur77 mRNA和蛋白表达变化。用腺病毒感染血管平滑肌细胞过表达Nur77,通过细胞计数和Western Blotting观察Nur77对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 ox-LDL可诱导血管平滑肌细胞中Nur77 mRNA表达上调,并且在1 h时达到高峰;同时ox-LDL及其相关成分(7-KC、9-HODE和13-HODE),均可诱导血管平滑肌细胞中Nur77的蛋白表达明显上调。在ox-LDL刺激下,Nur77过表达组(Ad-GFP-Nur77)平滑肌细胞的细胞密度[(2.70±0.14)×104]及细胞增殖相关蛋白cyclin D1的表达明显低于对照组(Ad-GFP)平滑肌细胞的细胞密度[(3.95±0.26)×104]及cyclin D1的表达(P<0.05)。结论孤儿核受体Nur77抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

高脂饮食对大白兔DNA甲基化的影响及其与动脉粥样硬化的关系

DNA甲基化水平系真核细胞基因表达多层次调控机制中的重要环节.DNA甲基化作用和基因功能密切相关.整体甲基化水平的降低可使基因的调控能力下降.现认为,动脉粥样硬化(As)是一种以血管内皮细胞和平滑肌细胞增生为主要病变的疾病,与基因过度表达有关.据文献报道,在As斑块部位,伴随平滑肌细胞增生的同时,血管内皮生长因子(VEGF)基因、c-kit癌基因、H-ras癌基因等的表达也增高.为探讨DNA甲基化与As的关系,本研究随机将日本大耳兔(2个月龄、体重2.5～3.0 kg)分为正常对照组和高脂饮食组.     

人巨细胞病毒对兔平滑肌细胞LOX 1表达的影响

目的了解人巨细胞病毒(HCMV)感染对兔平滑肌细胞(SMC)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体 1(LOX 1)表达的影响,探讨HCMV在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的可能作用机制。方法采用RT PCR、Western blotting等技术检测HCMV ADl69株感染的兔SMC中LOX 1的表达。结果HCMV感染兔SMC后,LOX 1表达明显升高（P＜0.01）。结论HCMV可引起兔SMC中LOX 1的表达上调,这可能是HCMV参与AS的机制之一。     

染料木黄酮抗动脉粥样硬化的研究进展

研究调查表明,染料木黄酮(Gen)对肿瘤、骨质疏松、动脉硬化等疾病均可起到一定的治疗作用。随着对Gen的生物学作用和动脉粥样硬化发生机制越来越深入的研究,人们发现Gen可通过改善血管内皮细胞,抑制血小板聚集和激活,降低胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白和抗氧化作用,以及抑制血管平滑肌细胞增殖和抑制血管壁炎性反应,进而预防和治疗动脉粥样硬化。该文就Gen与动脉粥样硬化的关系进行阐述,并对其临床价值、应用前景进行展望。     

异黄酮对心血管作用的研究进展

本文回顾了近年来国内外对大豆异黄酮与心血管健康关系的研究。大量研究表明,大豆异黄酮通过对脂类代谢的影响、抗低密度脂蛋白氧化及脂质过氧化作用、对血管平滑肌细胞和血管顺应性的作用、抗血栓生成作用、对动脉粥样硬化相关基因表达的影响等方面,来预防和治疗心血管疾病。     

动脉粥样硬化过程中核因子E2相关因子2对血管平滑肌细胞的调控作用

动脉粥样硬化是心血管疾病中常见的病理改变。血管平滑肌细胞是斑块细胞和细胞外基质的主要来源,而核因子E2相关因子2（Nrf2）是调控血管平滑肌细胞功能的关键转录因子。在动脉粥样硬化过程中,Nrf2信号通路对血管平滑肌细胞具有以下调控作用：调控血管平滑肌细胞表型向有利于缓解疾病进程的方向转变,抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移,降低血脂水平,以及缓解血管平滑肌细胞钙化、衰老和凋亡等过程。本文对现阶段Nrf2在动脉粥样硬化中调控血管平滑肌细胞表型转换、增殖和迁移、脂代谢、钙化、衰老和凋亡等过程的具体机制进行综述,以期为深入理解动脉粥样硬化发生发展的分子机制及寻找治疗靶点提供依据。     

安心颗粒对血脂紊乱家兔血脂及主动脉超微结构的影响

目的:研究安心颗粒对家兔实验性血脂紊乱的防治作用.方法:采用食饵性血脂紊乱新西兰家兔为模型,以脂必妥片为对照药,观察安心颗粒对血脂、主动脉超微结构的影响.将32只新西兰家兔随机分为正常对照组、模型组、脂必妥片组、安心颗粒组等4组,分别给予普通饲料、高脂饲料、高脂饲料加脂必妥片、高脂饲料加安心颗粒.10周后,测定各组动物血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)、载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)水平,同时用电镜观察主动脉超微结构.结果:安心颗粒可以显著降低血脂紊乱新西兰兔血清TC、TG、LDL-C、ApoB水平;电镜下主动脉超微结构观察显示:安心颗粒组主动脉硬化病变较模型组和脂必妥片组轻,血管内皮细胞质内偶见小脂滴空泡,各种细胞器存在,内弹力膜存在,中层平滑肌细胞质内无脂滴空泡.结论:安心颗粒能调节兔的血脂代谢,对动脉粥样硬化病变有明显的抑制作用.     

人单纯疱疹病毒1型对血管平滑肌细胞脂质代谢的影响

目的：研究人单纯疱疾病毒1型（HSV－1）对血管平滑肌细胞（SMC）脂质代谢的影响，探讨HSV一且与动脉粥样硬化（AS）的关系。方法；以HSV－1感染体外培养的牛主动脉平滑肌细胞，观察细胞形态和超微结构的改变，以及细胞内脂质代谢的变化。结果：HSV－1感染后，用PCR法能检出SMC内存在HSV－1核酸片段；感染后24h和36h，感染组细胞内总胆固醇（CH）较对照组明显增高（P＜0．05），HE染色和电镜下均显示感染组细胞空泡样变。结论：HSV－1不但能在体外感染血管SMC，且能导致SMC内胆固醇积聚，可能促使SMC向SMC源性泡沫细胞转变，从而参与动脉粥样硬化的发病过程。     

普罗布考与氧化型低密度脂蛋白相关研究进展

近年来,大量的药理及临床试验发现调脂药普罗布考可稳定和消退动脉粥样硬化斑块,改善血管内皮功能,具有较好的抗动脉粥样硬化作用。氧化型低密度脂蛋白是引起动脉粥样硬化的主要危险因素。普罗布考可作用于氧化型低密度脂蛋白抑制其进一步氧化修饰,发挥抗氧化作用;也可通过抑制氧化型低密度脂蛋白诱导单核巨噬细胞产生的各种重要炎性细胞因子的表达而发挥抗炎作用;还可改善血管平滑肌的增殖,维持凝血、纤溶系统平衡等。普罗布考可通过多个靶点作用于氧化型低密度脂蛋白发挥抗氧化、抗炎、保护血管内皮、抗动脉粥样硬化作用。     

辛伐他汀对兔动脉粥样硬化血管平滑肌层GLUT-4mRNA的表达影响

目的观察三羟基三甲基辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂—辛伐他汀对兔动脉粥样硬化血管平滑肌层葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)mRNA的表达影响。方法通过高胆固醇喂养建立兔动脉粥样硬化模型,设正常对照组(n=8)、高脂组(n=9)、辛伐他汀组(n=9),第9、20周检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)。25周留取兔升主动脉、胸主动脉标本,病理形态学观察升主动脉组织学变化并进行病理形态学定量分析;逆转录多聚酶链式反应测定胸主动脉血管平滑肌层GLUT-4 mRNA的表达。结果高脂饮食诱导兔高胆固醇血症和动脉粥样硬化模型,外周血TC、TG、LDL升高,病理组织学显示内膜(I)/中层(M)厚度比值(I/M)、I M、内膜/中层面积比值(SI/SM)增大,动脉粥样硬化血管平滑肌层GLUT-4表达上调;辛伐他汀组血脂明显降低(P<0.05),I/M、I M以及SI/SM明显减小(P<0.05),同时可抑制GLUT-4 mRNA的表达,与高脂组相比差异有显著性(P<0.05)。结论辛伐他汀早期应用可显著抑制兔动脉粥样硬化的形成,显著降低高胆固醇诱导的兔血脂水平,减少兔动脉粥样硬化血管平滑肌层GLUT-4 mRNA的表达。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。