辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒（Annexin V-FITC/PI）检测细胞凋亡情况;荧光探针法（DCFA-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平,荧光探针（JC-1）法检测细胞线粒体膜电位（MMP）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）的表达及内质网应激相关蛋白（CHOP）,转录激活因子4（ATF4）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）,磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）,真核翻译起始因子2α（eIF2α）,磷酸化真核翻译起始因子2α（p-eIF2α）表达。结果 与空白组比较,随着甘草查尔酮A浓度增大,从甘草查尔酮A 5 μmol·L^-1开始,细胞存活率明显降低（P<0.05）,其半数抑制浓度（IC₅₀）为19.05 μmol·L^-1;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）组细胞凋亡明显升高（P<0.05）,甘草查尔酮A 40 μmol·L^-1时细胞凋亡率达30.2%（P<0.05）;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax表达明显升高（P<0.05）,且呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）明显升高细胞内ROS水平（P<0.05）,降低线粒体MMP水平（P<0.05）,导致线粒体功能障碍,呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）诱导内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP,ATF4表达明显增多,磷酸化（p）-PERK,p-eIF2α表达明显升高（P<0.05）,呈浓度依赖性。结论 甘草查尔酮A可能通过增加细胞内ROS水平,降低MMP引起线粒体功能障碍和内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法 以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L^-1。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC₅₀，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L^-1开展实验。用0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（P<0.01），细胞凋亡明显增加（P<0.05，P<0.01），细胞于有丝分裂准备期（G₂）期阻滞明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。     

黄芩素通过抑制YAP入核调控三阴乳腺癌细胞克隆形成

目的 观察黄芩素对三阴乳腺癌MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞克隆形成能力的影响,探讨Yes相关蛋白（YAP）在其中的介导作用。方法 黄芩素处理MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,免疫荧光法检测细胞YAP的细胞核分布,蛋白免疫印迹法检测细胞YAP大肿瘤抑制因子1（LATS1）,YAP,磷酸化Yes相关蛋白（p-YAP）和磷酸化YAP大肿瘤抑制因子1（p-LATS1）蛋白表达水平。结果 与空白组相比,5,10,20 μmol·L^-1黄芩素对MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞增殖无明显影响。40,80,160 μmol·L^-1黄芩素能显著抑制MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞增殖能力（P<0.01）,抑制效应存在一定剂量依赖性。黄芩素对MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（80.3±7.2）,（70.4±6.5） μmol·L^-1。与空白组比较,黄芩素（5,10,20 μmol·L^-1）明显剂量依赖性降低MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞克隆形成率（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,黄芩素（10,20 μmol·L^-1）显著剂量依赖性抑制MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞YAP细胞核表达（P<0.01）。与空白组比较,黄芩素（5,10,20 μmol·L^-1）明显剂量依赖性上调MDA-MB-468细胞p-YAP和p-LATS1蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;同样,黄芩素（10,20 μmol·L^-1）显著剂量依赖性上调MDA-MB-231细胞p-YAP和p-LATS1蛋白表达（P<0.01）。结论 黄芩素可通过介导YAP入核减少,从而抑制三阴乳腺癌MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞克隆形成。     

雷公藤内酯酮对SHI-1细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨雷公藤内酯酮（TN）对人急性单核细胞白血病（AML）细胞株SHI-1细胞增殖、周期、凋亡以及凋亡相关蛋白表达水平的影响,并探究其可能的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测20,40,80,160,320 nmol·L^-1的雷公藤内酯酮作用SHI-1细胞48,72 h对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术碘化丙啶（PI）单染法检测雷公藤内酯酮作用前后SHI-1细胞周期的变化,流式细胞术AnnexinV/PI双染法检测雷公藤内酯酮作用前后SHI-1细胞凋亡的变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测80,160 nmol·L^-1雷公藤内酯酮作用于SHI-1细胞前后半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,半胱氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）和核转录因子-κB（NF-κB）的蛋白表达。结果 分别作用48,72 h,与空白组比较,40,80,160,320 nmol·L^-1雷公藤内酯酮对SHI-1细胞增殖均具有显著抑制作用（P<0.01）,且具有剂量依赖性;雷公藤内酯酮160,320 nmol·L^-1可诱导SHI-1细胞凋亡（P<0.01）,并且雷公藤内酯酮160 nmol·L^-1可使SHI-1细胞S期比例降低（P<0.01）。此外,与空白组比较,雷公藤内酯酮80,160 nmol·L^-1组NF-κB蛋白表达水平显著下调（P<0.05,P<0.01）,雷公藤内酯酮160 nmol·L^-1组Caspase-3,Caspase-8蛋白表达水平显著下调（P<0.01）。结论 雷公藤内酯酮可以体外抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与雷公藤内酯酮降低SHI-1细胞S期比例,下调Caspase-3,Caspase-8以及NF-κB的蛋白表达水平有关。     

丹酚酸B-葛根素联用对氧糖剥夺/复氧损伤的SH-SY5Y神经细胞焦亡的影响

目的 基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素联用对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。方法 利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型，设立空白组、OGD/R组、10 μmol·L^-1丹酚酸B组、100 μmol·L^-1葛根素组、10 μmol·L^-1丹酚酸B和100 μmol·L^-1葛根素联用组及10 μmol·L^-1NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体抑制剂MCC950组。除空白组外，其余各组细胞在OGD/R 6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模。采噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，光学显微镜下观测细胞形态，分光光度计法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）释放率，Hoechst/碘化丙啶（PI）染色检测细胞膜损伤情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）、凋亡斑点样蛋白（ASC）和白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达水平，免疫荧光检测NLRP3和Caspase-1蛋白表达的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和剪切胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）蛋白表达的变化。结果 与空白组比较，OGD/R组SH-SY5Y细胞存活率显著降低（P<0.01），细胞形态受损，培养上清中LDH渗漏率显著提高（P<0.01），细胞膜破损，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β mRNA表达水平显著提高（P<0.01），IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平显著提高（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B、葛根素与丹酚酸B和葛根素联用均能显著提高OGD/R损伤后SH-SY5Y细胞的存活率（P<0.01）；与单用组比较，联用组具有更好的效果（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B和葛根素联用及MCC950均能改善细胞形态，降低细胞上清液LDH的渗漏（P<0.01），减轻细胞膜损伤水平，降低SH-SY5Y细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β的mRNA表达水平（P<0.05，P<0.01），降低IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 结果表明，丹酚酸B和葛根素联用能减轻OGD/R对SH-SY5Y细胞造成的损伤，这可能与其能够抑制细胞焦亡相关。     

基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 采用分子对接和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测苦参碱衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对热休克蛋白90（Hsp90）的调控作用；采用噻唑蓝（MTT）比色法检测衍生物C4（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μmol·L^-1）对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响；采用克隆形成实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞增殖能力的影响；采用细胞划痕实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞迁移能力的影响；采用Transwell实验检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞侵袭能力的影响；采用流式细胞术检测衍生物C4（0、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞凋亡能力的影响；采用Western blot检测衍生物C4（0、1、2、4、8 μmol·L^-1）对A549细胞蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、表皮生长因子受体（EGFR）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X基因（Bax）、B细胞淋巴瘤2相关的细胞死亡激动剂（Bad）蛋白表达量的影响。结果 衍生物C4能有效地与Hsp90蛋白通过水介导的氢键网络与天冬氨酸-51（ASN-51）、甘氨酸-135（GLY-135）、苯丙氨酸-138（PHE-138）的残基相互作用，和PHE-138苯环之间的π-π堆积相互作用有助于增强其亲和力，与空白组比较，衍生物C4可以明显的下调A549细胞内Hsp90蛋白表达（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以明显降低细胞活力（P<0.05，P<0.01）；给药24、48、72 h，衍生物C4对A549细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（12.32±0.14）、（7.79±0.16）、（3.26±0.09） μmol·L^-1；与空白组比较，衍生物C4（2、4、8 μmol·L^-1）使A549细胞克隆形成能力明显下降（P<0.05，P<0.01），且呈浓度依赖性；与空白组比较，衍生物C4可以明显抑制A549细胞的迁移、侵袭能力（P<0.05，P<0.01），其中浓度在8 μmol·L^-1时效果最为显著（P<0.01）；与空白组比较，衍生物C4可以显著诱导A549细胞发生凋亡反应（P<0.01），在0、2、4、8 μmol·L^-1时细胞凋亡率分别为（2.28±0.35）%、（4.97±0.36）%、（8.86±0.50）%、（20.67±0.99）%；与空白组比较，衍生物C4可以明显增加Caspase-9、Bax、Bad蛋白表达量（P<0.05，P<0.01），使PI3K、p-PI3K、p-Akt、EGFR、Bcl-2蛋白表达量发生不同程度降低（P<0.05，P<0.01），Akt蛋白的表达量没有发生明显的变化。结论 衍生物C4发挥抗肿瘤的作用是通过抑制细胞活力、增殖能力、迁移和侵袭能力，并且促进细胞的凋亡反应，其发挥作用的机制可能是通过抑制Hsp90/PI3K/Akt信号通路来实现的。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞，并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h，然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组细胞的增殖活力明显降低，细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）；与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较，PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力，增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较，模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）；与模型组比较，各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡，并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。     

大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响

目的 观察大黄灵仙方（DHLX）对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β（TGF-β）激活激酶1（TAK1）与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的相互结合,调控核转录因子-κB（NF-κB）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路活化而发挥作用。方法 将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX（320 mg·kg^-1·d^-1）灌胃8 d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组：正常组、模型组（20 mg·L^-1）、脂多糖（LPS）+DHLX组（20 mg·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1）、LPS+SB203580组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+SB203580组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）;显微镜下观察药物干预后各组细胞的形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素（IL）-1β与IL-6的表达量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中TAK1与TRAF6蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测TAK1与TRAF6的相互作用,激光共聚焦显微镜观察TAK1与TRAF6在细胞中的分布及共定位情况。结果 LPS作用后,细胞突触减少,胞体变圆变小,用药后各组细胞形态趋向正常;与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6表达量明显上升（P<0.05）,TAK1表达量降低而TRAF6的表达量升高（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量呈降低趋势;与模型组比较,LPS+DHLX组IL-1β和IL-6表达量明显降低（P<0.05）,TAK1表达量升高而TRAF6表达量降低（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量显著增加（P<0.01）,两蛋白共定位于细胞质中;与LPS+DHLX组比较,其余各组IL-1β和IL-6表达量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,通路阻滞剂干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显降低（P<0.05）,通路阻滞剂联合DHLX干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显增加（P<0.05）,两蛋白在细胞质中存在共定位但不明显。结论 在LPS诱导的胆管细胞炎症反应中,TAK1与TRAF6相互结合呈减弱趋势,大黄灵仙方可逆转此现象,其作用机制可能与促进TAK1与TARF6的相互结合从而抑制NF-κB/MAPK信号通路活化有关。     

基于ICP-MS法的桂枝茯苓胶囊中无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立桂枝茯苓胶囊(GFC)中29种无机元素(Li、Be、B、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sn、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法 GFC样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中29种无机元素含量。结果待检测的29种无机元素在各的自线性范围内线性关系良好,r≥0.999 4;各元素的检出限在0.012~4.105μg/L,定量限在0.045~14.500μg/L,平均加样回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Na、Mg含量较高,均超过300μg/g;Fe、Mn、Sr含量也相对较高,而有害元素Be、As、Cd、Sb、Hg、Tl、Bi含量相对较低,均在0.030μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于GFC中无机元素的测定。     

10 Jahre Akupunktur mit Stoßwellen

In 2002, an already available shock wave device was modified according to my suggestions to enable its use for the stimulation of acupuncture points. Since then, the device has been used in the treatment of more than 1 000 patients.     

基于ICP-MS法的麝香保心丸中26种无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立麝香保心丸中26种无机元素(Li、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法麝香保心丸样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中26种无机元素的量。结果待检测的26种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 4,各元素的检出限在0.010~2.987μg/L,定量限在0.035~10.000μg/L,回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Mg、Na、Fe量较高,均超过1.000 mg/g;Mn、Cu、Zn、Al、Ga量也相对较高,而Sb、Hg、Tl、Bi量相对较低,均在0.050μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于麝香保心丸中无机元素的测定。     

基于ICP-MS法分析九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素(Li、Mg、Cd、Sn、Al、Mn、Fe、Ti、V、Co、Zn、Ga、Cr、Ni、Tl、Pb、Cu、As、Be、B、Sb、Ba、Sr、Hg、Bi)的测定方法。方法九味熄风颗粒样品经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法进行测定。结果检测的25种元素线性关系良好,相关系数R2≥0.999 2,各元素的检出限在0.009~16.051μg/L,回收率在70.75%~107.66%,RSD≤6.44%。测定的6批样品中Cr、Sn、Hg、Pb均未检出,Tl、Cd、As、Cu的量均较低或未检出,Cd≤0.011μg/g,Cu≤0.373μg/g,Tl≤0.021μg/g,As≤0.571μg/g。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于九味熄风颗粒中重金属及微量元素的测定。     

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定脉络宁注射液中25种矿物质元素

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)直接稀释测定脉络宁注射液中25种矿物质元素(Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V、As、Cd和Hg)的方法。方法分别对微波消解条件和测试条件进行考察;样品经微波消解后,采用电感耦合质谱仪测定25种矿物质元素,并对测定方法学进行考察。结果确定最佳消解条件为3步缓慢升温:400 W 80℃升温10 min,保留5 min;600 W 120℃升温10 min,保留5 min;900 W 200℃升温20 min,保留20 min;25种矿物质元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.999 6,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均符合定量分析要求;加标回收率为94.7%~106.1%,RSD在0.34%~2.79%。脉络宁注射液中检测出Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V,未检出As、Cd和Hg。结论该方法简便、迅速、准确,适用于脉络宁注射液中25种矿物质元素的同时测定。     

蜂蜜炼制前后黄酮类成分种类和含量变化分析

目的研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化。方法参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制。供试品经固相萃取法富集黄酮类成分。采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温30℃。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析。结果蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元。黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素。不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异。6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加。结论炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变。     

5th Asia Pacific ISSX Meeting Held on May 9-12, 2014, in Tianjin,China

正The 5th Asia Pacific ISSX Meeting was organized by International Society for Study of Xenobiotics(ISSX)and Chinese Society for Study of Xenobiotics(CSSX)and co-organized by Tianjin Institute of Pharmaceutical Research and Committee of Pharmaceutical Engineering of Chinese Pharmaceutical Association(CPECPA).Professor Changxiao Liu was a co-Chair of     

State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)

正The State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)was fbrmally established on January 25,2011 upon approval from the Ministry of Science and Technology of China.It is so far the only State Key Laboratory(SKL)specifically ill the field of TteditiMial Chinese Medicine(TCM)over the country.It is It also is also thejoined-laboratory the joined-labo]partner of the State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs at the Peking     

基于ICP-MS法分析银杏叶系列品种中25种无机元素

目的建立银杏叶制剂中25种无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同剂型银杏叶制剂中无机元素量进行比较分析。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定25种无机元素量,绘制无机元素指纹谱图,并进行方法学考察。结果 25种无机元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.950 0,精密度、稳定性和重复性试验的RSD值均符合定量分析要求;加样回收率为91.35%～108.86%,RSD在0.05%～4.45%。银杏叶制剂中检测了25种无机元素量,并绘制无机元素指纹图谱,发现其谱图具有一定的特征性;银杏叶片中元素Hg、Al、Cr的量较高,有害无机元素的量超标应引起关注。结论通过无机元素在银杏叶制剂中的组成分布及其量的变化规律研究,为银杏叶制剂的质量控制及安全性评价提供依据,同时为临床使用提供一定参考。