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圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达
引用本文:邬敏辰,朱吉,黄伟达,孙崇荣.圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达[J].食品与生物技术学报,2002,21(3):218-223.
作者姓名:邬敏辰  朱吉  黄伟达  孙崇荣
作者单位:1. 江南大学医学系,江苏,无锡,214063
2. 复旦大学,生命科学学院,上海,200433
基金项目:国家“九五”科技攻关项目 (96 C0 3 0 2 0 1)资助课题
摘    要:圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .

关 键 词:圆弧青霉PG37  碱性脂肪酶  克隆  表达
文章编号:1009-038X(2002)03-0218-06
修稿时间:2001年11月18

Cloning and Expression of the Gene Encoding Alkaline Lipase from Penicillium cyclopium
WU Min chen,ZHU Ji,HUANG Wei d,SUN Chong rong.Cloning and Expression of the Gene Encoding Alkaline Lipase from Penicillium cyclopium[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2002,21(3):218-223.
Authors:WU Min chen  ZHU Ji  HUANG Wei d  SUN Chong rong
Affiliation:WU Min chen 1,ZHU Ji 1,HUANG Wei da 2,SUN Chong rong 2
Abstract:
Keywords:Penicillium cyclopium  PG37  alkaline lipase  cloning  expression
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