精细胞及血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA及其负链检测

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对８例慢性丙型肝炎患者的血浆、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、精液和精细胞中的正链和负链丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行检测，以了解ＨＣＶ在肝外细胞中是否存在，有否复制。结果血浆中正链ＨＣＶＲＮＡ均阳性，而负链ＨＣＶＲＮＡ全部阴性；ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ阳性者５例，其中２例检出负链ＨＣＶＲＮＡ。在３例留取精液的患者中１例精液和精细胞中检出正链ＨＣＶＲＮＡ。精细胞未次洗液ＨＣＶＲＡＮ阴性，精细胞负链ＨＣＶＲＮＡ阴性。上述结果提示：（１）血浆中可能仅有正链ＨＣＶＲＮＡ存在；（２）ＨＣＶ可在ＰＢＭＣ中存在，并可能在其中复制；（３）精液中有ＨＣＶ存在，因此通过性交传播丙型肝炎的可能性确实存在，但ＨＣＶ可能不在精细胞中复制     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

肝炎病人血清、外周血单核细胞及肝脏中GBV-C/HGV负链RNA的检测

目的：研究２７例肝炎病人血清、外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）及肝脏中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链及负链ＲＮＡ（复制中间体）的存在状况。方法：应用逆转录－巢式多聚酶链反应技术检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正、负链ＲＮＡ。结果：２７例病人中２１例病人血清、７例ＰＢＭＣ、１０例肝组织中检测到ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链ＲＮＡ,其中２例单一ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者肝组织中检测到负链ＲＮＡ,在２７例病人血清及ＰＢＭＣ中均未检测到负     

外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒感染与细胞表面HLA—I类抗原表达的关系探讨

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)属嗜肝ＤＮＡ病毒 ,主要侵犯肝脏 ,但目前在肝外组织和细胞中也发现ＨＢＶ的存在 ,特别在外周血单个核细胞 (ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌ,ＰＢＭＣ)中阳性率更高。ＰＢＭＣ为免疫活性细胞群体 ,ＨＢＶ感染ＰＢＭＣ对机体免疫功能的影响尚未阐明。我们就ＰＢＭＣ中ＨＢＶ感染与其表面ＨＬＡ Ｉ类抗原表达的关系进行了研究 ,探讨ＰＢＭＣ中ＨＢＶ感染在乙型肝炎慢性化及向肝癌恶性转化中的作用。一、对象与方法1 .对象 :自 2 0 0 1年 1 1月至 2 0 0 2年 4月在山东大学齐鲁医院消化内…     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的；了解慢性丙型肝炎患的血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应技术检测１２４例慢性丙型肝炎患的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗－ＨＣＶ及血浆ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的患中有２１例（３０％）的患其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶ ＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶ ＲＮＡ负链，在５４例抗－ＨＣＶ阳性，血浆ＨＣＶ ＲＮＡ阴性的患中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶ     

抗-HCV阴性献血员丙肝病毒感染及意义

目的：探讨抗－ＨＣＶ阴性献血员隐匿性ＨＣＶ感染情况。方法：采用逆转录套式ＰＣＲ检测１００例抗ＨＣＶ阴性献血员血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果：血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性２例,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性６例;有１例血清及ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论：抗－ＨＣＶ阴性的献血员中仍有少数存在ＨＣＶ输血传播的可能,对献血员仅筛查抗－ＨＣＶ是不够的,应对血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ及其Ｔ淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示８例（４０．０％）ＨＣＶ患者的ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性结果。ＨＣＶ－ＲＮＡ呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。ＨＣＶ－ＲＮＡ阳     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV—RNA检测

目的：了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ存在情况及其意义。方法：采用套式ＰＣＲ检测３８例急性丙肝炎和３６例慢性丙型肝炎患者血清和外周血ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ《结果：７４例丙型肝炎血清ＨＣＶＲＮＡ阳性６８例,ＰＢＭＣ阳性４４例;急性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（３９．５％）,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中阳性２９例（８０．６％）。慢性丙型肝炎患者ＰＢＭ     

多聚酶链反应检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的HBVDNA

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了６９例乙型肝炎患者（其中慢性迁延性肝炎１７例，慢性活动性肝炎２３例，肝炎后肝硬化１２例，重症乙肝１７例）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶＤＮＡ存在状态。结果显示，ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ总阳性率为４６％，而各型乙肝间ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢＶ对ＰＢＭＣ的感染，似与乙型肝炎的临床类型无明显的相关性。     

应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个核细胞中HBV－DNA

本文应用多聚酶连反应（ＰＣＲ）技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。因此，在检测血清ＨＢＶ标志物及ＨＢＶ－ＤＮＡ的同时检测ＰＢＭＣ中的ＨＢＶ－ＤＮＡ可进一步防止ＨＢＶ传播与输血后肝炎的发生。     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV.DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ．ＤＮＡ阳性率分别为７６．７％和４５％，尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳性或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ．ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高血清，提示ＨＢＶ．ＤＮＡ普遍存在乙肝患者甚至ＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病病变反复活动及病毒重复感染的来源。因此也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传     

HBV感染者外周血白细胞和血清内HBV—DNA检测及其意义

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）发病机理与机体免疫状态关系密切,乙肝病毒（ＨＢＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）会直接影响机体免疫功能,并可隐藏ＨＢＶ,造成复发,因此ＰＢＭＣ内ＨＢＶ检测具有重要临床意义。由于血清学方法不能直接判断ＰＢＭＣ感染ＨＢＶ,我们...     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV·DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ·ＤＮＡ，阳性率分别为７６．７％与４５％。尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳生或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ·ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高于血清。提示ＨＢＶ·ＤＮＡ普遍存在于乙肝患者甚ＩＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病变反复活动及病毒重复感染的来源．因而也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传播ＨＢＶ的可能。     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

乙型肝炎病毒毒株X基因/C基因启动子的热点变异

目的ＨＢＶ／Ｘ基因存在调控ＨＢＶ复制的调节序列,Ｘ基因变异将影响这些调节序列功能,研究中国ＨＢＶ毒株Ｘ基因／Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区的变异情况。方法设计ＢＣＰ下游反义链错配引物,将点突变附近的一个碱基（ｎｔ１７６７）由Ａ→Ｔ,则正好可在ＢＣＰ变异株中引进一个ＢｃｌＩ（Ｔ↓ＧＡＴＣＡ）酶切位点,结合限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ）筛检１４３例中国人感染的ＨＢＶ毒株ＢＣＰ区变异,并与前Ｃ区变异比较。结果１１４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性ＨＢＶ感染者,ＢＣＰ区和／或前Ｃ区变异者４９例（４３％）,ＢＣＰ变异者３７例（３２％）。ＢＣＰ变异无论在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性慢性肝炎病例的发生率均显著高于慢性ＨＢＶ无症状感染者。ＢＣＰ可与前Ｃ终码变异共存或单独出现。结论在中国ＨＢＶ毒株ＢＣＰ区存在热点变异。ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能影响ＨＢＶ前Ｃ基因组ｍＲＮＡ转录,是ＨＢＶ感染持续和肝病变进展的原因之一。     

慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞HBV DNA的PCR检测

①目的 探讨慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染情况及其临床意义。②方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１２８例慢性乙型肝炎病人和２０例健康人进行了ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶＤＮＡ检测。③结果 慢性乙型肝炎病人ＰＢＭＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ的感染率为６４．２％,和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染率具有一致性倾向（Ｘ＾２－０．６３,Ｐ〉０．０５）,慢性肝病病     

α－干扰素对外周血单个核细胞中HBVDNA的清除作用

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法动态观来了α－干扰素治疗的６例慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的清除情况。血清ＨＢＶＤＮＡ在治疗５周后（３－１０周）６例转阴，其中２例在结束治疗时复转阳性，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ在治疗１５周（１２－２０周）时５例转阴，１例始终阳性，并出现ＡＬＴ复升高。结果显示α－干扰素能清除ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ，但滞后于血清病毒的清除，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ持续阳性，可能使治疗中期效果较差。     

丙型肝炎病毒准种在单个核细胞和肝细胞内的分隔性分布

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）对单个核细胞感染在ＨＣＶ感染慢性化中的作用。方法通过对ＨＣＶ高度变异区（ＨＶＲ）基因的体外扩增后产物的直接测序,比较慢性丙型肝炎和接受肝移植的肝硬化患者血清、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、肝脏相关的单个核细胞（ＬＡＭＣ）和肝脏中ＨＣＶ准种（ｑｕａｓｉｓｐｅｃｉｅｓ）的分布。结果（１）３例肝移植和５例慢性肝炎患者ＰＢＭＣ中的主要ＨＣＶ准种不同于肝脏中的ＨＣＶ;（２）３例患者的ＰＢＭＣ和ＬＡＭＣ中ＨＶＲ有不同的基因替代;（３）ＨＶＲ基因的核苷酸突变主要位于Ｅ２基因的前５０个氨基酸内。结论（１）单个核细胞中的ＨＣＶＲＮＡ是由于ＨＣＶ的感染所致;（２）ＨＣＶ准种在肝细胞和单个核细胞中的分隔性分布可能与ＨＣＶ感染的慢性化密切相关。     

HBV侵入PBMC后对乙肝患者细胞免疫功能的影响

为探讨ＨＢＶ侵入ＰＢＭＣ后对乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能的影响，本文应用ＰＣＲ技术和生物素—链霉亲合素（ＢＳＡ）系统分别检测９７例乙肝患者的外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）内ＨＢＶ—ＤＮＡ和ＣＯ＋３、ＣＯ＋４、ＣＯ＋８、ＣＯ＋４／ＣＯ＋８及经ＰＨＡ诱导前后膜白介素—２受体（ｍＩＬ—２Ｒ）的表达水平。结果显示乙型病毒性肝炎患者Ｔ细胞亚群及ｍＩＬ—２Ｒ水平与正常对照相比较，均显著降低（Ｐ＜０．０１）。ＰＢＭＣ内ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性组与阴性组相比较，ＣＯ＋３、ＣＯ＋４百分率降低、ＣＤ＋８百分率增高、ＣＯ＋４／ＣＯ＋８比值下降及ｍＩＬ—２Ｒ表达水平低下，二组差别有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。说明乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能明显低下，ＨＢＶ感染ＰＢＭＣ后可引起乙肝患者的细胞免疫功能紊乱     

甲型肝炎患者PBMC中HAV-Ag的APAAP检测法及HAV-Ag检出的意义

目的 建立检测甲肝患外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中甲肝病毒抗原（ＨＡＶ－ＡＧ）的ＡＰＡＡＰ方法,并对５２例甲肝患ＰＢＭＣ中ＨＡＶ－Ａｇ进行动态。方法 应用抗ＨＡＶ－ＭｃＡｂ,着抗鼠ＩｇＧ及ＡＰＡＡＰ建立了三层重叠的ＡＰＡＡＰ法,对５２例甲肝患急性期及恢复期ＰＢＭＣ进行动态检测,对ＨＡＶ－Ａｇ阳性率及平均阳性细胞百分率及其与甲肝病程的相关关系进行了分析。结果 替代试验及阴断试验证明本方法特异性