大鼠侧脑室注射血管紧张素Ⅱ抑制近曲小管Na+,K+-ATPase活性

目的探讨脑内血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对肾小管Na ,K -ATPase活性的作用及作用途径.方法雄性SD大鼠,麻醉下侧脑室注射人工脑脊液或AngⅡ(100ng),或先注射AngⅡ的1型受体(AT1)拮抗剂Losartan(10μg)后再注射AngⅡ(100ng).注射后30min取血,放射免疫分析法测定血清内源性洋地黄样物质(endogenous digitalis-like substance,EDLS)水平;立体显微镜下手工微分离单根近曲小管,电镜鉴定;以[γ-32P]ATP与近曲小管孵育后用液闪计数器测定标记磷酸的方法计算出近曲小管Na ,K -ATPase活性.结果与侧脑室注射aCSF的结果比较,在侧脑室注射AngⅡ后30min,血清EDLS水平显著升高(62.95±9.80vs.42.55±7.91pg/ml,P＜0.05);近曲小管Na ,K -ATPase活性显著降低(1285±157vs.2105±176pmol Pi /mm/h, P＜0.05);近曲小管Na ,K -ATPase活性下降幅度与血清EDLS升高幅度呈负相关,(r＝-0.918,P＜0.05) ;而Losartan预处理侧脑室再注射AngⅡ后30min,血清EDLS水平和近曲小管Na ,K -ATPase活性均无显著变化.结论脑内的AngⅡ通过AT1受体介导,促进EDLS释放,从而抑制肾小管的Na ,K -ATPase活性.     

大鼠正中视前核注射血管紧张素Ⅱ对近曲小管Na^＋，K^＋ -ATPase活性的影响

目的 探讨大鼠正中视前核(MnPO)的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾脏近曲小管Na+,K+-ATPase活性的作用及其途径.方法 雄性SD大鼠,麻醉下MnPO注射AngⅡ,或预先注射Ang Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂氯沙坦(Losartan)后再注射AngⅡ.注射后45min取血,放射免疫分析法测定血清内源性洋地黄样物质(EDLS)水平;立体显微镜下手工微分离单根近曲小管,电镜鉴定,液闪计数器测定近曲小管Na+,K+-ATPase活性.结果 与MnPO注射aCSF的结果比较,在MnPO注射AngⅡ后45min,血清EDLS水平显著升高(59.87±4.48)pg/mL vs.(42.86±4.0)pg/mL,P<0.05;近曲小管Na+,K+-ATPase活性显著降低(1327±127)pmol Pi/mm/h vs.(1788±118)pmol Pi/mm/h,P<0.05;近曲小管Na+,K+-ATPase活性下降幅度与血清EDLS升高幅度呈负相关(r=-0.945,P<0.05);而Losartan预处理MnPO再注射AngⅡ后45min,血清EDLS水平和近曲小管Na+,K+-ATPase活性均无显著变化.结论 AngⅡ通过作用于MnPO的Ⅰ型受体(AT1),可抑制肾小管的Na+,K+-ATPase活性,AngⅡ的这一作用与其促进EDLS的释放有关.     

大鼠AV3V注射血管紧张素Ⅱ对近球小管Na+,K+-ATP酶活性的影响

目的探讨大鼠第三脑室前腹侧区(AV3V)肾素-血管紧张素系统(RAS)对近球小管Na ,K -AT-Pase活性的影响及作用途径.方法用小动物脑立体定位仪在大鼠AV3V埋植钢管供中枢注射,放射免疫法测定血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及血清内源性洋地黄样物质(EDLS)浓度,立体显微镜下手工微分离近球小管,液体闪烁计数器测定标记磷酸Ⅱ的方法检测近球小管Na ,K -ATPase活性.结果①与AV3V注射人工脑脊液(aCSF)的结果比较,AV3V注射AngⅡ后,血浆AngⅡ水平无显著变化,血清EDLS水平显著升高,近球小管Na ,K -AT-Pase活性显著下降.②在AV3V注射沙拉新后,血浆AngⅡ水平无显著变化,血清EDLS水平显著降低,近球小管Na ,K -ATPase活性显著增加.结论AngⅡ作用于AV3V的AngⅡ受体,引起近球小管Na ,K -ATPase活性降低,AngⅡ的这一作用可能与促进EDLS的释放有关.     

糖尿病大鼠早期EDLF和肾皮质Na+,K+-ATPase活性的变化

目的探讨大鼠糖尿病早期肾功能、内源性洋地黄样因子(endogenous digitalis-like factor,EDLF)含量以及肾皮质Na ,K -ATPase活性的变化.方法实验用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,用放射免疫方法测定血清和尿EDLF浓度以及尿白蛋白含量,以比色法测定肾皮质Na ,K -ATPase活性.结果糖尿病组大鼠血糖、尿量、尿白蛋白、肌酐清除率、肾重/体重和血、尿EDLF的浓度与正常对照组相比均显著升高,而肾皮质Na ,K -ATPase活性则显著下降.胰岛素治疗后,除肾皮质Na ,K -ATPase活性升高外,糖尿病大鼠的上述指标均显著下降.结论糖尿病早期肾皮质Na ,K -ATPase活性降低,可能与EDLF释放增多有关.胰岛素治疗可抑制EDLF的释放从而提高肾皮质Na ,K -ATPase活性.     

神经肽Y及其Y2受体表达在糖尿病肾病中的变化及作用

目的 探讨神经肽Y(NPY)及其Y2受体(Y2R)表达、Na+,K+-ATPase活性在大鼠糖尿病肾病(DN)中的变化及作用.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组和糖尿病组(2周和4周组);采用放射免疫法测定血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法 检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法 检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重/体重和肾皮质Na+,K+-ATPase活性.结果 ①注射STZ诱导糖尿病发生2周、4周后,糖尿病组大鼠血糖、UAER和肾重/体重的显著高于正常对照组;②与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血浆和肾皮质的NPY水平和Na+,K+-ATPase活性显著升高(P＜0.01);③糖尿病组大鼠肾皮质的NPY mRNA和Y2R蛋白表达显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 糖尿病大鼠早期NPY、Y2R的表达和Na+,K+-ATPase活性的异常改变可能在糖尿病肾病的发生、发展过程中具有重要作用.     

侧脑室注射高钠脑脊液对内源性洋地黄样因子释放和肾Na+·K+-ATP酶活性的影响

目的和方法实验用SD大鼠,侧脑室注射高钠人工脑脊液(含NaCl 0.8M/L)或高渗蔗糖人工脑脊液(含蔗糖0.8M/L)后,测定血清内源性洋地黄样因子(Endogenous digitalis-like factor,EDLF)浓度和肾皮质Na+·K+-ATP酶(Na+·K+-ATPase)活性.结果①大鼠侧脑室注射高钠人工脑脊液后大鼠血清EDLF浓度明显升高(注射前42.34±10.37 pg/ml,注射后68.05±11.91 pg/ml,P＜0.01),侧脑室注射高渗蔗糖人工脑脊液后血清EDLF浓度无明显变化(注射前41.54±11.07 pg/ml,注射后43.03±9.58pg/ml).②侧脑室注射高钠人工脑脊液后,肾皮质Na+·K+-ATPase活性显著低于对照组(P＜0.01);而注射高渗蔗糖人工脑脊液后,肾皮质Na+·K+-ATPase活性为与对照组相比无明显差异.③大鼠肾皮质Na+·K+-ATPase活性与血清EDLF浓度呈负相关关系,相关系数-0.746(P＜0.001).结论脑室内高钠刺激可引起EDLF的释放增加并抑制肾皮质Na+·K+-ATPase活性.     

DJB术对2型糖尿病大鼠肠神经GLP-1受体表达影响的研究

目的 研究十二指肠空肠旁路手术(duodenal jejunal bypass,DJB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肠神经细胞胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)表达的影响,探讨DJB手术后肠神经GLP-1R表达、血清GLP-1分泌变化与血糖的关系。方法 雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组8只：Wistar 大鼠对照组(W-C);Wistar 大鼠DJB手术组(W-DJB);T2DM模型对照组(T2DM-C);T2DM+DJB手术组(T2DM-DJB)。分别测定各组大鼠术前及术后第1、4、8周空腹血糖、空腹GLP-1,术前及术后第8周空腹胰岛素水平。术后第8周处死大鼠,免疫荧光、RT-PCR检测回肠末端肠肌间神经丛GLP-1R表达变化。结果 T2DM-DJB组大鼠肠神经丛表达GLP-1R的细胞数目为15.83±2.23,明显高于T2DM-C组大鼠表达GLP-1R的细胞数目8.50±2.67(P＜0.01); GLP-1R mRNA在T2DM-DJB组大鼠肠神经丛表达水平为0.67±0.08,明显高于T2DM-C组大鼠GLP-1R mRNA的表达水平0.42±0.03(P＜0.01); T2DM-DJB组大鼠术后空腹血糖、空腹胰岛素显著降低(P＜0.01),空腹血清GLP-1显著升高(P＜0.01)。W-DJB组大鼠术后GLP-1R表达水平、空腹血糖、空腹胰岛素和空腹血清GLP-1与W-C组大鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DJB手术能显著降低T2DM大鼠血糖,对正常大鼠无明显作用。     

灯盏花素对大鼠糖尿病早期的肾脏保护作用

目的探讨灯盏花素对大鼠糖尿病早期肾脏的保护作用及其对。肾近球小管Na^＋，K^＋-ATPase活性的影响。方法将链脲佐菌素诱导的DM大鼠分为模型组（DM组）和灯盏花素治疗组（BR组），另设正常对照组（NC组）。BR组给予腹腔注射灯盏花素盐水注射液20mg／（kg·d），NC组和DM组大鼠给予同体积的生理盐水。4周后麻醉下行双侧输尿管插管，收集半小时尿并行心脏穿刺取血，测定尿量，检测血糖（BG）和血、尿肌酐，放免法（RIA）测定尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白及血清内源性洋地黄样物质，计算尿白蛋白排泄率和肌酐清除率。取双肾称重并计算肾脏肥大指数。在体视显微镜下手工分离单根胛，用液闪法测其Na^＋，K^＋-ATPase活性。结果DM组BG、尿量、肾脏肥大指数、尿β2-MG、UAER、Ccr及胛的Na^＋，K^＋-ATPase活性与NC组相比均显著性升高（P〈0．01），而血清EDLS水平则显著性下降（P〈0．01）；灯盏花素治疗后，血清EDLS水平显著性升高（P〈0．01），其他指标均明显下降（P〈0．05）。结论灯盏花素对DM大鼠肾脏有明显的保护作用，其机制可能部分与下调PT的Na^＋，K^＋-ATPase活性有关。     

葛根素对糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激及ATP酶的影响

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激及ATP酶的影响。方法将30只Wistar大鼠分为正常对照组、糖尿病组（DM组）和糖尿病治疗组（Pue组,采用葛根素注射液治疗）,前两组注射等体积的0.9%氯化钠溶液。8周后,测3组大鼠血清葡萄糖、胰岛素、胰腺线粒体丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）、Na^＋-K^＋-ATP酶（Na^＋-K^＋-ATPase）和Ca^2＋-ATP酶（Ca^2＋-ATPase）的活性。结果（1）DM组大鼠血糖和MDA含量明显高于对照组（P〈0.001）,而血清胰岛素水平、SOD、Na^＋-K^＋-ATPase和Ca^2＋-ATPase活性显著降低（P〈0.05）。（2）Pue组大鼠血糖及MDA含量较DM组显著降低（P〈0.05）,血清胰岛素水平、SOD、Na^＋-K^＋-ATPase和Ca^2＋-ATPase活性显著升高（P〈0.05）,差别有统计学意义。结论葛根素可减轻糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激水平。     

门冬胰岛素联合二甲双胍对2型糖尿病患者血清CRP及胰岛素抵抗的影响

目的:观察门冬胰岛素联合二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)患者血清C反应蛋白及胰岛素抵抗的影响.方法:81例T2DM患者随机分为胰岛素组(A组)和胰岛素+二甲双胍组(B组),分别给予胰岛素及胰岛素联合二甲双胍,疗程共12周.另外,选择体检中心健康志愿者20例作为对照组(C组).所有对象均检测治疗前后空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h BG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbAlc)、C反应蛋白水平,用HOMA公式计算胰岛素抵抗指数(IR),观察胰岛素联合二甲双胍对T2DM患者血清C反应蛋白及胰岛素抵抗的影响.结果:A、B两组患者治疗后血糖均控制良好,与对照组相比,血清C反应蛋白和IR均明显下降(P＜0.05,P＜0.01);与A组相比,B组血清C反应蛋白和IR明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:门冬胰岛素联合二甲双胍不仅可良好控制T2DM患者血糖,还降低血清C反应蛋白水平,改善胰岛素抵抗.     

山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病大鼠肾形态学及其Na+,K+-ATP酶活性的影响

目的：从形态学及蛋白酶的角度探讨山茱萸环烯醚萜总苷（ICO）防治糖尿病肾病（DN）的作用。方法：腹腔注射链脲佐菌素造成糖尿病大鼠模型，将造模成功的大鼠按血糖值随机分为模型组、氨基胍组和ICO组，同期另没一正常组，各组连续灌胃12周。实验结束后用光镜观察肾形态学变化，试剂盒测定肾组织细胞膜Na^＋，K^＋-ATP酶的活性。结果：模型组大鼠肾脏光镜检查肾小球和肾小管病变明显。而且肾组织细胞膜Na^＋，K^＋-ATP酶活性低于正常组。而ICO组病变明显减轻，表现出较好的抗肾小球内基质增生、抗肾小管坏死和改善Na^＋，K^＋-ATP酶活性等作用。结论：ICO可改善糖尿病大鼠肾组织形态学病变及修复Na^＋，K^＋-ATP酶活性，对DN所引起的结构和功能改变都具有一定的防治作用。     

敌敌畏急性中毒小鼠脑ATP酶的活性检测

目的 观察小鼠敌敌畏急性中毒后脑组织各区域的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶的活性水平，探讨敌敌畏中毒对中枢神经系统的影响。方法雄性小鼠16只．随机分成中毒组和对照组，中毒组按25mg／kg腹腔注射敌敌畏，对照组注射生理盐水。25min后处死，分别测定大脑、小脑和脑干组织内的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶、N^a＋／K^＋-ATP酶的活性水平。结果脑组织中的ATP酶的活性水平都有不同程度的降低。在小脑，敌敌畏中毒组的两种ATP酶活性分别是对照组的62．11％。47．56％。在脑干，中毒组的两种ATP酶活性分别是对照组的67．72％，64．83％。在大脑的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶活性水平有下降。但两组相比无统计学差异性。结论敌敌畏中毒引起脑组织Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶活性水平降低．共同导致脑细胞内钙稳态失衡。影响了神经递质的释放。     

Na~+/K~+-ATP酶α1亚单位小干扰RNA和哇巴因诱导肝癌HepG2细胞S期阻滞及其机制

目的 观察哇巴因联合Na~+/K~+-ATP酶(钠泵)α1亚单位小干扰RNA(siRNA)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.方法 分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织和肝癌细胞系SMC7721、Bel7402和HepG2细胞钠泵α1亚单位的表达.CCK-8法检测采用钠泵α1亚单位siRNA和哇巴因作用肝癌HepG2细胞增殖抑制状况,分析各组细胞的钠泵活性变化,流式细胞术分析细胞周期变化.实时定量PCR和蛋白质印迹法检测钠泵α1、促分裂源活化蛋白激酶1(MAPK1)、细胞围期蛋白1(CyclinA)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白抑制因子(P21~(WSF1))表达的变化.结果 肝癌组织标本的钠泵α1亚单位密度值(174.7±16.8)明显高于正常肝组织(65.3±7.9,P<0.05);HepG2细胞钠泵α1亚单位表达明显高SMMC-7721和Bel-7402细胞(P<0.05).siRNA、哇巴因和联合用药可抑制HepG2细胞的增殖,联合实验组效果更显著(P<0.05),0.03μmol/L siRNA组、0.1 μmol/L哇巴因和联合实验组细胞24、48和72 h抑制率分别为17.4%、20.3%、24.3%,37.5%、44.3%、51.2%,52.3%、70.2%、88.2%.各实验组均出现钠泵活性降低,以联合实验组最显著(P<0.05).0.1 μmol/哇巴因和联合实验组HepG2细胞S期比例从24.2%上升至66.5%和75.2%;实时定量PCR和蛋白质印迹检测显示哇巴因组和联合实验组P21<'WAF1>表达上调而钠泵μ1亚单位、MAPK1、CyclinA、CDK2和PCNA表达下调.结论 钠泵α1亚单位siRNA联合哇巴因抑制HepG2细胞钠泵后可抑制细胞增殖,而P21~(WAF1)表达上调和CyclinA/CDK2/PCNA周期调控复合体生成减少可能是引起S期阻滞的主要原因.     

EFFECTS OF ISCHEMIA ON CEREBRAL Na~+, K~+-ATPase ACTIVITY IN THE RABBITS SUBJECTED TO MCAo

Changes in the activity of Na~+, K~+-ATPase and in the water, sodium, and potassium levels in the ischemic brain were investigated in rabbits 2, 4, and 24h following occlusion of middle cerebral artery (MCAo) and in shamoccluded control. An increase in Na~+, K~+-ATPase activity was observed in 2h and 4h groups, with a subsequent decrease in the enzyme activity. The elevation in Na~+, K~+-ATPase activity was accompanied by an increase in the sodium content and a slight decrease in the potassium content. These changes are presumed to occure because of stimilated active transport of sodium from blood to brain across the brain capillaries. We suggest that the elevated activity of Na~+, K~+-A TPase may participate in the pathogenesis of ischemic brain edema.     

再生障碍性贫血红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性变化

用酶学比色法测定10例再生障碍性贫血慢性期患者红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性,结果为每小时2.577±0.86微克分子磷/毫克蛋白(均值±标准差),明显高于正常组。红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性与糖酵解相偶联。再障慢性期(Na~+·K~+)-ATP酶活性升高,可作为病情变化的辅助指标。     

肉桂醛对糖尿病大鼠腓肠肌IRS-1和P85α表达的影响

目的:研究肉桂醛(Cin)降糖调脂作用及其对胰岛素受体底物1(IRS-1)和磷脂酰肌醇3激酶调节亚基P85α的影响。方法:Wistar大鼠,雄性,随机分为3组:正常对照组、糖尿病组(T2DM,高脂饮食诱导8周后,腹腔注射35mg/kg链脲佐菌素建立的糖尿病大鼠模型)和Cin+糖尿病组[T2DM+Cin,肉桂醛40mg/(kg·d),灌胃]。药物干预4周后,观察一般情况,检测体重、血糖血脂、胰岛素,采用免疫组化检测大鼠腓肠肌IRS-1和P85α蛋白水平。结果:实验末,T2DM+Cin组体重、血糖、胰岛素、甘油三酯、低密度脂蛋白均显著低于T2DM组(P<0.01),高密度脂蛋白高于T2DM组(P<0.05);T2DM+Cin组腓肠肌的IRS-1高于T2DM组,P85α低于T2DM组,差别有统计学意义(P<0.05)。结果:肉桂醛的降糖调脂作用可能与升高糖尿病大鼠腓肠肌中IRS-1和降低P85α水平有关。     

2型糖尿病大鼠模型的制备与评价

目的建立SD2型糖尿病（T2DM）模型方法及特点分析,且具有胰岛素抵抗特征的T2DM动物模型。方法 120只SD雄性大鼠随机分为对照组和实验组。实验组90只雄性大鼠采用高脂高糖膳食喂养4周,诱发胰岛素抵抗,第1次腹腔注射链脲佐菌素（STZ,30mg/kg）,再第4周后第2次注射STZ（40mg/kg）,大鼠失去胰岛素代偿性分泌能力,诱发高血糖症。对照组30只用普通饲料喂养。统计实验组大鼠成模率和死亡率。比较分析随机血糖、空腹血清胰岛素及胰岛素敏感性指数（ISI）。结果实验组T2DM动物成模率为81.9%,死亡率为18.1%,随机血糖为（17.19±6.07）mmol/L,空腹血清胰岛素与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,而ISI显著低于正常对照组（P〈0.05）。结论高脂、高糖饮食加2次STZ注射能够成功制备T2DM大鼠模型,可以用于研究T2DM发病机制和胰岛素抵抗。     

短期胰岛素泵强化治疗对初诊2型糖尿病患者血清乳酸脱氢酶的影响

目的:观察初诊2型糖尿病(T2DM)患者血清乳酸脱氢酶(LDH)的水平,及经短期胰岛素泵强化(CSII)治疗后血清LDH的变化,并探讨其变化与胰岛素抵抗的相关性。方法:选取正常糖耐量者(NGT)36例,初诊T2DM患者37例,T2DM组于治疗前后均行口服75 g葡萄糖耐量试验(OGTT),检测各点静脉血浆葡萄糖及胰岛素,并检测血脂、血清LDH等相关代谢指标。结果:①T2DM组血清LDH水平(177.92±43.01)U/L明显高于NGT组(160.97±19.43)U/L,差异有统计学意义(t=2.130,P<0.05)。②T2DM组经CSII强化治疗2周后空腹血糖(FPG)及餐后2 h血糖(2hPG)均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。同时稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著下降[2.00(1.35～2.61)vs 1.30(0.91～1.80)]。早相胰岛素分泌(△INS30/△G30)及晚相胰岛素分泌(△INS120/△G120)均明显升高[(1.11±0.95)vs(2.25±2.14),(1.22±1.14)vs(3.57±3.06)],差异均有统计学意义(P<0.05),血清LDH水平显著下降,差异有统计学意义(t=2.397,P<0.05)。③Pearson相关分析显示,T2DM组血清LDH水平与HO-MA-IR成正相关(r=0.359,P<0.05)。④多元逐步回归分析显示,HOMA-IR是影响血清LDH的独立相关因素。结论:初诊T2DM患者经短期CSII强化治疗后胰岛素抵抗及β细胞功能明显改善,同时血清LDH水平显著下降,血清LDH水平与胰岛素抵抗呈正相关。