生防解淀粉芽胞杆菌的研究进展

解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)因能抑制植物病害和促进植物生长而被广泛研究。随着测序技术的不断发展,解淀粉芽胞杆菌菌株的全基因组序列陆续被测定,综述了其拮抗作用相关的功能基因、生防机制及植物-病原物-生防菌的相互作用,并对后续研究趋势进行了展望,为解淀粉芽胞杆菌的深入研究及其更好的应用提供理论参考     

抑制小麦赤霉病生防芽胞杆菌的筛选与相关研究

芽胞杆菌因其具有广谱的抑菌活性,在农业生产上常用于防控植物病害。本研究比较了五种芽胞杆菌发酵上清液对禾谷镰刀菌PH-1的抑制作用,结果发现枯草芽胞杆菌SCK6基本没有抑制效果,地衣芽胞杆菌BSK3和多粘芽胞杆菌BSK4有较弱的抑制作用,解淀粉芽胞杆菌TZ01和贝莱斯芽胞杆菌SH06抑制效果明显,其中贝莱斯芽胞杆菌SH06的抑制作用最为显著。进一步从不同培养基、培养时间及渗透剂对SH06菌株发酵条件进行了优化,结果表明在TB培养基中培养24 h并加入0. 5%TritonX-100的渗透剂时,发酵上清对禾谷镰刀菌PH-1的抑制效果最佳。本文为贝莱斯芽胞杆菌作为一种新型生防菌剂奠定了良好的应用基础,不仅丰富了生物防治菌种的菌库,也为小麦赤霉病的防治提供了一种新的选择,对未来菌种联合防治提供了新的方向。     

两株生防荧光假单胞杆菌的室内筛选试验

从番茄根际土壤中筛选出11株对水稻稻瘟病菌具拮抗活性的细菌原始菌株,其发酵滤液对稻瘟菌菌丝生长抑制率达50％以上的菌株有8个。依据拮抗活性测定结果,确定AbⅢ745和AbⅢ763的单胞分离后代AbⅢ745-6和AbⅢ763-1为最优菌株,其对稻瘟病菌的抑制率分别达96.88％和78.57％,对小麦全蚀病菌、小麦根腐病菌及番茄早疫病菌也有一定的抑制作用。经初步鉴定,AhⅢ745-6和AbⅢ763-1属于假单胞菌科荧光假单胞杆菌。     

利用ERIC-PCR对苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌进行鉴定的研究

为了探索ERIC-PCR技术在苏云金芽胞杆菌和蜡状芽胞杆菌的鉴定及分型中的应用价值,本研究采用PCR方法初步检测苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的组成,并对苏云金芽胞杆菌和蜡状芽胞杆菌的总DNA进行ERIC-PCR扩增,分析ERIC-PCR指纹图谱的特点并采用NTSYS2.10软件对其进行聚类。结果显示,各菌株的ERIC指纹图谱表现出不同程度的多态性,但图谱与菌株所含cry基因的类型存在一定的相关性。聚类分析结果显示,含有相同或相近cry基因类型的Bt菌株在进化树上趋向聚为一类,而不含cry基因的蜡状芽胞杆菌趋向于与不含cry基因的Bt菌株聚为一类或单独聚类。若在多种模式菌株的参考下,该方法可用于苏云金芽胞杆菌的初步鉴定和分型。     

需氧芽胞杆菌芽胞核心组分的研究现状

芽胞核心作为芽胞的原生质体,实际上是处于休眠状态的细胞,其化学组化比较复杂,核酸,蛋白质,水,无机离子以及有机小分子共同构成芽胞核心特有的“内环境”各种化学组分的含量及存在的形式均与芽胞工能特性尤其抗性密切相关,对它们的深入研究有助于进一步揭示芽胞抗生的有关机制,本文综述对需氧芽胞杆菌核心组分研究。     

鸡源益生芽胞杆菌的筛选

根据菌体对低pH和高胆盐的耐受性、产酶特性和对病原菌的抑菌效果,对家鸡肠道中的芽胞杆菌进行了筛选。结果表明,有4株芽胞杆菌(A2、C5、C19和D8)能抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的生长。这4株菌在pH 3.0和高胆盐条件下的存活率都达到60%以上,产淀粉酶和蛋白酶的能力也较好,表明这些菌株具有作为益生菌的开发潜力。经形态学和生理生化反应鉴定,初步确定A2和D8为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniform is),C5和C19为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。     

一株拮抗多种土传病害病原菌的芽胞杆菌筛选鉴定及发酵工艺优化

为减少化学农药的使用量,从土壤中筛选出一株可拮抗多种土传病害病原菌菌株,编号为BSK-12。通过生理生化、形态学特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株BSK-12为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)。采用单因素试验、Plackett-Burman试验和最陡爬坡试验确定BSK-12培养成分和发酵条件的主要影响因素及其取值范围;再通过Box-Behnken试验对其主要因素进行优化,通过回归分析得出最佳发酵条件为发酵温度37℃、摇床转速180 r/min、初始pH值7,在该发酵条件下,芽胞数达到7.6×10～9 cfu/mL。BSK-12对五种土传病病原菌有较好的拮抗效果,可为研制生物农药提供优质菌种资源。     

芽胞杆菌拮抗人或动植物病毒的机制研究进展

病毒性疾病严重威胁着人类及动植物的健康。目前正在应用的防治病毒性疾病的方法及其作用有限,开发无毒副作用、生态友好的抗病毒产品防控病毒性疾病非常必要。益生芽胞杆菌可产生核糖核酸酶、胞外聚合物等代谢物或成分,通过增强机体免疫功能等机制发挥抗病毒作用,有望被进一步开发用于病毒性疾病的防治。     

姜瘟致病菌的分离鉴定及其生防芽胞杆菌的筛选

【目的】探究湖南省郴州市姜瘟发病情况,鉴定病原菌,筛选出拮抗生防菌,为姜瘟的有效控制提供依据。【方法】系统调查湖南省郴州市生姜主产区姜瘟发生情况,采集具有典型症状的姜块及其根系土壤,分离其病原菌,通过形态特征和分子鉴定确定病原菌的种属,通过回接姜苗确定其致病性;基于内源葡聚糖酶基因egl对分离的青枯雷尔氏菌进行序列变种鉴定;以分离鉴定到的病原菌为靶标菌筛选生防芽胞杆菌,并测定其防效。【结果】田间姜瘟平均发病率8.52%;从姜瘟病块分离到2株病原菌(FJAT-15492和FJAT-15494),姜瘟根系土壤分离到3株病原菌(FJAT-15495、FJAT-15496和FJAT-15497);经鉴定FJAT-15492为桑树肠杆菌(Enterobacter mori),而其他4株菌为青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum);致病性测定结果表明,分离的桑树肠杆菌和青枯雷尔氏菌均会引起姜瘟病害。病原菌分布特性分析显示,青枯雷尔氏菌在病姜块及其根系土壤中均有分布,而桑树肠杆菌只在病姜块中分布,且分布数量(1.33×10³ CFU/g)显著低于青枯雷尔氏菌的分布数量(5.67×10³ CFU/g)。演化型和序列变种鉴定结果表明,分离到青枯雷尔氏菌属于演化I型,序列变种14;通过抑菌圈试验发现,短短芽胞杆菌(Bacillus brevis) FJAT-JK-2对青枯雷尔氏菌、贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis) FJAT-54560对桑树肠杆菌有较强拮抗作用,抑菌圈直径分别为19.41 mm和16.11 mm,对姜瘟的室内防效分别为69.45%和61.11%。然而将2种生防菌发酵液按等体积混合对姜瘟的田间防效达52.57%。【结论】本研究鉴定出姜瘟的致病菌,并筛选出2株生防芽胞杆菌,为姜瘟的生物防治提供新的菌株资源。     

地衣芽胞杆菌对白色念珠菌等的拮抗作用

目的了解地衣芽胞杆菌在试管内与阴道正常菌群共生关系的情况。方法将地衣芽胞杆菌菌液分别与葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、德氏乳杆菌混合培养,定量计数各菌在不同时间内单独培养和混合培养时各菌的活菌数。结果地衣芽胞杆菌生长不受金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和大肠埃希菌的影响,金黄色葡萄球菌和白色念珠菌在有地衣芽胞杆菌存在的情况下,其生长受到明显的抑制（P〈0.05）;乳杆菌在12-48 h内,有显著的抑制地衣芽胞杆菌生长的作用,而乳杆菌的生长不受地衣芽胞杆菌的存在与否而正常生长。结论地衣芽胞杆菌对金黄色葡萄球菌及白色念珠菌在体外具有明显的拮抗作用,地衣芽胞杆菌对大肠埃希菌、乳杆菌无明显的体外拮抗作用。     

拮抗枯草芽孢杆菌KC-5的分离鉴定及其发酵优化

为了筛选出对植物病原菌具有拮抗作用的生物防治细菌,采用平板对峙法从蔬菜根际土壤中分离获得一株对多种病原真菌具有抑制作用的枯草芽孢杆菌,并对抑制后的病原菌菌丝进行了观察,结果表明该菌株对尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、层出镰刀菌以及腐皮镰刀菌均具有抑菌活性。通过形态特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵培养基进行了优化。     

中药源芽孢杆菌抗病原真菌菌株的筛选与鉴定

从20种中药中分离纯化得到48株芽孢杆菌,其中25株对10种植物病原菌中至少一种具有拮抗作用,7株抗菌谱较广,其中1株广谱抗菌能力极强。25株有抗性菌株经纯化培养对其进行菌体菌落形态观察和生理生化特征鉴定,其中8株芽孢杆菌被初步鉴定为枯草芽孢杆菌,3株被初步鉴定为蜡样芽孢杆菌,1株被初步鉴定为纳豆芽孢杆菌,1株被初步鉴定为地衣芽孢杆菌,发现两种可能对芽孢杆菌有抑制作用的中药。     

Antagonistic and antimicrobial activities of some bacterial isolates collected from soil samples

Thirty seven bacterial cultures isolated from soil samples obtained from different locations were tested for their antagonistic activity against some fungal pathogens, viz., Sclerotium rolfsii, Fusarium oxysporum and Rhizoctonia solani, causal agents of collar rot of sunflower, wilts and root rots, respectively. Among them, 5 bacterial strains, viz., A1 6 (Bacillus sphaericus), K1 24 (Pseudomonas fluorescens), M1 42 (Bacillus circulans), M1 66 (Bacillus brevis) and T1 22 (Bacillus brevis) showed positive antagonistic activity. M1 66 was the most effective in inhibiting mycelial growth of S. rolfsii in vitro followed by M1 42, T1 22, K1 24 and A1 6. Only one bacterial strain i.e. M1 42 exhibited antagonistic activity against F. oxysporum, and none of the bacterial strains gave positive activity against R. solani. Furthermore, antimicrobial activities of all the 5 strains were checked against different test organisms. These strains showed their extensive inhibition effect particularly against gram-positive test bacteria (Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis) and the test fungal strain (Candida albicans). On the other hand, B. brevis M1 66 and B. brevis T1 22 strains had an inhibitory effect against gram positive and gram-negative test bacteria (Escherichia coli and Proteus vulgaris) as well as the test fungal strain.     

益生枯草芽胞杆菌B15的性能检测及培养条件研究

对筛选得到的枯草芽胞杆菌B15进行了产酶及拮抗性能的检测,结果表明该菌株能够分泌淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶,同时对常见病原体有一定的拮抗作用,具有作为益生菌进行发酵和研制微生态制剂的潜力。采用单因子试验,对B15菌株的培养液组成（碳源、氮源）及培养条件进行了研究,结果表明：以1.5%葡萄糖及0.5%酵母浸出物制成的培养液,在35℃、初始pH6.5左右,装液量为20 ml/250 ml,接种量2%的条件下培养B15,可将活菌数目从原始的1.15×109CFU/ml提高至1.61×109CFU/ml。     

弯曲平脐蠕孢拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗作用

【背景】玉米弯曲平脐蠕孢是引起玉米叶斑病的主要病原,严重危害农业生产。利用细菌防治弯曲平脐蠕孢是目前研究的热点。【目的】筛选对玉米弯曲平脐蠕孢有高拮抗性的菌株,对其进行鉴定并探究其拮抗机制。【方法】采用平板对峙法,从玉米田地表下土壤分离获得22株细菌,再经过复筛得到一株对玉米弯曲平脐蠕孢具有较高拮抗活性的菌株L-14。【结果】筛选发现,菌株L-14对层出镰孢(Fusariumproliferatum)、禾谷镰孢(Fusariumgraminearum)、大斑凸脐蠕孢(Exserohilum turcicum)、弯曲平脐蠕孢(Bipolaris papendorfii)和灰霉病菌(Botrytis cinerea) 5种植物病原真菌均有抑制作用,是一株广谱拮抗作用的生防菌株。通过对该菌株进行形态观察、16S rRNA基因序列分析以及生理生化特性检测,鉴定其为枯草芽孢杆菌。对菌株L-14的抗菌机制进行研究,发现该菌发酵液的蛋白粗提物对弯曲平脐蠕孢气生菌丝形态无影响,但可致基内菌丝畸变,对弯曲平脐蠕孢分生孢子萌发有抑制作用。【结论】筛选的拮抗菌在防治植物病害上具有广谱性及较高的拮抗活性,能有效防治玉米叶斑病。     

两株生菜根际芽孢杆菌(Bacillus spp.)的分离与特性研究

【目的】从生菜根际土中筛选出2株具有多种生物学特性、促生和生防效果的芽孢杆菌。【方法】土样经过80°C高温处理,得到2株细菌。通过形态学、生理生化、16S rRNA和gyr B基因鉴定菌株。对其溶磷、合成IAA和嗜铁素能力及对植物病原真菌的拮抗作用进行测定。用2株细菌处理生菜种子,评价其促生效果。用菌株WXD 3-2处理小麦,评价其生防效果。【结果】经过鉴定,确定菌株WXD 3-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),WXD 3-2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。2株菌均有溶磷、合成嗜铁素、IAA能力和促生能力,菌株WXD 3-2能够对多种病原菌产生拮抗作用,抑制其生长。经过WXD 3-1和WXD 3-2处理,生菜植株高、叶片宽、植株鲜重及植株干重与对照相比分别增加21.51%和8.88%、31.93%和14.51%、41.30%和13.58%、42.76%和26.35%。菌株WXD 3-2能够减轻小麦根腐病病症,小麦根部病斑减少。【结论】分离出的2株芽孢杆菌均具有溶磷、合成IAA和嗜铁素能力,能够促进生菜的生长,且菌株WXD 3-2还具有生防效果。     

枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS－98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌（Physalosporapiricola）等植物病原真菌的拮抗菌株。BS－98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG－100柱层析和DEAE－纤维素（DE32）柱层析后分离纯化出一种抗菌蛋白,命名为X98Ⅲ。蛋白电泳分析结果表明,此蛋白分子量为59000,等电点为4．50．醋酸纤维膜电泳后经特异染色证明X98Ⅲ含糖及胀。用DNS法测其含糖量为6％。此蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。氨基酸组分分析表明,该蛋白含11种不同氨基酸,尤富含谷氨酸和半胱氨酸等,而缺少天冬氨酸等。纯化后的X98Ⅲ对苹果轮纹病菌、芦笋茎枯病菌等有很强的抑制作用。X98Ⅲ的抑菌机理主要是溶解细胞壁,造成菌丝畸形、孢子不发芽或发芽异常。     

一株拮抗多重耐药菌的芽孢杆菌的初步研究

目的 对一株具有拮抗多重耐药菌的芽孢杆菌的特性进行研究.方法 采用菌落法测试多株芽孢杆菌对18种不同来源致病菌的抑制效应,并对其中一株可拮抗多重耐药菌的芽孢杆菌(KC株)进行鉴定和电泳分析.结果 该芽孢杆菌(KC株)经生理生化以及16S rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌;KC株对人源、鱼源、畜禽源和鸡粪源的多重耐药菌有不同程度的拮抗效应;SDS-PAGE分析提示,35 kD左右的分泌蛋白可能参与了KC株的抑菌活性.结论 具有拮抗多重耐药菌的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌,且该菌分泌的35 kD蛋白可能参与抑菌活性.     

Field Evaluation of Fungal Competitors of Fusarium culmorum and F. graminearum, Causal Agents of Ear Blight of Winter Wheat, for the Control of Mycotoxin Production in Grain

Thirty-seven antagonists, from a collection of 113 pre-screened microorganisms, were tested in field experiments on winter wheat for their ability to control ear blight and production of mycotoxins, particularly deoxynivalenol (DON), in grain by Fusarium culmorum and F. graminearum. Ears were spray-inoculated during anthesis with spore suspensions, first of test fungi and then of the pathogen. Isolates of F. equiseti were the most effective treatments. A strain of F. equiseti (G9) decreased DON consistently on wheat inoculated with F. culmorum, compared with the control, often by more than 70%. It performed well under severe disease pressure (F. culmorum at 10⁵ conidia mL^-1) and similarly to a standard fungicide, tebuconazole. Percentages of diseased grains and amounts of DON corresponded well. Small quantities of nivalenol (NIV) occurred in grain samples after treatment with some F. equiseti strains. On wheat inoculated with F. graminearum, F. equisti G2 decreased the percentage diseased grains by 92% and DON by 94%. One strain of F. equiseti (G2) was found to produce small amounts of NIV in pure culture.