重组腺病毒Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭

目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用.方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载体,感染MDA-MB-231细胞后,荧光显微镜观察其最适感染复数(multiplicity of infection,MOI).分表柔比星、Ad-GFP、Ad-CRT/MAGE-A3、表柔比星+Ad-GFP、表柔比星+Ad-CRT/MAGE-A3共5组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖,Transwell实验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭力.结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,其感染MDA-MB-231细胞的最适MOI为100.与其他各组相比,应用Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖[(83.27 ±1.04)％ vs(57.42±1.27)％,(43.26 ±0.95)％,(61.23 ±1.47)％,(55.38±1.62)％;P＜0.05]和侵袭[(8.41 ±4.20)vs (14.62 ±5.33),(107.66±3.35),(100.60±4.42),(104.20±2.60);P ＜0.05].结论:腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3能增强表柔比星抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的能力.     

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况。建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05)。MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001)。结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡。     

共表达ENDO-VEGI151和survivin-siRNA双功能质粒的构建及其抗瘤活性

目的:构建pCDNA3.1-ENDO-VEGI151/survivin-shRNA(pEV/si-survivin)双功能表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUEVC)增殖和凋亡的影响,探讨其治疗肿瘤的可行性。方法:利用MDA-MB-231细胞筛选获得survivin的高效siRNA序列,构建pEV/si-survivin表达质粒并分别转染MDA-MB-231和HUEVC,以real-time PCR和Western blotting检测转染细胞中ENDO-VEGI151和survivin的表达;MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:成功构建pEV/si-survivin双功能表达质粒,并能在MDA-MB-231和HUEVC中正确表达相应基因产物。该质粒可明显抑制MDA-MB-231细胞内survivin的表达,并抑制细胞增殖[48、72 h的抑制率为(39.36±4.16)%、(48.43±3.49)%],促进MDA-MB-231细胞凋亡[(18.33±1.48)%vs(4.80±1.01)%,P<0.01)和细胞周期阻滞(P<0.05);该质粒也明显抑制HUEVC的增殖[(48、72 h的抑制率为(38.16±3.37)%、(53.75±4.53)%),并促进HUEVC凋亡和细胞周期阻滞(P<0.05)。结论:成功构建的pEV/si-survivin双功能表达质粒可以同时发挥抑制新生血管生成和促肿瘤细胞凋亡的作用,提高抗肿瘤的效果。     

共表达ENDO-VEGI_(151)和survivin-siRNA双功能质粒的构建及其抗瘤活性

目的:构建pCDNA3.1-ENDO-VEGI151/survivin-shRNA(pEV/si-survivin)双功能表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUEVC)增殖和凋亡的影响,探讨其治疗肿瘤的可行性。方法:利用MDA-MB-231细胞筛选获得survivin的高效siRNA序列,构建pEV/si-survivin表达质粒并分别转染MDA-MB-231和HUEVC,以real-time PCR和Western blotting检测转染细胞中ENDO-VEGI151和survivin的表达;MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:成功构建pEV/si-survivin双功能表达质粒,并能在MDA-MB-231和HUEVC中正确表达相应基因产物。该质粒可明显抑制MDA-MB-231细胞内survivin的表达,并抑制细胞增殖[48、72 h的抑制率为(39.36±4.16)%、(48.43±3.49)%],促进MDA-MB-231细胞凋亡[(18.33±1.48)...     

HAP1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

[目的]研究HAP1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及作用机制.[方法]取对数生长期已构建好的MDA-MB-23 1/HAP1和MDA-MB-231/Pb稳转细胞株(5×106),接种于5周龄BALB/C雄性裸鼠左腹股沟部皮下,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,21d裸鼠皮下肿瘤长径到达0.6～0.9cm时,分为4组(n=5):MDA-MB-231/Pb组,MDA-MB-231/HAP1组,MDA-MB-231/Pb+放射组和MDA-MB-231/HAP1+放射组.放射组在第21d给予5Gy X线照射一次后继续饲养3周左右.期间每隔4d测量1次肿瘤的长径及短径,计算肿瘤体积.第6周时处死各组裸鼠统计瘤重.免疫组织化学方法分析Cleaved-caspase-3和Cleaved-caspase-9表达,TUNEL分析细胞凋亡.[结果]MDA-MB-231/HAP1+放射组裸鼠肿瘤生长明显迟缓,平均体积小于其他3组(P均＜0.01),MDA-MB-231/HAP1+放射组平均瘤重明显小于其他3组(P均＜0.01).TUNEL凋亡实验结果表明,MDA-MB-231/Pb组细胞平均凋亡率为3.27％ ±1.51％,MDA-MB-231/HAP1组为36.77％ ±3.78％,MDA-MB-231/Pb+放射组为46.27％±2.98％,MDA-MB-231/HAP1+放射组为83.07％±0.21％,MDA-MB-231/HAP1+放射组凋亡率明显高于其他3组(P＜0.05).免疫组织化学染色评分结果显示,MDA-MB-231/Pb组,MDA-MB-23 1/HAP1组,MDA-MB-231/Pb+放射组,MDA-MB-231/HAP1+放射组中凋亡蛋白Cleaved-caspase-3平均积分分别为1.67±0.47,6.00±1.63,7.00±1.41和14.67±1.89,凋亡蛋白Cleaved-caspase-9平均积分分别为2.00±0.82,4.67±0.94,5.33±0.94和11.00±1.41;Cleavedcaspase 3和cleaved-caspase 9在MDA-MB-231/HAP11+放射组中的水平明显高于其他3组(P＜0.05).[结论] HAP1基因可能通过调控肿瘤细胞的凋亡来增强人乳腺癌细胞对放射治疗的敏感性.     

ghrelin调控ERK信号通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制

目的:探讨ghrelin调控ERK信号传导通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制.方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞培养,设立对照组、多柔比星组、gbrelin组、ghrelin联合多柔比星组、ghrelin联合多柔比星加PD098059抑制剂组,采用流式细胞法检测细胞凋亡,Western-blot方法检测细胞ERK、p-ERK、P-gp蛋白的表达.结果:在ghrelin干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最低(P＜0.01),在多柔比星的干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最高(P＜0.01),ghrelin联合多柔比星能够抑制多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的促凋亡作用(P＜0.01),ghrelin联合多柔比星加ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059能够减弱ghrelin联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的抑制作用(P＜0.01).多柔比星组与ghrelin组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P＜0.05)、且ghrelin组与多柔比星组相比P-gp蛋白表达明显上升(P＜0.05),ghrelin联合多柔比星组与多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显增加(P＜0.05)、且P-gp蛋白表达明显增加(P＜0.05),ghrelin联合多柔比星加抑制剂组与ghrelin联合多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P＜0.01),P-gp蛋白表达无显著性差异(P=0.07).结论:一定浓度的ghrelin激活乳腺癌细胞ERK信号通路增加P-gp蛋白表达,从而抑制多柔比星诱导乳腺癌细胞凋亡而诱发耐药的产生,阻断ghrelin-ERK信号通路可能逆转乳腺癌细胞多药耐药的发生.     

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响

目的：研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果：Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系（P〈0.05）,且细胞形态发生明显的改变。Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡。结论：Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

miRNA-24通过靶向CARMA3基因调控胃癌AGS细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(AGS、MKN74、HGC27)和胃黏膜上皮GES-1细胞中miRNA-24的表达水平.建立miRNA-24过表达的AGS细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关cyclinD1、CDK2、Bcl-2、p-IκB-α/IκB-α和p-Rb/Rb蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miRNA-24可能的靶基因.结果:3株胃癌细胞中miRNA-24的表达均低于GES-1 cell.转染miRNA-24 mimic(miR-24组)48 h后AGS细胞增殖活力显著低于miR-NC组[(119.62±12.63)％ vs(147.79± 11.89)％,P＜0.05],并出现周期阻滞,且早期和晚期细胞凋亡率明显较miR-NC组上升[早期凋亡率:(11.32±2.27)％ vs (0.57±0.08)％;晚期凋亡率:(15.56±2.27)％ vs (0.85±0.16)％,均P＜0.05].转染miR-NA-24 mimic后,细胞中cyclinD1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白表达水平均较miR-NC组显著降低,p-IκB-α蛋白的表达水平较miR-NC组显著上升.共转染miRNA-24 mimic和miRNA-24可能作用靶点CARMA3基因过表达质粒的miR-24+pcDNA-CAR-MA3组AGS细胞CARMA3蛋白表达较miR-24组明显增加(1.74±0.09 vs 1.03±0.06,P＜0.05).miR-24+pcDNA3-CARMA3组AGS细胞48 h增殖活力较miR-24组显著升高[(137.85±15.34)％ vs(102.31±11.23)％,P＜0.05];而miR-24+pcDNA3-CARMA3组AGS细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较miR-24组显著降低[早期凋亡率:(4.24±0.56)％ vs(11.32±2.27)％,P＜0.05;晚期凋亡率:(6.38±0.63)％ vs(15.56±2.27)％,P＜0.05].CARMA3过表达可部分逆转miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的作用.结论:miRNA-24可通过靶向CARMA3基因抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡.     

rNDV IL-29对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,rNDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响.方法:实验分为rNDV IL-29组(rNDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(PBS).用Western blotting、RT-PCR、免疫荧光法检测IL-29蛋白及其mRNA的表达;MTT、克隆形成实验及划痕实验检测rNDV IL-29对A549细胞增殖、迁移能力的影响;流式细胞术及Western blotting检测rNDV IL-29对A549细胞凋亡的影响.结果:与NDV组和对照组相比,rNDV IL-29组细胞:(1) IL-29蛋白及其mRNA表达水平显著升高;(2)细胞增殖抑制率明显升高[(56.48±11.89)％ vs (42.18±6.18)％,P＜0.05],细胞迁移率明显下降[(5.00±4.00)％ vs (32.43 ±3.71)％、(84.57±3.96)％,均P＜0.05];(3)Caspase3表达水平明显上调[(29.67±1.53)％ vs (18.33±3.06)％、(7.00±6.08)％,均P＜0.05],Bcl-2/bax表达水平明显下调[(12.00±2.65)％ vs (42.33±5.86)％、(67.00±6.25)％,均P＜0.05],细胞凋亡增多.结论:rNDV IL-29抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移,并且促进其凋亡,提示rNDV IL-29可能成为一种很有潜力的抗癌药物.     

瑞香狼毒提取液逆转EGFR-TKI耐药肺腺癌H1975细胞的作用及其机制

目的:探讨瑞香狼毒(stellera chamaejasme L,SCL)乙醇提取液逆转表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)耐药肺腺癌H1975细胞的作用及其机制.方法:用MTT法检测SCL、吉非替尼(gefitinib)及两药联用对H1975细胞的抑制率,细胞划痕实验检测药物对H1975细胞迁移的影响,流式细胞术测定药物对细胞凋亡的影响,Western blotting检测不同药物处理后各组肿瘤细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及细胞通路关键分子p-EGFR的表达.观察SCL联用gefitinib后裸鼠移植瘤的体积和总生存期(OS),ELISA检测荷瘤裸鼠血清中Bcl-2、p-EGFR含量.结果:SCL对H1975细胞IC50为(21.35±2.11)mg/ml,gefitinib的IC50为(11.21±1.68) μmol/L.SCL联用gefitinib后H1975细胞抑制率明显高于gefitinib(1 μmol/L)和SCL(5 mg/ml)两组单独应用[(49.78±7.09)％ vs (8.45±2.57％)、(12.88±3.64)％,均P＜0.01],两药联用H1975细胞迁移指数明显低于gefitinib和SCL两组单独应用[(22.4±6.5)％ vs (70.3±4.9)％、(67.1±10.5),均P＜0.01],流式细胞仪检测显示两药联用细胞凋亡率明显高于两者单用[(51.68±6.56)％ vs(9.88±2.71)％、(9.48±2.45)％,均P＜0.01],Western blotting检测H1975细胞凋亡相关蛋白发现,联用组可明显降低Bcl-2和p-EGFR的表达(P＜0.01).抑制移植瘤实验显示,联用药组荷瘤小鼠肿瘤生长缓慢,OS明显延长(P＜0.01).结论:SCL可逆转肺腺癌H1975细胞对EGFR-TKI的耐药,其机制可能与降低EGFR的磷酸化、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达有关,从而为EGFR-TKI耐药肺腺癌治疗提供了新思路.     

Mus81基因沉默对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响北大核心

目的:分析甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在乳腺癌组织中的表达水平,观察Mus81基因敲减对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和裸鼠移植瘤形成能力的影响。方法:从TCGA数据库下载乳腺癌样本基因表达数据,应用perl及R软件整理数据筛选出每个样本Mus81基因表达量。通过慢病毒介导的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)技术构建Mus81基因敲减的MDA-MB-231乳腺癌细胞系(即Mus81敲减组)和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞系,以实时定量PCR法检测Mus81基因的敲减效率,再以MTT检测实验、克隆形成实验、细胞流式检测及实时定量PCR法检测两组MDA-MB-231细胞的生长、增殖、细胞周期分布、凋亡水平及Mus81下游基因表达水平。最后,向BALB/c裸鼠右侧腋下注射Mus81基因敲减组和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞,观察Mus81基因沉默对MDA-MB-231细胞在裸鼠中成瘤能力的影响。结果:Mus81基因在乳腺癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞中Mus81基因的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05),Mus81基因的敲减效率达70.7%。较之阴性对照组,Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞的生长速度明显减缓(P<0.05);形成的细胞克隆数也明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平、G2/M期细胞比例则明显升高(P<0.05)。STC2等Mus81下游基因的表达水平在两组MDA-MB-231细胞间也有明显差异(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,Mus81基因敲减组形成的裸鼠瘤体体积和重量均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:Mus81基因在乳腺癌组织中的表达明显升高,且可能通过调控STC2等下游基因的表达促进三阴性乳腺癌细胞的生长增殖及裸鼠体内成瘤能力并抑制其凋亡,提示其可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.     

Testin在非小细胞肺癌组织和细胞株中的表达及其对癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Testin基因(TES)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞株中的表达及其对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法:收集2015年1月至2015年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院手术切除的27例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织标本,用Western blotting法检测癌组织和癌旁组织,以及正常人胚肺成纤维细胞株MRC5和肺癌细胞株A427、A549、H1299、LK2、PC9和SW900中TES蛋白的表达水平.应用短发卡RNA(shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰TES基因的表达,并进一步检测TES低表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cas-pase-3的表达.结果:在NSCLC组织和细胞株中TES蛋白的表达明显下降(均P＜0.05).shTES干扰A549细胞后,TES mRNA和蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.05).抑制TES表达显著增强A549细胞的增殖[(2.75±0.04) vs (1.79±0.06),P＜0.05]、迁移[(52.3±2.6)％s(19.7±1.4)%,P＜0.05]和侵袭能力[(31.2±3.9)％vs(14.5±4.1)％,P＜0.05],同时降低了细胞凋亡率[(8.2±1.1)％s(23.1±1.7)％,P＜0.05].TES低表达使A549细胞Bax和Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:TES在NSCLC组织中呈低表达,TES表达下调具有促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡等生物学效应,其有可能成为肺癌治疗一个新靶点.     

泛素特异性蛋白酶53在结直肠癌中的表达及其对HCT116细胞的抑制作用

目的:探讨泛素特异性蛋白酶53(ubiquitin specific peptidase 53,USP53)在结直肠癌组织中的表达水平及其过表达对人结直肠癌HCT116细胞功能的影响.方法:运用Real-time PCR及IHC方法检测结直肠癌及癌旁组织中USP53的表达情况;利用UCSC CANCER BROWSER提供的TCGA数据库,检测USP53 mRNA表达水平与临床特征及预后的关系;HCT116细胞中瞬时过表达USP53,利用CCK-8及克隆形成实验检测HCT116细胞增殖变化.结果:免疫组化结果显示,USP53在癌旁组织中的表达显著高于肿瘤组织[91.67％(44/48) vs 18.75％ (9/48),P＜0.01].癌旁组织中USP53 mRNA水平也高于癌组织[(0.85±0.32) vs (0.46 ±0.27),P＜0.05].组织中USP53 mRNA表达水平与预后有关,表达越低预后越差(P＜0.05).过表达USP53后,细胞克隆形成数目显著下降[(123 ±27.22) vs (338±55.24)个,P＜0.01];CCK-8实验结果显示,肿瘤细胞增殖受到显著抑制[(0.14±0.01) vs (0.18±0.04),P＜0.05;(0.23±0.01)vs(0.32±0.01),P＜0.01;(0.45±0.03) vs (0.80±0.05),P＜0.01;(0.83 ±0.03)vs (1.18±0.10),P＜0.01].结论:USP53在结直肠癌中表达下调与不良预后相关,USP53可抑制肿瘤细胞增殖,提示USP53可作为诊断及治疗结直肠癌的新靶标.     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的:探究不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对体外乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法:收集我院2016年2月至2017年12月期间采用丙泊酚麻醉的乳腺癌患者血液样本28例，七氟醚麻醉的乳腺癌患者血液标本32例，乳腺癌术后镇痛使用曲马多的患者血液样本25例，未使用任何麻醉药的普通乳腺癌患者血液样本20例。将血清作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后，采用流式细胞法检测细胞的凋亡率，ELISA法检测各组细胞中半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）的表达情况。结果:流式细胞法检测结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率；ELISA结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3的表达（P＜0.05），且各组之间无统计学差异（P＞0.05）；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＜0.05），曲马多却未能影响乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＞0.05），丙泊酚和七氟醚组与曲马多组对比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率及caspase-3的表达；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达，曲马多对乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达没有明显影响。