| 改良型TAT-凋亡素体外抗人膀胱肿瘤活性的研究 |
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| 引用本文： | 王春晖,王剑松,詹辉,李鸿钧,丁明霞,颜汝平,柯昌兴,徐鸿毅.改良型TAT-凋亡素体外抗人膀胱肿瘤活性的研究[J].中国肿瘤临床,2011,38(5). |
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| 作者姓名： | 王春晖 王剑松 詹辉 李鸿钧 丁明霞 颜汝平 柯昌兴 徐鸿毅 |
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| 作者单位： | 1. 昆明医学院第二附属医院泌尿外科,云南省泌尿外科研究所,昆明市650101
2. 中国医学科学院,北京协和医学院医学生物学研究所 |
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| 摘 要： | 目的:探讨改良型TAT-凋亡素(TAT-VP3)融合基因在不同人膀胱癌细胞中的表达及诱导凋亡的效应.方法:利用改良型TAT-VP3原核表达载体pGEX-6p-1-TAT-VP3构建真核表达载体PcDNA3-TAT-VP3,经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定和基因测序无误后采用脂质体介导的基因转染法转染人膀胱癌BIU-87及EJ细胞,利用RT-PCR技术检测改良型TAT-VP3基因在细胞中的表达状况.通过透射电镜扫描观察转染后不同时段肿瘤细胞的超微结构变化,MTT法检测转染重组质粒后对人膀胱癌细胞的增殖活性的影响,流式细胞术TUNAL法检测转染重组质粒24、48、72h后BIU-87及EJ细胞的凋亡率,对实验结果进行统计学分析.结果:成功构建重组质粒PcDNA3-TAT-VP3并经测序无误,转染人膀胱癌细胞后的RT-PCR结果证实改良型TAT-VP3基因在人膀胱癌细胞中获得表达.透射电镜观察到BIU-87及EJ细胞凋亡早期染色质聚集,线粒体固缩,凋亡中晚期核固缩及凋亡小体等超微形态学改变.MTT法检测结果显示转染重组质粒PcDNA3-TAT-VP3后的BIU-87及EJ细胞增殖活性明显下降(P<0.01).流式细胞术TUNAL法检测显示BIU-87及EJ细胞发生早期凋亡,其凋亡率随时间的推移呈逐渐上升趋势,转染72 h后BIU-87和EJ细胞的凋亡率分别为(30.44±1.47)%、(42.27±2.66)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:改良型TAT-VP3基因的表达能早期、高效地诱导不同人膀胱癌细胞发生凋亡,为纯化改良型TAT-VP3融合蛋白以及将其应用于膀胱灌注治疗膀胱转移肿瘤的研究奠定实验基础.
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| 关 键 词： | 细胞凋亡 VP3蛋白 膀胱肿瘤 |
Anti-cancer Effect of Improved TAT-VP3 Gene on Human Bladder Cancer in Vitro |
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| Chunhui WANG,Jiansong WANG,Hui ZHAN,Hongjun LI,Mingxia DING,Ruping YAN,Changxing KE,Hongyi XU.Anti-cancer Effect of Improved TAT-VP3 Gene on Human Bladder Cancer in Vitro[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2011,38(5). |
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| Authors: | Chunhui WANG Jiansong WANG Hui ZHAN Hongjun LI Mingxia DING Ruping YAN Changxing KE Hongyi XU |
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